劉 歡，黃勤鋒，張文超，姜一峰，楊 莘，高 飛，周艷君，童光志

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，上海 200241）

·研究論文·

豬繁殖與呼吸綜合征病毒N蛋白與宿主細(xì)胞DDX5蛋白相互作用研究

劉 歡，黃勤鋒，張文超，姜一峰，楊 莘，高 飛，周艷君，童光志

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，上海 200241）

研究利用免疫共沉淀的方法證明豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV） N蛋白與MARC-145細(xì)胞DDX5蛋白之間存在相互作用，且兩種蛋白共定位于MARC-145細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。利用構(gòu)建的EGFP-N和mCherry-DDX5真核表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染MARC-145細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)N蛋白并不能將DDX5蛋白募集至細(xì)胞質(zhì)。采用siRNA沉默MARC-145細(xì)胞DDX5基因表達(dá)之后，病毒復(fù)制水平上升；熒光定量檢測(cè)結(jié)果顯示，DDX5沉默表達(dá)也能夠明顯促進(jìn)病毒基因組RNA和長(zhǎng)鏈亞基因組RNA的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果表明DDX5參與了病毒復(fù)制轉(zhuǎn)錄過(guò)程并對(duì)病毒增殖具有抑制作用。

豬繁殖與呼吸綜合征病毒；N蛋白；DDX5；相互作用

豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）是一種具有囊膜包被的、單股正鏈RNA病毒。在病毒學(xué)分類(lèi)上，PRRSV屬于套式病毒目、動(dòng)脈炎病毒科、動(dòng)脈炎病毒屬成員之一[1]。該病自20世紀(jì)90年代出現(xiàn)以來(lái)，由于能夠?qū)е聭言心肛i繁殖障礙（流產(chǎn)、產(chǎn)死胎或者木乃伊胎）和各年齡段豬群呼吸障礙等臨床癥狀，給世界各國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。特別是在2006年我國(guó)南方爆發(fā)的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征，給我國(guó)和亞洲其他國(guó)家造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[2]。

PRRSV基因組包含有10個(gè)開(kāi)放性閱讀框，其中ORF1a和ORF1b合成病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白；而ORF2、ORF2b、ORF3~ORF5、ORF5a、ORF6和ORF7合成病毒的結(jié)構(gòu)蛋白。ORF1a和ORF1b占基因組的80%左右，由基因組RNA直接作為mRNA翻譯合成非結(jié)構(gòu)蛋白；ORF1a和ORF1b在翻譯過(guò)程中共用一個(gè)起始密碼子，但是在基因組包含的2個(gè)核糖體移碼位點(diǎn)擴(kuò)大了蛋白合成能力[3,4]。套式病毒的一個(gè)重要特點(diǎn)就是能夠轉(zhuǎn)錄合成一系列含有相同3'和5'末端序列的亞基因組RNA（subgenomic mRNAs，sg mRNAs），這些sg mRNAs直接作為信使RNA翻譯合成病毒的結(jié)構(gòu)蛋白。由此可知，PRRSV的非結(jié)構(gòu)蛋白和結(jié)構(gòu)蛋白的翻譯合成來(lái)源于兩種不同類(lèi)型的模板。病毒在復(fù)制過(guò)程中，常常需要在不同階段和不同水平對(duì)轉(zhuǎn)錄及翻譯過(guò)程進(jìn)行調(diào)控，從而實(shí)現(xiàn)病毒基因組復(fù)制和蛋白合成之間的平衡[5]。

隨著近年來(lái)蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展，相關(guān)研究指出PRRSV的N蛋白能夠與多種宿主蛋白相互作用[6,7]，然而這些與之相互作用的宿主蛋白對(duì)于病毒復(fù)制的影響卻并沒(méi)有進(jìn)行深入探究。本研究利用免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)證實(shí)，PRRSV N蛋白能夠與MARC-145細(xì)胞的RNA解旋酶（DDX5）相互作用。隨后，本研究進(jìn)一步探究這種相互作用在病毒復(fù)制過(guò)程中的作用機(jī)制，為深入了解PRRSV的復(fù)制轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制提供線(xiàn)索。

1 材料和方法

1.1 細(xì)胞與病毒 非洲綠猴腎細(xì)胞（MARC-145）、人胚胎腎細(xì)胞（HEK293T）由本實(shí)驗(yàn)保存；HPPRRSV HuN4株是2006年從湖南省某“高熱病”發(fā)病豬場(chǎng)分離得到的毒株[2]，－80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 抗體與試劑 兔抗DDX5單克隆抗體（ab126730）購(gòu)自Abcam公司；鼠抗PRRSV N蛋白單克隆抗體由本實(shí)驗(yàn)室制備保存；兔抗Flag標(biāo)簽（F7425）多克隆抗體、鼠抗HA標(biāo)簽單克隆抗體（H9658）和偶聯(lián)鼠抗HA單克隆抗體的Agrose（A2095）均購(gòu)自Sigma-Aldrich公司；pCMV-N-mCherry真核表達(dá)載體購(gòu)自碧云天公司；Lipofectamine? RNAiMAX Reagent、Alexa Fluor 488 donkey anti-mouse IgG和Alexa Fluor 568 donkey anti-rabbit IgG均購(gòu)自Invitrogen公司；Protein A/G PLUS-Agrose 購(gòu)自Santa Cruz公司。

1.3 引物設(shè)計(jì) 根據(jù)GenBank登錄的猴DDX5基因序列（NM_001258162），設(shè)計(jì)上游引物DDX5-F和下游引物DDX5-HA-R、DDX5-Flag-R來(lái)擴(kuò)增MARC-145細(xì)胞DDX5蛋白編碼基因，擴(kuò)增得到的DDX5基因片段分別帶有HA和Flag蛋白序列。根據(jù)PRRSV HuN4株病毒基因組N蛋白基因編碼序列，設(shè)計(jì)上游引物N-F和下游引物N-HA-R、N-Flag-R來(lái)擴(kuò)增分別含有HA和Flag標(biāo)簽的N基因片段，隨后將以上片段克隆至真核表達(dá)載體pCAGGS上。此外，利用融合PCR的方法，將EGFP和PRRSV N基因融合后克隆至pCAGGS載體。引物序列如表1所示。

表1 本研究使用的引物Table1 Primers used in this study

1.4 總RNA提取和cDNA合成 將PRRSV HuN4株感染MARC-145細(xì)胞后，采用TRIzol法提取被感染細(xì)胞的總RNA。隨后采用RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit試劑盒，以總RNA 為模板，參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，－80℃ 備用。

1.5 N蛋白和DDX5真核表達(dá)載體構(gòu)建 以cDNA為模板，采用Phusion? High-Fidelity DNA聚合酶進(jìn)行PCR反應(yīng)；利用上游引物N-F和下游引物N-HA-R、N-Flag-R分別擴(kuò)增含有HA和Flag標(biāo)簽序列的PRRSV N基因片段；以上游引物DDX5-F和下游引物DDX5-HA-R、DDX5-Flag-R分別擴(kuò)增含有HA和Flag標(biāo)簽序列的DDX5基因片段。膠回收PCR產(chǎn)物，經(jīng)酶切、純化后連接至pCAGGS真核表達(dá)載體上；將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞，挑取陽(yáng)性克隆和提取質(zhì)粒DNA，并將陽(yáng)性質(zhì)粒送上海生工生物公司測(cè)定序列。

1.6 真核表達(dá)蛋白免疫共沉淀（co-immunoprecipitation，Co-IP） 將1.5獲得的真核表達(dá)載體pCAGGS-N-HA和pCAGGS-DDX5-Flag、pCAGGS-DDX5-HA和pCAGGS-N-Flag分別共轉(zhuǎn)染HEK 293T細(xì)胞，并單獨(dú)轉(zhuǎn)染各陽(yáng)性質(zhì)粒和空載體作為對(duì)照。在轉(zhuǎn)染后24 h使用IP Lysis Buffer裂解細(xì)胞并離心收取蛋白樣品。在各蛋白樣品中加入10 μL的Anti-HA-Agrose，混勻后置于4℃旋轉(zhuǎn)孵育過(guò)夜。孵育完成后的Agarose beads在4℃、8000×g離心2 min；棄上清液，加入600 μL的IP Lysis Buffer重懸Agrose beads后，離心2 min；重復(fù)洗滌4次后，直接加入1×上樣緩沖液重懸Agrose beads，沸水浴10 min后置于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.7 EGFP-N和mCherry-DDX5融合表達(dá)載體的構(gòu)建 以pCAGGS-N-HA為模板，利用引物EGFP-N-F與EGFP-N-MR PCR擴(kuò)增得到3'端含有部分EGFP序列的N基因片段；以pCAGGS-EGFP為模板，EGFPN-MF與N-HA-R作為上下游引物PCR擴(kuò)增得到5'含有部分N基因序列的EGFP片段；膠回收以上2個(gè)片段，并測(cè)定其濃度；以膠回收產(chǎn)物作為模板（各10 ng），EGFP-N-F和H-HA-R作為上下游引物再次進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到融合基因EGFP-N，隨后將其克隆至pCAGGS載體上，陽(yáng)性質(zhì)粒命名為EGFP-N。以pCAGGS-DDX5-HA作為模板，pCMV-DDX5-HA-F和DDX5-HA-R分別作為上下游引物PCR擴(kuò)增DDX5基因序列后，經(jīng)酶切后將其克隆至pCMV-N-mCherry上陽(yáng)性質(zhì)粒命名為mCherry-DDX5。

1.8 PRRSV N蛋白與宿主細(xì)胞DDX5 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)接種PRRSV HuN4（第5代和第112代）至MARC-145細(xì)胞，接毒量為0.5 MOI；在感染后48 h后，裂解細(xì)胞并離心收取蛋白樣品。在收取的蛋白樣品中加入小鼠IgG（1μg）和20 μL重懸的Protein A/G PLUS-Agrose后，4℃孵育2 h以清除蛋白樣品中的非特異性結(jié)合作用。孵育完成后，4℃離心并將上清轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中；加入10 μL的鼠抗PRRSV N多克隆抗體，4℃旋轉(zhuǎn)孵育1 h；抗體孵育完成后，加入20 μL重懸的Protein A/G PLUSAgrose 并在4℃條件下旋轉(zhuǎn)孵育過(guò)夜；孵育完成后，重復(fù)洗滌4次后直接 1×上樣緩沖液重懸Agrose beads，沸水浴10 min后置于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.9 激光共聚焦實(shí)驗(yàn) 將HuN4株感染MARC-145細(xì)胞24 h后，用4 %多聚甲醛固定細(xì)胞，Triton X-100通透處理，5% BSA封閉1 h，以小鼠抗N mAb和兔抗DDX5 mAb為一抗室溫孵育2 h，隨后以Alexa Fluor 488 donkey anti-mouse IgG和Alexa Fluor 568 donkey anti-Rabbit IgG為二抗室溫孵育1 h，最后經(jīng)DAPI染細(xì)胞核，PBS清洗后通過(guò)激光共聚焦顯微鏡觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.10 siRNA干擾實(shí)驗(yàn) 針對(duì)擴(kuò)增得到的MARC-145細(xì)胞DDX5基因序列，設(shè)計(jì)siRNA沉默MARC-145細(xì)胞的DDX5表達(dá)。采用Lipofectamine? RNAiMAX Reagent轉(zhuǎn)染siRNA至終濃度為100 nmol/μL，并于轉(zhuǎn)染后48 h使用Western blot方法檢測(cè)蛋白的表達(dá)水平。同時(shí)將HuN4株以0.01MOI感染siRNA處理后的MARC-145細(xì)胞，在感染后每隔12 h收取細(xì)胞培養(yǎng)上清，使用MARC-145細(xì)胞分別測(cè)定其TCID50。

1.11 熒光定量實(shí)驗(yàn) 在使用siRNA沉默MARC-145細(xì)胞DDX5蛋白表達(dá)后，將HuN4株以1 MOI感染細(xì)胞并在感染12 h時(shí)，使用TRIzol提取細(xì)胞總RNA。經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成第1鏈cDNA后，使用熒光定量方法對(duì)細(xì)胞內(nèi)的PRRSV基因組RNA和亞基因組mRNA進(jìn)行相對(duì)定量分析，計(jì)算結(jié)果按照ΔΔCt法進(jìn)行分析，引物參照相關(guān)文獻(xiàn)[13]，由上海捷瑞公司合成。

2 結(jié)果

2.1 N蛋白與DDX5的Co-IP檢測(cè) 將PRRSV N蛋白和DDX5真核表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染至HEK 293T細(xì)胞，并同時(shí)分別單獨(dú)轉(zhuǎn)染N蛋白和DDX5真核表達(dá)載體和pCAGGS空載體作為對(duì)照。Western blot檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)照樣品（Input）中的各蛋白均正常表達(dá)，而正反向Co-IP結(jié)果表明，PRRSV N蛋白能夠與DDX5互作；而空載體不與DDX5或者N蛋白發(fā)生相互作用（圖1A，圖1B）。

2.2 PRRSV N蛋白與宿主細(xì)胞DDX5免疫共沉淀 在PRRSV HuN4株感染MARC-145細(xì)胞后，同時(shí)設(shè)置未感染細(xì)胞作為陰性對(duì)照。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不論是強(qiáng)毒（F5）還是弱毒株（F112），病毒的N蛋白同樣能夠與MARC-145細(xì)胞的DDX5蛋白相互作用（圖1C）。

圖1 Co-IP檢測(cè)N蛋白與DDX5互作Fig.1 Identif cation of the interaction between N protein and DDX5 by Co-IPA: N蛋白與DDX5免疫共沉淀; B: DDX5與N蛋白免疫共沉淀; C: Co-IP驗(yàn)證病毒N蛋白與DDX5互作A: N protein Co-IP with DDX5; B: DDX5 immunoprecipated with N protein; C: Verif cation of viral N protein interacted with DDX5 by Co-IP

2.3 N蛋白與DDX5亞細(xì)胞共定位分析 在HuN4感染MARC-145細(xì)胞后48 h后，利用鼠源和兔源的特異性抗體分別標(biāo)記病毒N蛋白及細(xì)胞DDX5蛋白，以檢測(cè)兩種互作蛋白在細(xì)胞內(nèi)共定位部位。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，僅有部分N蛋白與DDX5蛋白在細(xì)胞質(zhì)共定位，在細(xì)胞核并沒(méi)有明顯的共定位情況（圖2）。

圖2 PRRSV N蛋白與DDX5亞細(xì)胞共定位檢測(cè)Fig.2 Subcellular colocalization of PRRSV N protein and cellular DDX5

2.4 N蛋白不募集DDX5至細(xì)胞質(zhì) 將EGFP-N和mCherry-DDX5共轉(zhuǎn)染MARC-145細(xì)胞后24 h，在經(jīng)過(guò)固定和通透后，使用DAPI進(jìn)行細(xì)胞核染色。激光共聚焦實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)表達(dá)EGFP-N的細(xì)胞不存在點(diǎn)狀聚集現(xiàn)象；而當(dāng)細(xì)胞表達(dá)mCherry-DDX5時(shí)，N蛋白能夠與DDX5在細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)點(diǎn)狀聚集現(xiàn)象，表明N蛋白不能將DDX5募集至細(xì)胞質(zhì)，而是能夠特異性的與DDX5在細(xì)胞質(zhì)共定位（圖3）。

圖3 N蛋白不參與募集DDX5Fig.3 N protein is not involved in recruiting DDX5 to the cytoplasma

2.5 siRNA沉默DDX5對(duì)病毒復(fù)制的影響 利用siRNA干擾方法，沉默MARC-145細(xì)胞內(nèi)DDX5的表達(dá)，并檢測(cè)siRNA干擾效果。以0.01 MOI HuN4株感染沉默DDX5表達(dá)的MARC-145細(xì)胞，同時(shí)設(shè)置siRNA對(duì)照和細(xì)胞空白處理對(duì)照。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)DDX5的表達(dá)明顯下調(diào)后（圖4A），病毒在復(fù)制水平上升，感染24 h和36 h時(shí)比對(duì)照組和空白組復(fù)制水平高1個(gè)滴度左右（圖4B）。

圖4 沉默DDX5表達(dá)對(duì)PRRSV復(fù)制的影響Fig.4 Effection of DDX5 silencing on PRRSV replicationA: 沉默效果檢測(cè); B: HuN4株感染MARC-145細(xì)胞24 h和36 h時(shí)病毒滴度比較A: Detection of DDX5 silencing eff cacy; B: TCID50comparation at 24 and 36 h postinfection

2.6 DDX5對(duì)病毒轉(zhuǎn)錄的影響 利用siRNA沉默MARC-145細(xì)胞的DDX5蛋白表達(dá)后，按照1 MOI接種HuN4株并在感染12 h時(shí)，提取細(xì)胞內(nèi)總RNA。采用熒光定量方法分析病毒基因組RNA和亞基因組RNA的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DDX5下調(diào)能夠明顯促進(jìn)病毒基因組RNA和長(zhǎng)鏈亞基因組RNA的轉(zhuǎn)錄，而短鏈RNA的轉(zhuǎn)錄水平與對(duì)照組差異不顯著。這表明DDX5在PRRSV轉(zhuǎn)錄過(guò)程中起到了負(fù)調(diào)控的作用（圖5）。

圖5 沉默DDX5對(duì)PRRSV亞基因組的影響Fig.5 Effection of DDX5 silencing on PRRSV transcription

3 討論

RNA解旋酶是一種能夠利用ATP水解產(chǎn)生的能量結(jié)合、重構(gòu)RNA或者核糖核蛋白復(fù)合體的保守性蛋白酶，幾乎參與了真核細(xì)胞中所有RNA代謝過(guò)程[8]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，DEAD-box解旋酶還具有促進(jìn)雙鏈形成、去除RNA結(jié)合的蛋白分子、作為核糖核蛋白復(fù)合體的組裝平臺(tái)等功能[9-11]。

在冠狀病毒，Wu等[12]指出冠狀病毒磷酸化的N蛋白能夠募集宿主細(xì)胞的RNA解旋酶DDX1，從而在基因組轉(zhuǎn)錄過(guò)程中使得轉(zhuǎn)錄復(fù)合體通讀TRS而利于基因組RNA和長(zhǎng)鏈sg mRNA的合成。這可能是由于DDX1在病毒不連續(xù)轉(zhuǎn)錄過(guò)程中，能夠解開(kāi)基因組RNA 5'端的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的緣故。

在本研究當(dāng)中，我們證實(shí)PRRSV N蛋白能夠與MARC-145細(xì)胞的RNA解旋酶DDX5相互作用。真核表達(dá)的N蛋白或者病毒本身的N蛋白均能夠免疫共沉淀宿主細(xì)胞的DDX5蛋白（圖1）。這一發(fā)現(xiàn)表明，PRRSV N蛋白除了能夠募集RNA 解旋酶DHX9之外，還能夠與宿主細(xì)胞的另外一種RNA解旋酶相互作用。先前研究表明PRRSV N蛋白能夠與多種宿主細(xì)胞RNA解旋酶相互作用，包括DDX3X、DDX5、DHX9、DDX17和DDX30[6]。

在病毒復(fù)制過(guò)程中，病毒侵入細(xì)胞后，經(jīng)脫衣殼釋放病毒基因組，隨后直接翻譯合成病毒的RdRp酶：nsp9。Nsp9隨后啟動(dòng)病毒基因組RNA和亞基因組sg mRNA的合成。而編碼N蛋白的sg mRNA7是病毒最短、最容易轉(zhuǎn)錄的1條sg mRNA，sg mRNA7翻譯合成N蛋白后并不會(huì)立即組裝成病毒粒子，而是通過(guò)磷酸化或者與宿主蛋白之間的相互作用來(lái)共同調(diào)控病毒的轉(zhuǎn)錄過(guò)程。

在病毒的復(fù)制轉(zhuǎn)錄過(guò)程，病毒為了最大化的利用細(xì)胞的各種資源進(jìn)行病毒粒子的增殖。PRRSV在病毒復(fù)制轉(zhuǎn)錄時(shí)需要對(duì)病毒基因組RNA和亞基因組sg mRNA的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行調(diào)控。在本研究當(dāng)中，當(dāng)DDX5受到siRNA干擾而下調(diào)表達(dá)后，病毒基因組RNA和長(zhǎng)鏈的sg mRNA的合成水平明顯高于對(duì)照組，而短鏈的sg mRNA合成水平?jīng)]有受到影響。這說(shuō)明在基因組RNA和長(zhǎng)鏈亞基因組sg mRNA的轉(zhuǎn)錄過(guò)程中，DDX5可能起到了負(fù)調(diào)控作用。由于N蛋白能夠與DDX5和DHX9相互作用，而DHX9證實(shí)能夠促進(jìn)病毒基因組RNA和長(zhǎng)鏈亞基因組sg mRNAs的合成[13]。這些結(jié)果表明，PRRSV nsp9、DHX9和DDX5可能通過(guò)與N蛋白相互作用形成轉(zhuǎn)錄調(diào)控復(fù)合體。這幾種蛋白之間能夠共同調(diào)節(jié)病毒RNA轉(zhuǎn)錄水平。由此可知，在病毒復(fù)制過(guò)程中，PRRSV可能通過(guò)N蛋白與DDX5和DHX9不同的結(jié)合水平而調(diào)控病毒基因組RNA和亞基因組sg mRNAs的轉(zhuǎn)錄水平。然而DDX5或者DHX9是通過(guò)何種機(jī)制調(diào)控PRRSV 轉(zhuǎn)錄過(guò)程仍然需要進(jìn)一步的研究。

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CHARACTERIZATION OF INTERACTION BETWEEN NUCLEOCAPSID PROTEIN OF PORCINE REPRODUCTIVE AND RESPIRATORY SYNDROME VIRUS AND HOST DDX5 PROTEIN

LIU Huan, HUANG Qin-feng, ZHANG Wen-chao, JIANG Yi-feng, YANG Shen, GAO Fei, ZHOU Yan-jun, TONG Guang-zhi

(Shanghai Veterinary Research Institute, CAAS, Shanghai 200241,China)

In the present study, the interaction between Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) N protein and cellular DDX5 protein was verif ed by co-immunoprecipitation assay. Furthermore, confocal laser experiment showed that PRRSV N protein and DDX5 colocalized in the cytoplasm of virus infected MARC-145 cells. In addition, eukaryotic vectors expressing EGFP-N and mCherry-DDX5 fusion proteins were transfected to MARC-145 cells. The results showed that DDX5 was not recruited into cytoplasm by N protein. When DDX5 was silenced by siRNA, the growth ability of PRRSV was enhanced and real-time RT-PCR results showed that the transcriptional level of genome RNA and longer subgenomic RNA was signif cantly higher than that of the control, which indicating a negative regulatory role of DDX5 during PRRSV replication and transcription.

Porcine reproductive and respiratory syndrome virus; nucleocapsid protein; DDX5; protein-protein interaction

S852.659.6

A

1674-6422（2017）03-0012-06

2017-04-20

國(guó)家科技支撐項(xiàng)目（2015BAD12B01-1）；國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31502072，31302098，31300140）

劉歡，男，博士研究生，預(yù)防獸醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)

童光志，E-mail：gztong@shvri.ac.cn