張婧婧 張 軼 姬穎華 張 敏 李偉偉 楊慶輝 王 瑾 于海川 路 平 王向鵬

(河南省新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院和分子診斷與醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心，新鄉(xiāng) 453003)

BCYRN1調(diào)控miR-503通過Notch1信號通路對肺癌遷移和侵襲的影響①

張婧婧 張 軼 姬穎華②張 敏②李偉偉②楊慶輝②王 瑾②于海川 路 平②王向鵬

(河南省新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院和分子診斷與醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心，新鄉(xiāng) 453003)

目的探討B(tài)CYRN1調(diào)控miR-503通過Notch1信號通路對肺癌遷移和侵襲的影響機(jī)制。方法qPCR檢測不同肺癌細(xì)胞株中BCYRN1和miR-503的表達(dá)情況；免疫熒光和qPCR檢測慢病毒BCYRN1+siRNA轉(zhuǎn)染肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率；雙熒光素酶報(bào)告基因檢測BCYRN1與miR-503的相互作用；Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測沉默BCYRN1后肺癌細(xì)胞侵襲和遷移能力的變化；Western blot檢測沉默BCYRN1后Notch1信號通路蛋白的表達(dá)情況；裸鼠皮下成瘤檢測沉默BCYRN1后肺癌細(xì)胞裸鼠體內(nèi)成瘤能力的影響。結(jié)果在肺癌細(xì)胞H1299中BCYRN1表達(dá)水平最高，miR-503的表達(dá)水平相對較高；免疫熒光及mRNA水平證明BCYRN1+siRNA慢病毒可以有效轉(zhuǎn)染進(jìn)入H1299細(xì)胞內(nèi)；BCYRN19能與miR-503的3′-UTR特異性結(jié)合；沉默BCYRN1可以抑制肺癌H1299細(xì)胞的侵襲和遷移能力；沉默BCYRN1后Notch1通路蛋白表達(dá)情況相應(yīng)下調(diào)；與NC組相比，BCYRN1-siRNA組荷瘤小鼠腫瘤體積和重量都明顯減小。結(jié)論BCYRN1可以靶向調(diào)節(jié)miR-503通過Notch1信號通路影響肺癌H1299細(xì)胞的侵襲和遷移能力。

BCYRN1；肺癌；miR-503； Transwell

肺癌是全球呼吸系統(tǒng)腫瘤發(fā)病率最高的腫瘤，男性發(fā)病率相比女性要明顯增高，其中吸煙是重要的因素之一[1]。 肺癌患者的5年整體生存率約為10%～15%，而且晚期失去手術(shù)機(jī)會，預(yù)后效果不佳，導(dǎo)致其死亡率居高不下[2]。非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)，是肺癌最常見的一種類型，容易出現(xiàn)早期轉(zhuǎn)移，所以也是肺癌中最難治療和防范的一種[3]。尋找有效的早期診斷治療和分子治療靶點(diǎn)是目前的亟需解決的問題。

長鏈非編碼RNA(Long-chain non-coding RNA，lncRNA)是指非編碼的不小于200nt的一種RNA[4]。 在多種類型的腫瘤發(fā)現(xiàn)lncRNA表達(dá)參與癌癥的增殖和轉(zhuǎn)移等惡性行為[5,6]。例如，被稱為MALAT-1的lncRNA被證明是誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞遷移和轉(zhuǎn)移動力的相關(guān)基因[7,8]。 根據(jù)文獻(xiàn)，BCYRN1是一種由200個(gè)核苷酸組成的lncRNA，在乳腺癌、宮頸癌、食道癌、肺癌等的一些惡性腫瘤中高度表達(dá)，在正常組織中很少能有效檢測其表達(dá)[9]。

最近有研究表明BCYRN1在腫瘤進(jìn)展中通過抑制部分轉(zhuǎn)移抑制因子的轉(zhuǎn)錄起到促進(jìn)其發(fā)展的作用[10]。曾有研究指出，miR-503與肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[11]。在腫瘤轉(zhuǎn)移期間，Notch通路的激活可以通過各種方式與腫瘤細(xì)胞相互作用，調(diào)控腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛力[12]。

然而，目前關(guān)于BCYRN1的作用及其相關(guān)性miR-503在肺癌中表達(dá)和轉(zhuǎn)移作用機(jī)制尚不太了解。本研究通過以下研究初步完成闡明BCYRN1和miR-503的關(guān)系以及其在肺癌細(xì)胞中的可能調(diào)控作用。

1 材料與方法

1.1細(xì)胞系和試劑 5種人肺癌細(xì)胞系，包括A549、H1299、SPCA-1、H1650及H520，以及人正常支氣管上皮細(xì)胞株16HBE，均購買于中國上海細(xì)胞研究所。細(xì)胞培養(yǎng)條件，16HBE和SPCA-1在DMEM培養(yǎng)基(90%)中加入10%胎牛血清(Hyclone，USA)，其余細(xì)胞在RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，均放在37℃下，5%CO2的恒溫孵箱中培養(yǎng)。

1.2方法

1.2.1BCYRN1+siRNA慢病毒感染 通過慢病毒轉(zhuǎn)染獲得過表達(dá)BCYRN1+siRNA的細(xì)胞，將編碼BCYRN1+siRNA或空載體的慢病毒感染到H1299細(xì)胞中。并根據(jù)制造商的說明書使用Lipofectamine 2000(Invitrogen，Carlsbad，CA)將其轉(zhuǎn)染入細(xì)胞48 h，通過GFP表達(dá)選擇具有穩(wěn)定的BCYRN1+siRNA表達(dá)的克隆細(xì)胞株。

1.2.2miRNA的實(shí)時(shí)PCR分析 使用TRIzol試劑(Invitrogen，Carlsbad，CA，USA)分離肺癌細(xì)胞的總RNA，并使用TM miRNA分離試劑盒(Ambion，Austin，TX，USA)進(jìn)一步純化miRNA部分。通過光譜測定RNA樣品的濃度和純度。使用實(shí)時(shí)PCR系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄PCR(qPCR)。U6管家基因作為對照。使用2-ΔΔCt方法計(jì)算肺癌細(xì)胞的miRNA相對表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.3雙熒光素酶活性測定 驗(yàn)證BCYRN1和miR-503的相關(guān)關(guān)系，我們使用雙熒光素酶測定，將24孔板中的BCYRN1或NC細(xì)胞與0.4 mg螢火蟲熒光素酶報(bào)告載體和0.1 mg含有海腎螢光素酶(Promega)的pRL-TK對照載體共轉(zhuǎn)染，根據(jù) siPORTneoFX使用方法操作，在轉(zhuǎn)染后48 h制備裂解物。使用雙熒光素酶報(bào)告基因測定系統(tǒng)(Promega)，轉(zhuǎn)染24 h后測定熒光素酶活性。 對于每個(gè)轉(zhuǎn)染的螢火蟲螢光素酶活性被歸一化為海腎螢光素酶活性。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.4細(xì)胞遷移和侵襲測定 對于遷移測定，將5×104個(gè)肺癌細(xì)胞注入24孔Transwell小室中，每個(gè)孔中具有8.0 μm孔的聚碳酸酯濾室。 對于侵襲試驗(yàn)，將5×104個(gè)肺癌細(xì)胞置于上室，并加入Matrigel基質(zhì)膠(BD Bioscience，Woburn，MA，USA)。將具有10%FBS和HGF(20 ng/ml)的培養(yǎng)基置于下室中。在37℃下孵育24 h后，小心地去除上膜表面上的細(xì)胞。用95%乙醇固定20 min后，用0.5%結(jié)晶紫溶液染色10 min，自來水沖洗干凈過后，于倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.5Western blot蛋白質(zhì)印跡 用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離總蛋白，并將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜(Bio-Rad，Hercules，CA)。使用5%脫脂牛奶充分封閉膜，并與一抗(濃度1∶1 000)，內(nèi)參GAPDH(濃度1∶2 000)，4℃，孵育過夜。次日，TBST充分沖洗過后，使用二抗辣根酶標(biāo)記物(濃度1∶2 000) 孵育2 h，TBST充分沖洗過后，使用增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光試劑ECL顯影液檢測目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平。使用GAPDH作對蛋白內(nèi)參對照。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2 結(jié)果

2.1不同肺癌細(xì)胞株中的BCYRN1的表達(dá)和miR-503表達(dá) 通過檢測mRNA水平篩選合適的肺癌細(xì)胞株。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(圖1A)，BCYRN1在肺癌細(xì)胞中表達(dá)水平，在A549、H1299、SPCA-1、H1650及H520細(xì)胞中均呈現(xiàn)呈高表達(dá)水平，在H1299中表達(dá)水平明顯最高。同樣，miR-503在不同肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)如圖1B所示。BCYRN1和miR-503的表達(dá)水平在肺癌細(xì)胞株中均比人支氣管細(xì)胞株(16HBE)表達(dá)升高，表明可能扮演一定的促癌作用。后續(xù)試驗(yàn)我們選取H1299細(xì)胞株。

2.2檢測慢病毒BCYRN1+siRNA的轉(zhuǎn)染效率檢測 圖2A顯示，使用慢病毒BCYRN1+siRNA1和BCYRN1+siRNA2轉(zhuǎn)染H1299細(xì)胞，免疫熒光顯示二者轉(zhuǎn)染效率均高于80%，mRNA水平檢測同樣顯示慢病毒轉(zhuǎn)染后BCYRN1的表達(dá)明顯下調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3雙熒光素酶檢測BCYRN1和miR-503之間的關(guān)系 為明確與BCYRN1和下游miR-503相關(guān)的miRNA的情況，我們使用生物信息學(xué)預(yù)測工具明確，BCYRN1可能與miR-503直接相互作用，相關(guān)結(jié)合位點(diǎn)如圖3A所示。為了驗(yàn)證BCYRN1能否與miR-503 3′UTR結(jié)合，我們將BCYRN1-siRNA與miR-503共轉(zhuǎn)染到肺癌H1299細(xì)胞株中。熒光素酶報(bào)告基因結(jié)果顯示(圖3B)：BCYRN1+siRNA可以明顯抑制miR-503的熒光素酶活性。表明BCYRN1-siRNA能與miR-503的3′UTR特異性結(jié)合，并可以調(diào)控miR-503的表達(dá)。

圖1 BCYRN1和miR-503在肺癌組織和細(xì)胞株中的表達(dá)水平 Fig.1 Expression levels of BCYRN1 and miR-503 in lung cancer tissues and cell linesNote: A.Expression of BCYRN1 levels in different lung cancer cell lines；B.Expression of miR-503 in different lung cancer cell lines.

圖2 慢病毒在肺癌細(xì)胞株中的轉(zhuǎn)染效率 Fig.2 Transfection efficiency of lentivirus in lung cancer cell linesNote: A.Immunofluorescence was used to detect transfection efficiency of BCYRN1;B.qPCR was used to detect the expression of BCYRN1 in H1299 lung cancer cells.**.P<0.001.

2.4肺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力受到BCYRN1的調(diào)節(jié) 如圖4A所示，Transwell遷移試驗(yàn)檢測BCYRN1對肺癌H1299細(xì)胞遷移能力的影響，BCYRN1+siRNA1和BCYRN1+siRNA1組的H1299細(xì)胞遷移數(shù)目明顯少于NC組的數(shù)目[(25.3±2.2)% vs(85.6±6.3)%,P=0.018]，表明BCYRN1的表達(dá)下調(diào)可以抑制H1299細(xì)胞的遷移能力。同理，如圖4B所示，Transwell侵襲試驗(yàn)也顯示，BCYRN1的表達(dá)下調(diào)對基質(zhì)膠的溶解能力下降，導(dǎo)致H1299細(xì)胞的侵襲能力相應(yīng)減弱[(21.7±1.9)% vs (68.2±5.9)%,P=0.009]。差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 所有上述結(jié)果提示H1299細(xì)胞遷移和侵襲能力可由BCYRN1進(jìn)行相應(yīng)調(diào)節(jié)。

圖3 雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢測BCYRN1和miR-503之間的關(guān)系Fig.3 Double luciferase assay to detect relationship between BCYRN1 and miR-503Note: A.Binding site of BCYRN1 to miR-503;B.Double luciferase to detect the relationship between BCYRN1 and miR-503.*.P<0.05.

圖4 遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)檢測BCYRN1對肺癌細(xì)胞的影響Fig.4 Migration and invasion experiments to detect effect of BCYRN1 on lung cancer cellsNote: A.Migration experiments to detect the effect of BCYRN1 on H1299 migration capacity；B.Invasion assay to detect the effect of BCYRN1 on H1299 invasion.

圖5 Notch1蛋白通路的表達(dá)水平Fig.5 Expression level of Notch1 protein pathwayNote: A.Western blot to detect Notch1 pathway protein expression;B.Notch1 pathway protein corresponding expression.**.P<0.001.

圖6 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)檢測BCYRN1對肺癌細(xì)胞的影響Fig.6 Effect of BCYRN1 on lung cancer cells in nude mice by tumorigenesisNote: A.Nude mice tumor formation test to detect BCYRN1 on lung cancer H1299 cells in vivo tumorigenic ability;B.Comparison between BCYRN1-siRNA group and NC group nude mice tumor weight.**.P<0.001.

2.5BCYRN1的表達(dá)對North1信號通路的影響情況 為了研究BCYRN1調(diào)控H1299細(xì)胞的生物學(xué)行為是否和Notch1信號通路相關(guān)。Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，抑制BCYRN1之后Notch1信號通路中的Notch1和hes1蛋白表達(dá)相應(yīng)下調(diào)[(108.3±10.34)% vs (30.2±3.26)% vs (28.1±4.56)%，P=0.019]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明抑制BCYRN1后肺癌H1299細(xì)胞的生物學(xué)行為的改變可能是通過Notch1信號通路進(jìn)行調(diào)控的。

2.6BCYRN1的表達(dá)對肺癌細(xì)胞裸鼠體內(nèi)成瘤能力的影響 裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，腫瘤生長情況如圖所示(圖6A)：與NC組裸鼠腫瘤大小相比，BCYRN1-siRNA組的腫瘤體積明顯減小[體積(2.89±0.35)cm3vs (0.27±0.11)cm3，P=0.029]。處死裸鼠后，剝除腫瘤重量對比(圖6B)：與NC組相比，BCYRN1-siRNA組裸鼠腫瘤重量明顯減小[(3.06±0.44)g vs (1.05±0.17)g，P=0.016]。表明抑制BCYRN1的表達(dá)后可以抑制肺H1299癌細(xì)胞的體外成瘤能力。

3 討論

肺癌是全球發(fā)病率和死亡最高的呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤，由于其誘因繁多，早期診斷率低，誤診情況出現(xiàn)較多，在我國的發(fā)病率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于部分發(fā)達(dá)國家，對人類的健康威脅巨大[13,14]。然而肺癌的具體病因和發(fā)病機(jī)制未完全研究清楚，鑒于其高危因素眾多，對于有效預(yù)防和早期診斷存在很大難度，一般認(rèn)為是多種混合高危因素互相影響的結(jié)果[15,16]。關(guān)于肺癌的治療目前進(jìn)展仍然緩慢，盡管針對少部分肺癌亞型可以通過綜合治療獲得一定程度上的緩解，但是大部分類型的肺癌治療效果不佳或者緩解后容易復(fù)發(fā)[17]。所以對肺癌分子發(fā)病機(jī)制的研究，可以為臨床早期診斷和治療提供有效的作用靶點(diǎn)和標(biāo)志物，具有重要的科研和臨床意義，也是目前多學(xué)科研究的重點(diǎn)方向。

長鏈非編碼BCYRN1，也被稱為BC200，一般在正常組織中表達(dá)很低，在多種類型的腫瘤組織中異常表達(dá)[18]。在研究中，在不同的肺癌細(xì)胞株中都觀察到BCYRN1高表達(dá)水平，相比正常支氣管上皮細(xì)胞，BCYRN1可能扮演一個(gè)促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的因子。有研究表明，lncRNA對腫瘤的影響一般都是通過下游相關(guān)miRNA或蛋白靶點(diǎn)的激活發(fā)揮作用，lncRNA的異常表達(dá)通過調(diào)節(jié)腫瘤抑制或激活因子來誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生[19]。

miR-503是常見的一種具有促癌作用的mRNA，其可以調(diào)控下游c-myc、Meg3等因子，可以調(diào)控?cái)?shù)十種人類惡性腫瘤的進(jìn)展，與患者診斷和預(yù)后都有一定關(guān)聯(lián)[20]。有研究表明，miR-503通常在腫瘤抑制途徑中被抑制，在致癌物中有相當(dāng)活躍的狀態(tài)，從而間接說明了其可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程[21]。生物基因?qū)W者研究表明，miR-503的靶向因子基因多達(dá)3 000個(gè)人類基因，證明其存在的廣泛性[22]。根據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-503與BCYRN1的表達(dá)也存在一定的反饋關(guān)聯(lián)，表明BCYRN1與對miR-503有一定的調(diào)控能力，尤其在肺癌H1299細(xì)胞中。miR-503是BCYRN1下游的一個(gè)作用靶標(biāo)。還有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)其具體的機(jī)制可能是通過影響細(xì)胞的黏附能力進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。

我們研究表明，BCYRN1的表達(dá)增高，可以導(dǎo)致肺癌H1299細(xì)胞的侵襲和遷移能力增強(qiáng)。Xu等[23]研究表明，BCYRN1的表達(dá)水平與肺癌的分期有關(guān)，并且BCYRN1與肺癌浸潤深度和轉(zhuǎn)移范圍呈一定相關(guān)關(guān)系。本研究通過沉默BCYRN1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力變?nèi)酰Y(jié)合前面實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明BCYRN1在肺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用。然后繼續(xù)探討B(tài)CYRN1肺癌細(xì)胞可能的作用機(jī)制，通過關(guān)于lncRNA的包括生物信息學(xué)預(yù)測結(jié)合實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)BCYRN1與miR-503有相似的結(jié)合位點(diǎn)，通過雙熒光素酶檢測BCYRN1和miR-503有直接的相互作用，表明BCYRN1可能是通過調(diào)控miR-503的表達(dá)對肺癌細(xì)胞進(jìn)行干擾影響的。有學(xué)者研究報(bào)道，由于BCYRN1在不同類型的腫瘤中差異表達(dá)，表明BCYRN1的表達(dá)是具有組織特異性的[24]。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)BCYRN1在H1299肺癌細(xì)胞中表達(dá)水平顯著上調(diào)。以前的研究表明，可能是因?yàn)楸碛^遺傳學(xué)的改變混合影響下游miRNA的失調(diào)表達(dá)。所以，需要進(jìn)一步的研究來闡明潛在的可能機(jī)制。根據(jù)以往的研究顯示，BCYRN1在口腔癌細(xì)胞和肝細(xì)胞癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，而在甲狀旁腺癌，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤和腎上腺皮質(zhì)癌中表達(dá)上調(diào)[25]。

盡管在不同腫瘤中的調(diào)控水平存在不一致的情況，可以考慮是由于其作用機(jī)制不同所致。此外，BCYRN1也被報(bào)道可以直接通過蛋白質(zhì)和mRNA水平抑制內(nèi)源性CCND1來增加增殖期間的細(xì)胞群的生長速度來調(diào)控細(xì)胞生長，這表明BCYRN1是明確的促癌因子[26]。

為了進(jìn)一步明確BCYRN1下游的調(diào)控腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的機(jī)制，我們通過檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)通路Notch1的激活情況，發(fā)現(xiàn)Notch1通路的的激活與BCYRN1的表達(dá)有一定的關(guān)系，表明BCYRN1誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和Notch1通路有密切關(guān)系。Notch1通路中的Notch1和hes1蛋白的表達(dá)是可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移行為的[27]。在本研究，通過Western blot分析發(fā)現(xiàn)Notch1蛋白質(zhì)水平隨著BCYRN1的降低水平而相應(yīng)下降，間接證明BCYRN1可以激活Notch1通路的活性。所以，我們可以得出結(jié)論，BCYRN1的表達(dá)以某種方式影響了下游miR-503的表達(dá)從而激活Notch1信號通路對肺癌細(xì)胞的生物學(xué)行為進(jìn)行調(diào)控。

我們針對BCYRN1在肺癌中的作用和具體機(jī)制進(jìn)行了上述實(shí)驗(yàn)探討，并通過靶向作用于BCAR4下游miR-503靶點(diǎn)，從而激活Notch1信號通路，驗(yàn)證H1299肺癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力受到相應(yīng)的調(diào)控。本研究結(jié)果不但豐富了BCYRN1在肺癌中的作用機(jī)制，而且還為以肺癌的早期診斷和分子靶標(biāo)的治療提供有力的理論支持。

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[收稿2017-05-25 修回2017-06-29]

(編輯 張曉舟)

EffectsofBCYRN1onmiR-503onmigrationandinvasionoflungcancerbyNotch1pathway

ZHANGJing-Jing，ZHANGYi，JIYing-Hua，ZHANGMin，LIWei-Wei，YANGQing-Hui，WANGJin，YUHai-Chuan，LUPing，WANGXiang-Peng.
CollaborativeInnovationCenterofHenanProvince，InstituteofMedicalLaboratoryScienceandMolecularDiognosticsandMedicalLaboratoryTechnology，Xinxiang453003，China

Objective:To investigate the mechanism of BCYRN1 regulating miR-503 through Notch1 signaling pathway in the migration and invasion of lung cancer.MethodsThe expression of BCYRN1 and miR-503 in different lung cancer cell lines were detected by qPCR.Immunofluorescence and qPCR were used to detect the transfection efficiency of lentivirus BCYRN1 + siRNA transfected lung cancer cells.Double luciferase reporter gene was used to detect the interaction between BCYRN1 and miR-503.Transwell invasion test and scratch test were used to detect the invasion and migration of lung cancer cells after silencing BCYRN1.Western blot was used to detect the expression of Notch1 signaling pathway silence BCYRN1.The effect of silencing BCYRN1 on lung cancer cells in nude mice was measured by subcutaneous tumor formation in nude mice.ResultsThe expression level of BCYRN1 was the highest in lung cancer cell H1299,and the expression level of miR-503 was relatively high.Immunofluorescence and mRNA levels demonstrated that BCYRN1 + siRNA lentivirus could be effectively transfected into H1299 cells;BCYRN19 binds specifically to the 3′-UTR of miR-503;silencing BCYRN1 could inhibit the invasion and migration of lung cancer H1299 cells;the expression of Notch1 pathway protein was down-regulated after silencing BCYRN1.Compared with NC group,tumor volume and weight of BCYRN1-siRNA group were significantly decreased.ConclusionBCYRN1 can target the regulation of miR-503 through Notch1 signaling pathway in the invasion and migration of lung cancer H1299 cells.

BCYRN1;Lung cancer;miR-503;Transwell

①本文為國家自然科學(xué)基金(No.31301135)、河南省自然科學(xué)基金(No.162300410211)和河南省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(No.201203068)。

②河南省新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腫瘤科，衛(wèi)輝 453100。

R734.2

A

1000-484X(2017)10-1453-06

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.10.003

張婧婧(1982年-)，女，碩士，實(shí)驗(yàn)師，主要從事分子免疫學(xué)方面研究。

及指導(dǎo)教師：王向鵬(1985年-)，男，副教授，主要從事長鏈非編碼RNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的機(jī)制研究，E-mail：15225991758@163.com。