王艷艷，劉長河

(河南省中醫(yī)藥研究院，河南 鄭州 450004)

·藥學研究·

HPLC法測定芪連通絡膠囊中天麻素的含量*

王艷艷，劉長河

(河南省中醫(yī)藥研究院，河南 鄭州 450004)

目的：建立芪連通絡膠囊中天麻素的HPLC含量測定方法。方法：采用C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)，以乙腈-0.5 mL/L磷酸溶液(1∶99)為流動相,檢測波長220 nm,柱溫40 ℃,體積流量1.0 mL/min。理論板數(shù)按天麻素峰計算應不低于3 000。結果：天麻素在0.082 ～0.410 μg 間線性良好，r=0.999 5(n=5)。天麻素平均加樣回收率為99.5%(RSD=1.84%,n=6)。結論：所建立的測定方法準確可靠，簡便易行，重現(xiàn)性好，能夠很好的開展該制劑的定量控制。

芪連通絡膠囊；天麻素含量測定；HPLC法

芪連通絡膠囊為山西臨汾中醫(yī)院的醫(yī)院制劑，由雪蓮花、天麻、黃芪、黨參、地龍組成，具有補益腎氣、活血通絡的功效，臨床用于中風的治療，效果良好。天麻為處方中重要藥物，臨床和實驗研究[1-3]表明，天麻中所含的天麻素具有鎮(zhèn)痛、安眠、鎮(zhèn)靜等中樞抑制作用，能增加腦血流量，改善椎基底動脈供血不足，保護神經細胞。本研究選擇天麻素作為指標性成分，對芪連通絡膠囊中的天麻素進行含量測定，以便更好地控制制劑的內在質量。

1 藥品、試劑與儀器

芪連通絡膠囊樣品，臨汾中醫(yī)院制劑室生產，批號分別為160130，160131，160132。天麻素對照品，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所提供，批號110807-201306。乙腈，高效液相用色譜純，美國DIKMA公司產品，批號R141048；水為重蒸水，其余試劑均為分析純。LC-10A液相色譜系統(tǒng)，日本島津公司產品。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

參照參考文獻[1]方法。色譜柱為依利特C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相為乙腈- 0.5 mL/L磷酸溶液(1∶99)，體積流量1.0 mL/min，柱溫40 ℃，檢測波長220 nm，進樣體積10 μL，理論板數(shù)按天麻素峰計應不低于3 000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取天麻素對照品2.05 μg，置50 mL量瓶中，加流動相制成1 mL含天麻素 41 μg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品提取方法研究和供試品溶液的制備

取批號為160130的芪連通絡膠囊內容物適量，研細，混勻，精密稱取6份，每份約0.5 g，精密稱定，各加入稀乙醇溶液25 mL，1-4號分別超聲處理提取30，60，90，120 min，5-6號分別加熱回流提取1，2.5 h。濾過，取濾液進樣10 μL測定天麻素的含量。結果：1-6號樣品天麻素含量分別為1.68，1.70，1.72，1.72，1.72和1.73 mg/g。結果提示：超聲、回流提取的天麻素量基本一致，超聲提取60，90，120 min基本可將天麻素提取完全。考慮到超聲處理方法簡便易行，選擇超聲提取60 min的方法提取供試品溶液。

取本品內容物適量，混勻，研細，取約0.5 g，精密稱定，置50 mL三角瓶中，準確加入稀乙醇溶液25 mL，稱定質量，超聲處理(功率350 W，頻率40 kHz)1 h，放冷，再稱定質量，用稀乙醇補足減失的質量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液5 mL，蒸干，殘渣用流動溶液相適量使溶解，并轉移至10 mL量瓶中，用流動相溶液稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，取濾液，即得。

2.4 線性關系的考察

分別精密稱取2.2項下的天麻素對照品溶液2，4，6，8，10 μL，進樣測定其峰面積，以天麻素進樣量(μg)為縱坐標(Y)，以峰面積積分值為橫坐標(X)，計算回歸方程，繪制天麻素的標準曲線?；貧w方程為：Y=5.305 53×10-7X+2.633 21×10-3，r=0.999 5。結果表明：天麻素進樣量在0.082～0.410 μg 之間，峰面積積分值(X)與天麻素的進樣量(Y)呈良好的線性關系。

2.5 陰性對照試驗

取芪連通絡膠囊處方中除天麻外的其他藥物，按處方比例，按其工藝制成不含天麻的空白制劑，按2.3項下方法制備缺天麻陰性樣品。分別取天麻素對照品溶液、芪連通絡膠囊供試品溶液、缺天麻陰性樣品溶液，按2.1項下色譜條件下進樣分析。結果：供試品溶液色譜中，在與天麻素對照品色譜相同保留時間處有相應的吸收峰出現(xiàn)，且分離良好；缺天麻陰性樣品色譜中，在與天麻素對照品色譜相同保留時間處沒有相應的吸收峰出現(xiàn)，提示方中除天麻外的其他藥物對測定無干擾，見圖1。

A.天麻素對照品；B.芪連通絡膠囊供試品；C.缺天麻陰性樣品

2.6 精密度試驗

取批號為160130的芪連通絡膠囊樣品，按2.3項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件重復進樣5次，測定峰面積。結果：天麻素的峰面積RSD值(n=5)為0.21%。結果表明：儀器精密度較好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取批號為160130的芪連通絡膠囊樣品，照2.3項下方法，制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件分別于供試品溶液制備完成0，1，2，4，6，7 h測定測得天麻素峰面積RSD值(n=6)為0.68%。結果表明：供試品溶液于7 h內穩(wěn)定性較好。

2.8 重復性試驗

取批號為160130的芪連通絡膠囊樣品，按2.3項下方法制備6份供試品溶液，在2.1項色譜條件下測定。結果：樣品中天麻素的平均含量為0.852 mg/粒(RSD=1.66%，n=6)。結果表明：天麻素測定的重復性較好。

2.9 加樣回收率試驗

取天麻素含量已知的芪連通絡膠囊(批號為160130，含量按0.883 mg/粒、即1.765 1 mg/g計)內容物適量，研細、混勻，稱取6份，每份約0.25 g，精密稱定，分別準確加入含有0.092 g/L天麻素稀乙醇溶液5 mL和稀乙醇溶液20 mL，按2.3項下方法制備加樣回收率供試品溶液，按2.1項下方法測定，計算天麻素的加樣回收率。結果：天麻素加樣回收率分別為99.78%、99.02%、101.16%、100.55%、100.27%和95.57%。結果表明：天麻素平均加樣回收率為99.5%(RSD=1.84%，n=6)。

2.10 樣品測定

分別取批號為160130，160131，160132的芪連通絡膠囊適量，除去囊殼，研細，混勻，分別按2.3項下方法制備供試品溶液，測定并計算出芪連通絡膠囊中天麻素的含量。結果：3批樣品的測定結果分別為0.870，0.763和0.883 mg/粒(n=3)。

3 討 論

3.1 供試品溶液制備方法研究

根據(jù)天麻素的理化性質，采用稀乙醇為溶劑對芪連通絡膠囊中天麻素進行提取。據(jù)文獻[5-6]報道，使用超聲和回流提取均能較好地提取出天麻素。筆者在實驗中分別比較了超聲處理和加熱回流兩種提取方式，并比較了不同的提取時間，根據(jù)實驗結果選擇超聲處理1h提取供試品溶液。所選供試品溶液的處理方法操作簡便、準確可靠。

3.2 色譜條件的選擇

天麻為《中國藥典》2015版一部收載品種[7]。本實驗在選擇色譜條件時參照了《中國藥典》中規(guī)定的HPLC法，對色譜流動相中乙腈與磷酸溶液的不同配比進行了實驗。文中所選流動相比例峰型對稱，保留時間適宜，與雜質峰可良好分離，基線平穩(wěn)。

本文采用與《中國藥典》一致的HPLC法建立芪連通絡膠囊中天麻素的含量測定方法，可豐富該制劑的質控標準，有助于提高制劑的臨床有效性，可為含天麻的復方制劑的定量質控提供參考。

[1]葉靖宇.天麻素注射液聯(lián)合高壓氧治療椎基底動脈供血不足療效觀察[J].中國社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學專業(yè))，2012,14(11):63-64.

[2]聶晶，杜亮，陸遠富，等.天麻素對腦缺血再灌注損傷大鼠神經細胞凋亡的抑制作用[J].重慶醫(yī)學，2012,41(18)：1841-1842.

[3]徐紀偉，陳旭東，劉喜民，等.天麻素對大鼠脊髓損傷后神經元的保護作用[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2011，22 (3) :568 -569.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:54.

[5]劉輝,張婧,樊光輝，等.HPLC法測定天麻素緩釋片中天麻素的含量[J].中國藥師，2013,16(6)：825-827.

[6]樊莉,周世文.黃芪天麻膠囊的質量標準研究[J].中國藥房，2013,24(35)：3314-3317.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部 [M].北京：中國醫(yī)藥出版社，2015：58-59.

(編輯 陶 珠)

1001-6910(2017)04-0078-03

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10.3969/j.issn.1001-6910.2017.04.33

2012年度河南省重點科技攻關計劃(122102310060)

2016-12-28；

2017-02-09