段亮亮,崔永霞,王利麗,陳隨清

(河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，河南 鄭州 450046)

·藥學(xué)研究·

山茱萸商品規(guī)格與其色素、多糖、總有機(jī)酸含量的相關(guān)性研究*

段亮亮,崔永霞,王利麗,陳隨清

(河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，河南 鄭州 450046)

目的：探討山茱萸商品規(guī)格與其色素、多糖、總有機(jī)酸含量的相關(guān)性，為制定其商品規(guī)格行業(yè)新標(biāo)準(zhǔn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：收集山茱萸樣品65份并結(jié)合外觀性狀進(jìn)行等級(jí)劃分，采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定多糖的含量及色素的吸光度，采用電位法測(cè)定總有機(jī)酸含量；并采用SPSS軟件進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果：山茱萸商品規(guī)格與色素、總有機(jī)酸含量具有顯著的相關(guān)性，而與多糖含量相關(guān)性不顯著。結(jié)論：以外觀性狀、色澤為主要依據(jù)的山茱萸等級(jí)的劃分科學(xué)合理，有利于山茱萸資源的合理利用。

山茱萸；商品規(guī)格；色素；多糖；總有機(jī)酸；紫外-可見(jiàn)分光光度法；電位法

山茱萸為山茱萸科植物山茱萸CornusofficinalisSieb.et Zucc.的干燥成熟果肉，具有補(bǔ)益肝腎、收澀固脫的功效。隨著山茱萸被臨床廣泛使用，種植面積不斷擴(kuò)大，主要產(chǎn)地有河南省的欒川、嵩縣、西峽，陜西省的佛坪、周至，浙江省的臨安、淳安，以及山西的沁縣等地。種植地地域不同、氣候條件不同，所產(chǎn)山茱萸藥材品質(zhì)有很大差異；加之許多栽培品種[1]的出現(xiàn)，造成了市場(chǎng)上山茱萸藥材品質(zhì)不一，經(jīng)濟(jì)價(jià)值和藥材質(zhì)量有著明顯的不同，既不利于臨床合理、規(guī)范用藥，也不利于山茱萸藥材資源的合理利用。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)山茱萸的研究只涉及化學(xué)成分[2，3]和藥理活性研究[4]，缺少對(duì)其商品規(guī)格等級(jí)劃分的研究。如何建立既有外觀性狀又能體現(xiàn)藥材內(nèi)在質(zhì)量的藥材商品規(guī)格等級(jí)研究模式是中藥材標(biāo)準(zhǔn)化研究的重點(diǎn)研究任務(wù)之一。另外，隨著山茱萸存放時(shí)間延長(zhǎng)，其顏色由鮮紅色變?yōu)楹诤稚?，口嘗其酸度也發(fā)生改變，因此，本研究對(duì)山茱萸進(jìn)行了規(guī)格等級(jí)的劃分，并對(duì)不同商品規(guī)格進(jìn)行了色素、多糖、總有機(jī)酸含量的相關(guān)性研究，旨在辨狀論質(zhì)的基礎(chǔ)上，運(yùn)用性狀特征與化學(xué)成分的相關(guān)分析來(lái)驗(yàn)證規(guī)格等級(jí)劃分的科學(xué)合理性，以更好地規(guī)范市場(chǎng)、指導(dǎo)臨床用藥。

1 藥品、試劑與儀器

1.1 藥材與等級(jí)劃分

從河南、浙江、山西、陜西等主產(chǎn)地，以及藥材市場(chǎng)共收集65份山茱萸樣品，經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)陳隨清教授鑒定，均為《中國(guó)藥典》收載品種山茱萸CornusofficinalisSieb.et Zucc.的干燥成熟果肉。對(duì)65份樣品進(jìn)行等級(jí)劃分，分類結(jié)果如下。一等：果肉呈不規(guī)則片狀或囊狀；表面鮮紅色，暗紅色不超過(guò)10%，皺縮、有光澤；味酸澀；果核不超過(guò)1%，無(wú)雜質(zhì)、蟲(chóng)蛀、霉變；編號(hào)為101-107。二等：果肉呈不規(guī)則片狀或囊狀；表面暗紅色，紅褐色不超過(guò)15%,皺縮、有光澤；味酸澀；果核不超過(guò)3%；無(wú)雜質(zhì)、蟲(chóng)蛀、霉變；編號(hào)為201-236。三等：果肉呈不規(guī)則片狀或囊狀；表面紅褐色，黑色不超過(guò)15%，皺縮有光澤；味酸澀；果核不超過(guò)3%；無(wú)雜質(zhì)蟲(chóng)蛀、霉變；編號(hào)為301-308。四等：果肉呈不規(guī)則的片狀或囊狀；表面黑色，皺縮；味酸澀；果核不超過(guò)3%；無(wú)雜質(zhì)蟲(chóng)蛀、霉變；編號(hào)為401-414。分別取不同等級(jí)及編號(hào)的山茱萸藥材100 g，干燥、粉碎，過(guò)40目篩，備用。

1.2 試劑與儀器

水為超純水；葡萄糖，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品，批號(hào)20160301；苯酚，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品，批號(hào)20150416；甲醇，天津市武清區(qū)大良鎮(zhèn)工業(yè)園產(chǎn)品，批號(hào)20151205；酒石酸，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品，批號(hào)20130313；乙酸乙酯，天津市北方天一化學(xué)試劑廠產(chǎn)品，批號(hào)20130516，所用試劑均為分析純。 UV-2600紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，日本島津公司產(chǎn)品；FA2004B電子天平，上海精科天美科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；PH-3C Precision pH/mV meter，杭州奧利龍儀器有限公司產(chǎn)品；Molecular型超純水器，重慶摩爾水處理設(shè)備有限公司產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2.1 山茱萸色素吸收度的測(cè)定

參照參考文獻(xiàn)[5]。由于等級(jí)劃分與山茱萸色澤直接相關(guān)，故對(duì)色素進(jìn)行提取，以期提取得到的溶液能真正反應(yīng)藥材本身的顏色。受儀器所限，僅采用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定溶液的吸收度作為色素的衡量指標(biāo)。對(duì)于色素的提取方法，本實(shí)驗(yàn)對(duì)提取溶劑的種類、溶劑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)、提取方法、提取溫度和時(shí)間進(jìn)行了單因素考察；考慮到溶液pH 值對(duì)色素的穩(wěn)定性及吸光度有所影響，同時(shí)也考察了pH值對(duì)測(cè)定的干擾，最終確立了如下方法：精密稱取山茱萸樣品粉末1.0 g于具塞錐形瓶中，分別加入500 mL/L乙醇溶液10 mL，稱量，在40 ℃的水浴中浸提4 h，取出，放冷，再次稱量，補(bǔ)足失重，搖勻，過(guò)濾，濾液作為供試品溶液。在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各樣品溶液的吸光度(空白對(duì)照用其各自的溶劑)，作為色素的考察指標(biāo)。色素吸收度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 色素吸收度A測(cè)定結(jié)果 ±s

2.2 山茱萸多糖的含量測(cè)定

參照參考文獻(xiàn)[6]。

2.2.1 葡萄糖對(duì)照品溶液的制備

取干燥至恒重的葡萄糖對(duì)照品0.01 g，精密稱定，置于100 mL容量瓶中, 以蒸餾水溶解，定容至刻度，搖勻備用。

2.2.2 山茱萸多糖供試品溶液的制備

分別取不同編號(hào)山茱萸粉末0.1 g，精密稱定，用800 mL/L 的乙醇溶液50 mL回流1 h；趁熱過(guò)濾；濾渣用800 mL /L 的乙醇溶液洗滌4次，每次10 mL；合并洗滌液，濾過(guò)，濾渣干燥后，加水40 mL，沸水浴溫浸1 h；趁熱過(guò)濾，濾渣用熱蒸餾水洗滌4次，每次10 mL；合并濾液及洗滌液；以氯仿-正丁醇(3∶2)進(jìn)行萃??；棄去有機(jī)層；將水層移至100 mL容量瓶中；用蒸餾水定容到刻度，搖勻，即得山茱萸多糖供試品溶液，備用。

2.2.3 山茱萸多糖的測(cè)定方法

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1，0.3，0.4，0.6，0.7，1.0，1.2，1.6 mL，分別置于10 mL具塞刻度試管中；加蒸餾水稀釋到2 mL。另外吸取2 mL蒸餾水置于具塞刻度試管中作空白對(duì)照。分別加入1.0 mL 60 g/L苯酚溶液，搖勻，再加入5.0 mL濃硫酸，搖勻，放置5 min，置沸水浴中15 min，取出，冷水浴中冷卻，用紫外-可見(jiàn)分光光度法在492 nm處測(cè)定吸光度(A)。以所含葡萄糖的量為橫坐標(biāo)(x)，吸光度為縱坐標(biāo)(y)，其回歸方程是y=7.989 4x-0.291 34，r=0.999 05，葡萄糖在0.01～1.60 mg范圍內(nèi)線性良好。樣品的測(cè)定：分別精密吸取2.2.2項(xiàng)下各供試品溶液1.0 mL，置10 mL具塞刻度試管中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法制備各供試品溶液，在最大吸收波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，根據(jù)工作曲線計(jì)算多糖的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 山茱萸多糖的含量測(cè)定結(jié)果 ±s

2.3 山茱萸總有機(jī)酸的含量測(cè)定

參照參考文獻(xiàn)[7]。

2.3.1 酒石酸對(duì)照品溶液的配制

精密稱取在105 ℃下干燥至恒重的酒石酸對(duì)照品1.5 g，放于100 mL容量瓶中，用800 mL /L 乙醇溶液溶解并稀釋至刻度，即得含酒石酸15.005 g/L的對(duì)照品溶液。

2.3.2 工作曲線的繪制

吸取酒石酸對(duì)照品溶液5，8,15,25,30 mL，分別用800 mL/L 乙醇溶液定容到50 mL。準(zhǔn)確吸取上述酒石酸對(duì)照品溶液20 mL于50 mL燒杯中，加入2～3滴酚酞，放入攪拌子，參照2015版《中國(guó)藥典》第四部通則0701電位滴定法與永停滴定法測(cè)定，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.3.3 總有機(jī)酸的提取

精密稱取山茱萸粉末5.0 g于具塞錐形瓶中，加入800 mL/L乙醇溶液50 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾渣加入800 mL/L乙醇溶液50 mL再次超聲，濾過(guò)，合并濾液，置于100 mL容量瓶中，用800 mL/L 的乙醇溶液定容至刻度，備用。

2.3.4 總有機(jī)酸的測(cè)定方法

樣品的滴定：準(zhǔn)確吸取所測(cè)樣品溶液20 mL于燒杯中，加入2～3滴酚酞，放入磁子，將燒杯置于磁力攪拌器上，將調(diào)節(jié)好的pH計(jì)插入液面以下，待其穩(wěn)定讀出pH值，按照滴定酒石酸對(duì)照品的方法進(jìn)行滴定，并記錄數(shù)據(jù)，利用二階導(dǎo)數(shù)法計(jì)算總有機(jī)酸的含量。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 總有機(jī)酸的含量測(cè)定結(jié)果 ±s

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

以SPSS 18.0軟件，進(jìn)行相關(guān)性分析(雙變量的Kendall的tau-b.檢驗(yàn))，考察各成分含量與山茱萸商品規(guī)格的相關(guān)性，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 山茱萸商品規(guī)格與各成分相關(guān)性研究結(jié)果

注：**在置信度(雙側(cè))為0.01時(shí)，相關(guān)性是極顯著的；*在置信度(雙側(cè))為0.05時(shí)，相關(guān)性是顯著的。

3 討 論

從表4中可以看出，多糖含量與山茱萸商品規(guī)格的相關(guān)系數(shù)是-0.059，表明了多糖與山茱萸規(guī)格等級(jí)間沒(méi)有明顯的相關(guān)性；色素、總有機(jī)酸與山茱萸商品規(guī)格的相關(guān)系數(shù)分別是-0.581、-0.225，相關(guān)性極其顯著；另外，色素與有機(jī)酸含量的相關(guān)系數(shù)為0.218，也呈現(xiàn)了顯著相關(guān)性。 目前，市場(chǎng)銷售的山茱萸全是以統(tǒng)貨流通，未分規(guī)格等級(jí)，因此亟需制定規(guī)范的山茱萸藥材商品規(guī)格和等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)以約束及規(guī)范市場(chǎng)流通，確保山茱萸藥材質(zhì)量。本文主要是依據(jù)外觀顏色及性狀對(duì)65份山茱萸藥材進(jìn)行的規(guī)格等級(jí)劃分，故色素與規(guī)格等級(jí)間呈極顯著相關(guān)。有機(jī)酸是山茱萸藥材中的有效成分之一，與商品等級(jí)間呈現(xiàn)顯著相關(guān)性，且有機(jī)酸與色素之間也有顯著相關(guān)性，正是性狀特征與化學(xué)成分的相關(guān)分析來(lái)驗(yàn)證規(guī)格等級(jí)劃分的合理性，該結(jié)果為從山茱萸藥材內(nèi)在化學(xué)成分角度制定山茱萸藥材的商規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)提供了參考。

本實(shí)驗(yàn)所收集的65份藥材來(lái)自各個(gè)主產(chǎn)地，還有同一產(chǎn)地不同貯存年限的樣品。本課題將全面考慮各產(chǎn)地及不同貯藏年限對(duì)化學(xué)成分的影響，繼續(xù)考察山茱萸藥材中的其他有效成分及有效成分群與等級(jí)間的相關(guān)性，為合理制定山茱萸藥材的商品規(guī)格、等級(jí)和山茱萸的貯存提供較為全面的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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(編輯 陶 珠)

1001-6910(2017)04-0076-03

R284

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2017.04.32

陳隨清，博士，教授， suiqingchen@sohu.com

中央本級(jí)重大增減支項(xiàng)目子課題(2060302)

2017-02-22；

2017-03-29