王玉娟 劉維明 張夢宇 宋亞璐 楊 瑩 荀麗英 王 欣 孫明江

(1 濟南市中醫(yī)醫(yī)院,濟南，250012; 2 山東中醫(yī)藥大學(xué),濟南，250355)

健脾安腸丸對腹瀉型腸易激綜合征結(jié)腸組織SP、VIP、CGRP的影響

王玉娟1劉維明1張夢宇2宋亞璐2楊 瑩2荀麗英2王 欣2孫明江2

(1 濟南市中醫(yī)醫(yī)院,濟南，250012; 2 山東中醫(yī)藥大學(xué),濟南，250355)

目的:研究健脾安腸丸對腹瀉型腸易激綜合征(IBS-D)結(jié)腸組織SP、VIP的影響。方法:采用大黃灌胃與束縛配合的方法制備IBS-D大鼠。將60只成年SD大鼠隨機分為4組:正常組、模型組、健脾安腸丸大劑量組、健脾安腸丸小劑量組和匹維溴銨組。采用ELISA法檢測大鼠結(jié)腸組織中P物質(zhì)(SP)、血管活性腸肽(VIP)和降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)的含量。結(jié)果:模型組大鼠大便形狀的評分值較正常組明顯增高(P<0.01),而健脾安腸丸大劑量組和匹維溴銨組較模型組分值顯著下降(P<0.01,P<0.05);大劑量、小劑量健脾安腸丸和匹維溴銨均能減少模型大鼠結(jié)腸SP、VIP含量,提高CGRP含量。結(jié)論:健脾安腸丸能有效地緩解腹瀉型腸易激綜合征,其療效可能與減少SP、VIP和增加CGRP的釋放有關(guān)。

健脾安腸丸;腹瀉型腸易激綜合征;SP;VIP;CGRP

腸易激綜合征(Irritable Bowel Syndrome,IBS)是一種以腹痛或腹部不適并伴有排便習(xí)慣和(或)糞便性狀改變?yōu)橹饕憩F(xiàn)的功能紊亂性胃腸道疾病[1]。中醫(yī)學(xué)中并無腸易激綜合征之病名,臨床辨治多據(jù)其臨床表現(xiàn),歸屬瀉泄、腹痛、便秘、滯下、體息痢等范疇。本病的臨床發(fā)作或加重,多與情志變化有關(guān),人體氣機要受肝的疏泄功能支配,而疏泄功能除直接參加消化活動外,還兼有調(diào)整消化系統(tǒng)的生理作用。常以久郁不解,憂思惱怒,傷及于肝,肝木疏瀉不及,橫逆克犯脾土,致脾氣失和,波及胃腸功能而發(fā)諸癥。本病病因與發(fā)病機制尚不清楚,與多種因素有關(guān)。而近年來研究表明,IBS的發(fā)病機制或與腦腸肽水平的變化密切相關(guān),P物質(zhì)(SP)、血管活性腸肽(VIP)和降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)可能起到較為重要的作用。自擬方健脾安腸丸由黨參、白術(shù)、葛根、薏苡仁、白芍等多味中藥組成,具有健脾利濕,疏肝理氣,澀腸止瀉的功效。本研究通過觀察大鼠結(jié)腸組織SP、VIP、CGRP含量的變化,探討健脾安腸丸對IBS-D的作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物 SPF級Wistar大鼠60只,雌雄各半,體重200～300 g。動物合格證編號:SCXK(魯)20080002,由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司提供。

1.2 藥物 1)造模用藥:大黃購于山東嘉泰中藥飲片有限公司,生產(chǎn)批號:131002,濃煎成生藥0.73 g/mL的藥液。2)健脾安腸丸:由黨參、白術(shù)、葛根、薏苡仁、白芍等10味中藥組成,按比例超微粉制成的水丸,由濟南市中醫(yī)院提供。實驗時研碎,以蒸餾水配成不同濃度:大劑量組0.25 g/mL;小劑量組0.0625 g/mL;3)陽性藥:匹維溴銨片(得舒特),50 mg,Abbott Healthcare SAS(法國)生產(chǎn),產(chǎn)品批號為635374,研碎后用蒸餾水配制成濃度0.133 9%的藥液。4)SP、VIP、CGRP ELISA試劑盒購于上海百蕊生物科技有限公司,生產(chǎn)批號:201506。

1.3 方法

1.3.1 動物分組與造模 將60只大鼠按體重、性別隨機分成正常組10只、造模組50只,造模建立肝郁脾虛證的模型。建肝郁脾虛的模型大鼠常規(guī)飼養(yǎng)3 d后,正常組大鼠全程生理鹽水灌胃1 mL/100 g。其他4組于每天8:00給予大黃水煎劑(0.5 mL/100 g)灌,15:00用束縛盒束縛大鼠全身,使其不能行動,煩躁不安,1 h/次,連續(xù)10 d。10 d后參照Bristol大便分型、分級,所有大鼠均造模成功,稀便率達99%,將造模成功的大鼠分成生理鹽水組(模型組)、健脾安腸丸大、中、小劑量組以及陽性對照組(匹維溴銨片組)。

1.3.2 給藥方法 造模成功后,正常組、模型組大鼠給予生理鹽水灌胃其他各組分別灌胃健脾安腸丸大劑量組、中劑量組、小劑量組均灌胃不同濃度的健脾安腸丸混懸液以及匹維溴銨片,給藥容積均為0.5 mL/100 g,次/d,連續(xù)3周。

1.3.3 組織的獲取及處理 末次給藥2 h后,各組大鼠均以20%烏拉坦麻醉(0.5 mL/100 g),剖腹取自回盲部1 cm以下的結(jié)腸組織,生理鹽水沖洗,濾紙吸干,稱質(zhì)量,按1∶9加入生理鹽水,組織勻漿,離心15 min(3 000 r/min),取上清液,-20 ℃保存待用。

1.3.4 觀察、檢測指標 1)觀察記錄造模10 d及給藥后1、2、3周大鼠大便的形狀。參照Bristol大便分型,將大鼠紡錘形糞便計為0分;條形,表面光滑計1分;粗邊蓬松塊,糊狀大便計2分;水狀,無固體形狀,計4分。累積記錄各大鼠2 h內(nèi)糞便的評分。2)取大鼠結(jié)腸組織勻漿上清液,使用ELISA試劑盒,在450 nm波長處,15 min內(nèi)使用酶標儀測量OD值,通過標準曲線計算SP、VIP的濃度。酶聯(lián)免疫分析:準品的稀釋→加樣→溫育→配液→洗滌→加酶→溫育→洗滌→顯色→終止→測定。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠一般情況觀察 大黃灌胃與束縛配合的造模方法可使大鼠脾虛濕盛,導(dǎo)致泄瀉;肝氣疏泄失常,易激惹。實驗結(jié)果表明,造模組與正常組大鼠比較,出現(xiàn)了腹瀉,體重減輕,食欲下降,活動減少,尖叫易怒等特點,與IBS的臨床表現(xiàn)接近。給予治療藥物后,上述情況均有不同程度地好轉(zhuǎn)。

2.2 治療前、后大鼠大便形狀比較 造模后,所有造模組的大便形狀分值均較正常組顯著增高(P<0.01),提示造模成功;給藥1周后,匹維溴銨組的大便分值就較模型組明顯下降(P<0.05);給藥2周后,健脾安腸丸大、中劑量組分值也明顯下降(P<0.01);給藥3周后,小劑量組分值也有一定程度的下降,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 治療前、后大鼠大便形狀評分

注：與正常組比較，*P<0.01;與模型組比較，△P<0.05,△△P<0.01

2.3 健脾安腸丸對IBS-D大鼠結(jié)腸組織SP、VIP、CGRP的影響 與模型組比較,匹維溴銨組和健脾安腸丸大中小劑量組大鼠結(jié)腸組織SP和VIP含量顯著下降,CGRP含量明顯升高,且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。

表2 健脾安腸丸對大鼠結(jié)腸組織SP、VIP、 CGRP含量的影響

注：與模型組比較，*P<0.05,**P<0.01

3 討論

IBS是由多因素造成的胃腸道疾病,可分為腹瀉型(IBS-D)、便秘型(IBS-C)、混合型(IBS-M)和不確定型[2],且以腹瀉型居多。中醫(yī)學(xué)根據(jù)其臨床表現(xiàn),多責之于情志失調(diào)而誘發(fā),常因肝氣郁滯,疏泄不利,肝脾不和,脾胃運化無權(quán),升降失調(diào),濕濁阻滯,腸道氣機不利,傳導(dǎo)失司而發(fā)病?！夺t(yī)方考》所謂:“瀉責之于脾,痛責之肝,肝責之實,脾責之虛,脾虛肝實,故令痛瀉”。本病以肝郁脾虛、氣機失調(diào)[3]為主要病機,且與肝關(guān)系最為密切,其標在腸,其制在肝,表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、便秘等癥,病理性質(zhì)以寒熱錯雜,正虛邪實多見。

該病發(fā)病機制尚未明確,可能與腸道動力異常、內(nèi)臟敏感性改變、上皮通透性變化、黏膜免疫紊亂、腦腸肽分泌異常、腸道菌群失調(diào)以及應(yīng)激和精神心理有關(guān)。腦腸肽是一種存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸道系統(tǒng)的小分子多肽,在調(diào)節(jié)內(nèi)臟感覺和胃腸動力方面起著重要的作用[4]。作為一種重要的腦腸肽,P物質(zhì)(SP)是由11個氨基酸構(gòu)成,Sanger[5-6]等證明,大劑量的SP可產(chǎn)生痛敏反應(yīng),刺激傷害神經(jīng)活動,引起神經(jīng)源性炎性反應(yīng)。P物質(zhì)可促進細胞因子釋放,激活血小板釋放5-羥色胺,促肥大細胞脫顆粒反應(yīng),繼而釋放炎性遞質(zhì)(組胺、5-羥色胺、白三稀等)[7],且還具有抑制胃酸分泌,加強腸蠕動,促進胃腸道血管擴張,刺激腸黏膜分泌水及電解質(zhì)等作用[8]。

血管活性腸肽(VIP)具有28個氨基酸殘基,是一種抑制性神經(jīng)遞質(zhì),可使全身及內(nèi)臟血管舒張、降低血壓;促進胰腺碳酸氫鹽及水分的分泌,刺激腸液分泌,抑制消化道平滑肌的收縮[9]。VIP對腸道水、電解質(zhì)分泌既促進分泌又促進其吸收作用[10-11],而便秘則可能是由于VIP抑制腸肌肉神經(jīng)元傳導(dǎo)和對腸道水、電解質(zhì)過分吸收的雙重作用。研究發(fā)現(xiàn)[12],IBS-D患者腸黏膜中VIP水平升高,可考慮為VIP含量的升高刺激了垂體細胞分泌促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH),起到促皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)類似作用,或可解釋為產(chǎn)生了一種由腸動力增強引起的負反饋作用。

降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)是有強烈擴血管作用的多肽,由37個氨基酸組成。CGRP廣泛分布于外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng),可作為傳遞遞質(zhì)調(diào)節(jié)內(nèi)臟疼痛,促進脊髓后角SP的釋放[13],導(dǎo)致腹瀉。然而,CGRP在體內(nèi)變化尚無一致結(jié)論。研究發(fā)現(xiàn),CGRP可直接作用于肌肉,其肌松作用比收縮作用大10倍[14]?？赏ㄟ^提高大鼠血漿和結(jié)腸中CGRP的含量,松弛腸道平滑肌,舒張血管,以溫煦腸壁,緩解腹瀉。

本實驗采用束縛及大黃灌胃的方法,造成大鼠肝氣疏泄失常,脾氣虛弱,水濕運化功能減退,腸氣不固,以致肝郁脾虛而泄瀉。自擬方健脾安腸丸以黨參、白術(shù)為君藥,補中益氣,燥濕健脾;配以葛根、薏苡仁為臣藥,升陽止瀉,利水滲濕;加之白芍、烏梅等品可疏肝理氣,緩急止痛,澀腸止瀉。諸藥合用,補脾土而瀉肝木,調(diào)氣機以和肝脾,達痛瀉自止之效。研究發(fā)現(xiàn),在給予健脾安腸丸后,大鼠的體重呈逐漸增長趨勢,稀便情況也明顯得到好轉(zhuǎn);而健脾安腸丸大劑量、中劑量、小劑量均可降低模型大鼠結(jié)腸內(nèi)的SP和VIP的含量而提高CGRP含量,提示SP、VIP和CGRP參與了IBS的生理病理過程。

本研究初步證實,健脾安腸丸能有效地緩解腹瀉型腸易激綜合征,且大、中劑量組優(yōu)于小劑量組和匹維溴銨組,其療效可能與減少結(jié)腸組織中SP、VIP和增加CGRP的釋放,調(diào)節(jié)胃腸激素,腦腸肽分泌的紊亂狀態(tài)及異常的免疫狀態(tài),使之逐漸恢復(fù)正常,改善胃腸道的分泌和運動,緩解水、電解質(zhì)的過度分泌,進而改善臨床癥狀有關(guān)。

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EffectsofJianpiAnchangPillonSP,VIPandCGRPintheColonTissueofDiarrhea-predominatePatternIrritableBowelSyndrome

Wang Yujuan1, Liu Weiming1, Zhang Mengyu2, Song Yalu2, Yang Ying2, Xun Liying2, Wang Xin2, Sun Mingjiang2

(1JinanMunicipalHospitalofTraditionalChinesemedicine,Ji′nan250012,China; 2ShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine,Ji′nan250355,China)

Objective:To study the effects of Jianpi Anchang pill on SP and VIP in the colon tissue of Diarrhea-predominate Pattern Irritable Bowel Syndrome (IBS-D).MethodsThe IBS-D rat model was established by gavage of Radix et Rhizoma Rhei and binding limbs. A total of 60 adult SD rats were randomly divided into 4 groups:normal group, model group, Jianpi Anchang pill high dose group and Jianpi Anchang pill low dose group and Pinaverium Bromide group. The contents of SP, VIP and CGRP in the rat colon tissue were determined by ELISA.ResultsIn the model group, fecal shape score was much higher than that of normal group (P<0.01), while the score values of Jianpi Anchang pill high dose group and Pinaverium Bromide group were lower than model group (P<0.01,P<0.05); High, low dose of Jianpi Anchang pill and Pinaverium Bromide could decrease the contents of SP ad VIP and enhance the contents of CGRP in colon tissue of the model rats.ConclusionJianpi Anchang Pill can effectively ease IBS-D, and its effects may be related to reduce the SP and VIP and increase CGRP release.

Jianpi Anchang Pill; Diarrhea-predominate Pattern Irritable Bowel Syndrome; SP; VIP; CGRP

R285.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.12.053

濟南市科技發(fā)展計劃項目(201112009)

王玉娟(1971.03—),女,醫(yī)學(xué)碩士,主治中醫(yī)師,研究方向:消化系統(tǒng)疾病的中西醫(yī)結(jié)合防治工作,E-mail:yujuangwang2004@126.com

劉維明(1966.10—),女,醫(yī)學(xué)碩士,主任醫(yī)師,教授,研究方向:消化系統(tǒng)疾病的中西醫(yī)結(jié)合防治工作,E-mail:mmu1966@163.com

(2017-04-19收稿 責任編輯：王明)