李培，董青

(山東省聊城市食品藥品檢驗檢測中心，山東聊城252000)

·檢驗檢測·

頂空氣相色譜法檢測血塞通分散片中有機(jī)溶劑殘留量

李培，董青

(山東省聊城市食品藥品檢驗檢測中心，山東聊城252000)

目的建立測定血塞通分散片中6種有機(jī)溶劑殘留量的頂空氣相色譜法。方法色譜柱采用以聚乙二醇為固定相的HP－INNOWAX毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.32 mm，0.25 m）；氫火焰離子化檢測器（FID）；柱溫采用程序升溫，初始溫度為60℃，保持1 min，再以5℃/min升溫至100℃，保持13min，再以20℃/min的速度升溫至200℃，保持2min；進(jìn)樣口溫度為240℃；檢測器溫度為300℃；載氣為氮氣；流速為2.5mL/min。頂空進(jìn)樣，頂空瓶平衡溫度為70℃，平衡時間為30min。結(jié)果正己烷、甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯、1，2－二乙基苯的檢測質(zhì)量濃度線性范圍分別為1.014～16.224，1.060～16.960，1.610～18.576，1.169～18.704，0.985～15.760，1.129～18.064 g/mL，相關(guān)系數(shù)r分別為0.999 6，0.999 9，0.999 9，0.999 6，0.999 4，0.999 2（n＝5）；回收率均在97.14%～98.73%（n＝9）；理論板數(shù)均大于10 000，相鄰峰的分離度均在2.0以上。結(jié)論該方法樣品處理簡單，檢測準(zhǔn)確，靈敏度高，重復(fù)性好，排除了輔料的干擾，可作為血塞通分散片中有機(jī)溶劑殘留量的考察方法。

頂空；氣相色譜法；血塞通分散片；有機(jī)溶劑殘留

血塞通分散片是由原料藥三七總皂苷添加各種輔料壓制而成，有效成分為三七總皂苷，主要用于活血祛瘀、通脈活絡(luò)、抑制血小板聚集和增加腦血流量。三七總皂苷是由三七藥材中提取并使用大孔吸附樹脂分離純化而得，根據(jù)2015年版《中國藥典(一部)》[1]和人用藥品注冊技術(shù)規(guī)范國際協(xié)調(diào)會（ICH）藥品中有機(jī)溶劑殘留量測定的指導(dǎo)原則，以及國際食品藥品監(jiān)督管理局藥品注冊管理對大孔樹脂的最新要求，對于在生產(chǎn)工藝中使用過大孔樹脂的制劑或原料，要對可能殘留正己烷、苯、甲苯、鄰二甲苯、對二甲苯、苯乙烯、1，2－二乙基苯進(jìn)行檢測，并對殘留量加以控制[2]。故必須對血塞通分散片中有機(jī)溶劑的殘留量進(jìn)行檢測，以控制產(chǎn)品質(zhì)量，確保藥品的安全性。本研究中采用頂空氣相色譜法對血塞通分散片中有機(jī)溶劑進(jìn)行了檢測，經(jīng)方法學(xué)驗證，排除輔料的干擾，分析結(jié)果良好?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 7890型氣相色譜儀，Agilent G1888型頂空自動進(jìn)樣器，氫火焰離子化檢測器（FID）（美國安捷倫公司）；BT 125D型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

1.2 試藥

正己烷、甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯(色譜純，Dr.Ehrenstorfer.GmbH，批號分別為31016，30914，50319，00416，31107，純度均大于99.0%)；1，2－二乙基苯（Switzerland，批號為BCBQ7518V，純度≥99.0%）；N，N－二甲基乙酰胺（色譜純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；水為超純水(自制)；血塞通分散片（湖南方盛制藥股份有限公司，批號為150606；浙江維康藥業(yè)有限公司，批號為B150909；海南海力制藥有限公司，批號為151102）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

對照品溶液：取正己烷、甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯和1，2－二乙基苯對照品適量，精密稱取，加N，N－二甲基乙酰胺，分別制成每1mL含0.101 4，0.106 0，0.116 1，0.116 9，0.985 0，0.112 9 mg的溶液，作為對照品貯備液。精密量取上述對照品貯備液各1 mL，置50 mL容量瓶中，加25%N，N－二甲基乙酰胺水溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液，精密量取對照品溶液2.0 m L置20 m L頂空進(jìn)樣瓶中，密封瓶口，即得。

供試品溶液：取供試品0.3 g，精密稱定，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，加入25%N，N－二甲基乙酰胺水溶液2.0m L，密封瓶口，搖勻，即得。

空白溶液：精密量取25%N，N－二甲基乙酰胺水溶液2.0 m L，置20m L頂空進(jìn)樣瓶中，密封瓶口，即得。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：聚乙二醇為固定相的HP－INNOWAX毛細(xì)管色譜柱（30m×0.32mm，0.25μm）；檢測器氫火焰離子化檢測器（FID）；柱溫：采用程序升溫，初始溫度為60℃，保持1min，再以5℃/min的速度升溫至100℃，保持13 min，再以20℃/min的速度升溫至200℃，保持2min；進(jìn)樣口溫度：240℃；檢測器溫度：300℃；載氣：氮氣；流速：2.5 mL/min。頂空進(jìn)樣，頂空瓶平衡溫度為70℃，平衡時間為30min。理論板數(shù)以甲苯峰計算應(yīng)不低于10 000，各待測峰之間的分離度均應(yīng)符合規(guī)定。

分別吸取混合對照品溶液、供試品溶液、空白溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣。結(jié)果，供試品溶液在與對照品溶液相應(yīng)位置上未出現(xiàn)色譜峰，且對照品色譜圖中基線平穩(wěn)，分離度良好，空白溶液在該位置上無色譜峰出現(xiàn)，供試品溶液中有機(jī)溶劑殘留不受輔料及溶劑的干擾。色譜圖見圖1。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：取對照品貯備液，分別制得5個不同質(zhì)量濃度的對照溶液，各精密量取2.0mL置頂空瓶中，按擬訂色譜條件進(jìn)樣分析。記錄色譜峰面積，以各成分的進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X，mg/L），以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸分析。結(jié)果見表1。

1.正己烷2.甲苯3.對二甲苯4.鄰二甲苯5.苯乙烯6.1，2－二乙基苯7.N，N－二甲基乙酰胺A.混合對照品溶液B.供試品溶液C.空白溶液圖1高效液相色譜圖

表1 6種有機(jī)溶劑線性回歸方程

精密度試驗：精密量取2.1項下對照品溶液5份，每份2.0 mL，置20m L頂空進(jìn)樣瓶中，重復(fù)進(jìn)樣5次，分別計算正己烷、甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯和1，2－二乙基苯對照品溶液的峰面積。結(jié)果的RSD分別為2.61%，1.97%，2.48%，3.00%，2.24%，3.08% (n＝5)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗：精密量取2.1項下對照品溶液5份，每份2.0 mL，置20m L頂空進(jìn)樣瓶中，重復(fù)進(jìn)樣5次，分別計算正己烷、甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯和1，2－二乙基苯對照品溶液的峰面積。結(jié)果的RSD分別為1.98%，1.66%，2.37%，2.86%，1.82%，2.44%（n＝5），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗：精密量取2.1項下對照品溶液7份，每份2.0mL，置20mL頂空進(jìn)樣瓶中，分別于0，2，4，6，8，12，24 h時進(jìn)樣測定。結(jié)果表明，在6 h內(nèi)對照品溶液穩(wěn)定性較好。詳見表2。

表2 穩(wěn)定性試驗結(jié)果及最低檢測限

加樣回收試驗：稱取同一批供試品9份，每份0.3 g，精密稱定，置20 m L頂空進(jìn)樣瓶中，分別精密加入高、中、低質(zhì)量濃度的對照品溶液各2.0mL，平行3份，采用外標(biāo)法測定含量，計算回收率。結(jié)果見表3。

最低檢測限試驗：將6種對照品貯備液分別逐步稀釋，直到檢測峰高與基線噪聲比值在2.0倍時。結(jié)果見表2。

2.4 樣品中有機(jī)溶劑殘留量檢測

取不同批號樣品各3份，依法制備供試品溶液并檢測。結(jié)果3批樣品均未檢出正己烷、甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯和1，2－二乙基苯。

3 討論

3.1 溶劑選擇

正己烷、甲苯、對二甲苯、鄰二甲苯、苯乙烯和1，2－二乙基苯在水中的溶解度不高，而水是FID檢測器最理想的溶劑[3－16]。分散片中的輔料成分大部分不溶于水，三七總皂苷含量也比較少，所以溶劑選擇有機(jī)溶劑與水的混合液。二甲基乙酰胺與二甲基甲酰胺都是良好的溶劑，但二甲基乙酰胺的熱穩(wěn)定性更好，由圖1可見，其在1，2－二乙基苯峰處無干擾，故選擇25%二甲基乙酰胺。

3.2 頂空加熱溫度選擇

樣品中輔料比較復(fù)雜，有低沸點成分，會對檢測產(chǎn)生干擾，故考察了不同的頂空加熱溫度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在70℃時對照品溶液峰面積達(dá)到最大，樣品中輔料成分無干擾。3.3限度測定

根據(jù)2015年版《中國藥典（一部）》三七總皂苷中樹脂溶劑的限度規(guī)定及GMP與ICH對第二類殘留溶劑的限度規(guī)定，6種殘留溶劑的限度為0.02%。

綜上所述，采用頂空氣相色譜法測定血塞通分散片中6種有機(jī)溶劑的殘留量，色譜條件好，樣品處理簡單，排除了輔料的干擾，簡單準(zhǔn)確，靈敏度高，重復(fù)性好，可用于血塞通分散片中有機(jī)溶劑殘留量的測定。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015:392－393.

[2]來國防，程賓，周蘭，等.頂空氣相色譜法檢測三七總皂苷中的大孔樹脂殘留物[J].商丘師范學(xué)院學(xué)報，2009，25（6）：71－73.

[3]王翰華，倪珍珍，姚彤煒.頂空毛細(xì)管氣相法測定三七提取物中有機(jī)溶劑殘留量[J].浙江大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2007，36（6）：598－603.

表3 加樣回收試驗結(jié)果（n＝9）

[4]胡麗霞，王曉仙，張紅.五種常用大孔吸附樹脂殘留物的比較[J].中國藥師，2015，18（3）：515－517.

[5]賈存勤，屠鵬飛，李陽春，等.中藥產(chǎn)品中大孔吸附樹脂有機(jī)殘留物檢測方法研究[J].藥物分析雜志，2006，26（4）：438－441.

[6]王巧晗，楊小林，蕭偉.木通皂苷D原料中有機(jī)溶劑殘留量及大孔吸附樹脂有機(jī)殘留物的測定[J].中國中藥雜志，2015，40（10）：1960－1964.

[7]楊培民，曹廣尚.基于頂空氣相氣相色譜法測定的重樓總皂苷中有機(jī)溶劑殘留質(zhì)量控制研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2014，32（12）：2823－2825.

[8]王金錢，王焱，章軍.固體樹脂頂空進(jìn)樣GC法檢測D－101系列大孔吸附樹脂中3種低沸點有機(jī)溶劑殘留量[J].中國試驗方劑學(xué)雜志，2013，19（4）：71－74.

[9]石云峰，金樟照.頂空氣相色譜法測定中藥提取物的有機(jī)溶劑殘留量[J].中國藥業(yè)，2007，16（19）：12－13.

[10]郝彧，劉虹，吳帥.頂空氣相色譜法測定糖脂清片中大孔吸附樹脂有機(jī)殘留物[J].中成藥，2009，31（9）：1405－ 1408.

[11]王野，楊蕾，袁軍，等.頂空氣相色譜法測定三七三醇皂苷中因大孔吸附樹脂帶入的有機(jī)殘留物[J].藥物分析雜志，2009，26（3）：396－398.

[12]蔡振華，金松子，蔣慶峰.頂空氣相色譜法測定黃芪提取物中大孔吸附樹脂有機(jī)溶劑殘留[J].現(xiàn)代儀器與醫(yī)療，2016，22（1）：81－84.

[13]周福軍，劉振國，單淇.頂空氣相色譜法測定阿可拉定（IC162）中大孔樹脂有機(jī)溶劑殘留物[J].藥物評價研究，2010，33（6）：424－427.

[14]許勇，郟征偉，錢大公.頂空氣相色譜法測定燈盞花素提取物中大孔樹脂有機(jī)溶劑殘留物[J].中成藥，2011，33（8）：1351－1355.

[15]李杰濱，譚秀敏，梁云霞.大孔吸附樹脂在藥物分離提取方面的應(yīng)用[J].中國藥業(yè)，2002，11（12）：41－42.

[16]張在娟，逯荻，崔麗霞.頂空進(jìn)樣氣相色譜法測定腦脈通膠囊中有機(jī)溶劑殘留量[J].天津中醫(yī)藥，2011，28（6）：506－509.

Determ ination of Residual Organic Solvents in Xuesaitong Dispersible Tablets by Headspace Gas Chrom atography

Li Pei,Dong Qing
(Liaocheng Food and Drug Inspection and Testing Center,Liaocheng,Shandong,China 252000)

Objective To establish the headspace gas chromatography method for determination of six residual organic solvent in Xuesaitong Dispersible Tablets.M ethods The chromatographic column adopted HP－INNOWAX capillary column with polyethylene glycol as stationary phase(30 m×0.32 mm,0.25μm),and the FID was used.The column temperature was programmed by heating:the initial temperature was 60℃,keep for 1 min,then the temperature was increased to 100℃at 5℃/min,keep for 13 min,and then increase to 200℃at 20℃/min,keep for 2 min.The inlet temperature was 240℃,the detector temperature was 300℃,the carrier gas was nitrogen,the flow rate was 2.5 m L/min.Headspace sampling was adopted,headspace equilibrium temperature was 70℃,and equilibrium time was 30 min.Resu lts The concentration linear range of hexane,toluene,p－xylene,o－xylene,styrene,1,2－diethylbenzene were 1.014－16.224,1.060－16.960,1.610－18.576,1.169－18.704,0.985－15.760,1.129－18.064 g/mL,respectively,and the relative conditions of r were 0.999 6,0.999 9,0.999 9,0.999 6,0.999 4,0.999 2,respectively.The recovery rates were 97.14%－98.73% (n＝9).The theoretical plates were larger than 10 000,and the separation degree of adjacent peaks was above 2.0.Conclusion The method has simple sample processing,accurate detection,high sensitivity and good reproducibility,and excludes the interference of excipients,which can be used as an investigation method for the determination of residual organic solvents in Xuesaitong Dispersible Tablets.

headspace;gas chromatography;Xuesaitong Dispersible Tablets;residue organic solvent

R965.3

A

1006－4931(2017)09－0029－04

2017－01－01)

10.3969/j.issn.1006－4931.2017.09.009

李培，女，大學(xué)本科，主管藥師，主要從事藥品檢驗工作，（電話）0635－8535528（電子信箱）lipei.5924277＠163.com。