李安　何漢康　陳劍

【摘要】 目的：探討冠心病患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)T細(xì)胞（Treg）水平的變化及意義。方法：選取筆者所在醫(yī)院接診冠心病患者108例，根據(jù)診斷結(jié)果分為36例穩(wěn)定型心絞痛（SAP）組、38例急性心肌梗死（AMI）組、34例不穩(wěn)定型心絞痛（UAP）組，另選取30例健康體檢者作為對照組，分別行流式細(xì)胞儀測定外周血CD4+CD25+Treg水平與冠脈造影。結(jié)果：冠心病各組外周血CD4+CD25+Treg測定結(jié)果明顯低于對照組，AMI組外周血CD4+CD25+Treg測定結(jié)果低于SAP組、UAP組，UAP組外周血CD4+CD25+Treg測定結(jié)果低于SAP組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；外周血CD4+CD25+Treg與冠脈狹窄病變支數(shù)呈負(fù)相關(guān)，與GENSINI積分呈負(fù)相關(guān)（P<0.01）。結(jié)論：不同冠心病患者外周血CD4+CD25+Treg水平有顯著變化，且與冠心病病變程度呈負(fù)相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 冠心病； CD4+CD25+調(diào)節(jié)T細(xì)胞； 相關(guān)性

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.12.030 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2017）12-0054-03

調(diào)節(jié)T細(xì)胞（Treg）是一組具有免疫抑制功能的T細(xì)胞亞群，CD4+CD25+Treg作為該家族中非常重要的成員，其主要來自胸腺中的幼稚T細(xì)胞。已有大量研究證實CD4+CD25+Treg與感染、腫瘤、過敏反應(yīng)等多種疾病均直接相關(guān)[1]。目前，認(rèn)為心血管發(fā)生、發(fā)展與免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)均直接相關(guān)，故推測冠心病可能與CD4+CD25+Treg水平變化存在相關(guān)性。鑒于此，本研究擬選取不同類型冠心病患者，對其CD4+CD25+Treg水平進(jìn)行測定，旨在了解冠心病與CD4+CD25+Treg的關(guān)系，同時進(jìn)一步明確冠心病的可能機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

自筆者所在醫(yī)院2015年1月-2016年6月接診的冠心病患者中選取108例作為研究對象，所有患者均根據(jù)世界衛(wèi)生組織頒布的冠心病臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)確診。其中36例為穩(wěn)定型心絞痛（SAP）、38例為急性心肌梗死（AMI）、34例為不穩(wěn)定型心絞痛（UAP）。另從同期健康體檢人群中選取30例作為健康對照組。四組一般資料及外周淋巴細(xì)胞計數(shù)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 外周血CD4+CD25+Treg測定 （1）標(biāo)本采集：入組后于次日清晨取空腹靜脈血，每例取2 ml，行肝素抗凝處理，在標(biāo)本采集后4 h內(nèi)通過流失細(xì)胞術(shù)進(jìn)行測定。（2）檢測方法：運用流式細(xì)胞儀三色熒光標(biāo)記技術(shù)行外周血CD4+CD25+Treg測定。每例對象分別取2份100 μl新鮮全血放入流式管中，將其標(biāo)記為對照管和試驗管。分別向其中依次加入 20、5 μl；另再向試驗管中加入20 μl；向?qū)φ展苤屑尤隒D25同型對照抗體20 μl；將其充分混勻，在室溫條件下避光孵育30 min，向其中加入1 ml紅細(xì)胞裂解液，將其充分混合，室溫條件下避光15 min，反復(fù)以PBS洗滌2次，將上清液去除，繼續(xù)向其中加入300 μl PBS，混勻之后即可放入流式細(xì)胞儀中進(jìn)行測定，以對照管設(shè)門圈定CD4+CD25+Treg，并對其占CD4+T細(xì)胞比例進(jìn)行測定。

1.2.2 冠狀動脈造影 冠脈病變血管支數(shù)主要分為左前降支、左主干、右側(cè)冠脈和回旋支，其狹窄程度≥50%的累計支數(shù)，分為1～3支病變。其中鈍緣支、對角支與左室后支病變分別可將其記入到回旋支、左前降支、右冠狀支脈，左主干受累的情況下，可同時對回旋支和左前降支受累來進(jìn)行計數(shù)。若患者狹窄的冠脈血管支數(shù)為3支，則可將其記錄為3支冠脈病變。所有對象造影結(jié)果均由兩位心內(nèi)科醫(yī)生分別進(jìn)行評價，以評價結(jié)果一致為最終結(jié)果，針對存在爭議的情況則由2名醫(yī)師協(xié)商一致后確定。根據(jù)GENSINI標(biāo)準(zhǔn)對冠脈造影狹窄嚴(yán)重程度進(jìn)行評分，32分：100%；16分：91%～99%；8分：76%～90%；4分：51%～75%；2分：26%～50%；1分：0～25%。結(jié)合每處冠狀動脈的狹窄程度評估得分與其該部位的權(quán)重系數(shù)相乘，即可獲得該部位病變積分，然后將各病變處的積分累及起來即可得出GENSINI積分。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

運用Epidata軟件錄入所有資料，并以SPSS 15.0行統(tǒng)計分析；計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗；同時以Spearman行相關(guān)性分析；P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組外周血CD4+CD25+Treg測定結(jié)果比較

冠心病各組與對照組外周血CD4+CD25+Treg測定結(jié)果對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；SAP組、UAP組、AMI組外周血CD4+CD25+Treg測定結(jié)果對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 冠心病冠脈造影特點與外周血CD4+CD25+Treg相關(guān)性

通過Spearman相關(guān)性分析，結(jié)果表明，外周血CD4+CD25+Treg與冠脈狹窄病變支數(shù)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.627，P<0.01）；外周血CD4+CD25+Treg與GENSINI積分呈負(fù)相關(guān)（r=-0.616，P<0.01）。

3 討論

近幾年來，大量國內(nèi)外文獻(xiàn)報道證實，人體自身主要通過Treg來實現(xiàn)對免疫性疾病的控制，從而提高免疫耐受程度[2]。CD4+CD25+Treg作為Treg中非常重要的成員，其在免疫性疾病控制中發(fā)揮著非常重要的作用，其主要通過免疫負(fù)向調(diào)節(jié)的方法來實現(xiàn)自身反應(yīng)性T細(xì)胞作用的有效抑制，從而達(dá)到控制免疫性疾病的目的[3]。CD4+CD25+Treg作為一種具有成熟全面功能的T細(xì)胞亞群，具有免疫抑制與免疫無能性作用[4]。其中免疫抑制性主要表現(xiàn)為經(jīng)由T細(xì)胞受體介導(dǎo)信號的刺激之后，實現(xiàn)對CD4+與CD8+T細(xì)胞增殖與活化的有效抑制。而其免疫無能性則主要表現(xiàn)為對高濃度IL-2的單獨刺激，固相包被或可溶性抗CD3單抗，同時能夠與抗CD28單抗及抗CD3單抗相互影響，形成無應(yīng)答狀態(tài)，導(dǎo)致IL-2分泌受阻[5]。另受到T細(xì)胞受體介導(dǎo)信號刺激的影響，其能夠在外周IL-2呈現(xiàn)為高濃度狀態(tài)時，實現(xiàn)CD4+CD25+Treg的活化和增殖，但其增殖程度相較于CD4+CD25-T細(xì)胞會明顯更弱[6]。為此，CD4+CD25+Treg免疫抑制功能是通過多種機(jī)制來實現(xiàn)的，結(jié)合不同的環(huán)境、強(qiáng)度，來確定發(fā)揮何種抑制作用。

因CD4+CD25+Treg所具備的免疫抑制功能，故不少研究者經(jīng)過大量研究推測其與冠心病存在相關(guān)性[7]。國外有研究通過選取慢性心力衰竭患者，對其細(xì)胞因子與T細(xì)胞免疫表型進(jìn)行測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)患者T細(xì)胞CD25表型出現(xiàn)了非常顯著的增強(qiáng)，故其認(rèn)為T細(xì)胞激活是炎癥反應(yīng)出現(xiàn)的獨立危險因素，且與病因無直接關(guān)系[8]。另有研究者選取冠心病42例對其CD4+CD25+Treg表達(dá)水平進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)其外周血中CD4+CD25+Treg水平出現(xiàn)了非常明顯的下降，并且隨著心功能的改變，CD4+CD25+Treg水平也呈現(xiàn)規(guī)律的變化[9]。本研究通過選取108例冠心病患者，對其外周血CD4+CD25+Treg表達(dá)水平進(jìn)行測定，結(jié)果表明，冠心病患者表達(dá)水平顯著低于健康人群，同時AMI組外周血CD4+CD25+Treg測定結(jié)果低于SAP組、UAP組，UAP組外周血CD4+CD25+Treg測定結(jié)果低于SAP組（P<0.05）。該結(jié)果與文獻(xiàn)報道結(jié)果一致。此外，本研究對冠脈狹窄病變支數(shù)、GENSINI積分與CD4+CD25+Treg水平相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果表明，CD4+CD25+Treg與冠脈狹窄病變支數(shù)、GENSINI積分均呈現(xiàn)明顯的負(fù)相關(guān)（P<0.01）。該結(jié)果進(jìn)一步證實了，CD4+CD25+Treg與冠心病發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

綜上所述，不同類型冠心病患者CD4+CD25+Treg表達(dá)水平有明顯差異，且病情程度與CD4+CD25+Treg水平呈現(xiàn)明顯的負(fù)相關(guān)性，故可將CD4+CD25+Treg作為冠心病診斷、預(yù)后判斷的重要指標(biāo)，同時也是將來冠心病治療和控制的重要靶向指標(biāo)。

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（收稿日期：2016-12-02）