伍艷平 黃小環(huán) 龔 莉 李月潔 周鐵軍▲

1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院病理科，四川瀘州 646000；2.重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，重慶 404120

HIF-2α與VE-cadherin在宮頸腺癌中的作用研究

伍艷平1黃小環(huán)2龔 莉1李月潔1周鐵軍1▲

1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院病理科，四川瀘州 646000；2.重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，重慶 404120

目的探究HIF-2α與VE-cadherin宮頸腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法收集60例宮頸腺癌組織和18例同期因子宮肌瘤行子宮全切手術(shù)的正常宮頸組織，采用免疫組織化學(xué)方法檢測HIF-2α與VE-cadherin蛋白在宮頸腺癌及正常宮頸組織中的表達(dá)。結(jié)果宮頸腺癌組織中HIF-2α與VE-cadherin的陽性表達(dá)率分別為56.67%和65.00%，明顯高于正常宮頸組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；HIF-2α和VE-cadherin蛋白的表達(dá)與宮頸腺癌瘤體的大小、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），與宮頸腺癌的病理分級及其患者年齡無關(guān)（P＞0.05）；HIF-2α和VE-cadherin在宮頸腺癌中的表達(dá)具有正相關(guān)關(guān)系，二者相關(guān)系數(shù)為0.632（P＜0.05）。結(jié)論HIF-2α和VE-cadherin在宮頸腺癌中的表達(dá)顯著升高，且VE-cadherin可能是HIF-2α的下游靶基因，二者可能共同參與調(diào)節(jié)宮頸腺癌的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程。

缺氧誘導(dǎo)因子-2α；血管內(nèi)皮鈣粘素；宮頸腺癌；轉(zhuǎn)移

R737.33

A

2095-0616（2018）01-30-04

四川省科學(xué)技術(shù)廳與瀘州市人民政府、瀘州醫(yī)學(xué)院聯(lián)合科研專項(xiàng)資金計(jì)劃項(xiàng)目（川科發(fā)計(jì)[2014]10號）；瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院科研課題[2014]71號）。

▲通訊作者

The role of HIF-2α and VE-cadherin in cervical adenocarcinoma

WU Yanping1HUANG Xiaohuan2GONG Li1LI Yuejie1ZHOU Tiejun1
1.Department of Pathology,the Affiliated Hospital of Southwest Medical University,Luzhou 646000,China;2.Chongqing Three Gorges Medical College, Chongqing 404120, China

ObjectiveTo investigate the effect of HIF-2alpha and VE-cadherin in cervical adenocarcinoma.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the protein expression of HIF-2alpha and VE-cadherin in 60 cases of cervical adenocarcinoma and 18 cases of normal cervical tissues.ResultsThe positive expression rates of HIF-2alpha and VE-cadherin in cervical adenocarcinoma were 56.67% and 65.00% respectively,which were significantly higher than those in normal cervical tissues,the difference was statistically significant (P＜0.05).The expression of HIF-2 alpha and VE-cadherin were significantly correlated with tumor sizes(P＜0.05),clinical stage (P＜0.05) and lymphatic metastasis(P＜0.05),but showed no statistical correlation with pathological grade(P＞0.05)and age (P＞ 0.05) in cervical adenocarcinoma.In addition，the expression of VE-cadherin was positively correlated with the expression of HIF-2alpha(r=0.632,P＜0.05).ConclusionThe protein expression of HIF-2alpha and VE-cadherin were significantly increased in cervical adenocarcinoma.VE-cadherin may be the downstream target gene of HIF-2alpha.They two may co-participate the initiation and development of cervical adenocarcinoma.

HIF-2α;VE-cadherin;Cervical adenocarcinoma;Metastasis

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，其平均發(fā)病年齡呈年輕化趨勢，嚴(yán)重威脅全球婦女的健康[1]。復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致惡性腫瘤患者主要的致死原因，關(guān)于腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制的研究很多，但是目前仍不清楚。目前針對宮頸癌的治療手段主要為手術(shù)治療、放化療、生物治療等，這些治療手段在治療過程中都會對正常組織細(xì)胞造成損傷。近年來，靶向治療受到廣泛關(guān)注，針對有HER2基因突變的乳腺癌的靶向治療已經(jīng)取得了一定的成果。找到有關(guān)宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因子，將為宮頸癌的預(yù)防和治療提供新的方向。有研究表明HIF-2α和VE-cadherin在多種惡性腫瘤中存在著表達(dá)異常，參與腫瘤生長、轉(zhuǎn)移等過程。本研究旨在通過免疫組織化學(xué)檢測HIF-2α與VE-cadherin宮頸腺癌組織中的表達(dá)情況，探究二者在宮頸腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 主要試劑

兔抗人HIF-2α多克隆抗體及兔抗人VE-cadherin多克隆抗體均購自英國Abcam公司，Envision法免疫組織化學(xué)檢測試劑盒及DAB試劑盒購自北京中杉金橋有限公司。

1.2 一般資料

收集篩選2011年9月～2013年6月西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院手術(shù)切除的宮頸腺癌石蠟組織塊60例，患者年齡26～70歲，平均（43.36±9.36）歲，≥56歲39例，＜56歲21例。根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟最新的關(guān)于宮頸腺癌臨床分期（FIGO分期），其中Ⅰ期40例，Ⅱ期20例；按分化程度為：高分化29例、中分化18例和低分化13例，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性患者19例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性患者41例。隨機(jī)選取同期因子宮肌瘤行子宮全切手術(shù)的正常宮頸組織塊18例作為對照組，所選宮頸腺癌組織患者術(shù)前均未接受化療及放療。

1.3 免疫組織化學(xué)檢測及評判標(biāo)準(zhǔn)

石蠟切片厚約3μm，經(jīng)過脫蠟脫苯、檸檬酸液高壓抗原修復(fù)、3%過氧化氫溶液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，然后滴加HIF-2α和VE-cadherin抗體（稀釋度1∶100），在37℃濕盒中孵育3h，然后加Envision試劑室溫孵育2h，DAB顯色（顯微鏡下控制顯色時間），蘇木精襯染，中性樹脂封片。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果采用雙盲計(jì)分。HIF-2α和VE-cadherin的表達(dá)以細(xì)胞染色強(qiáng)度、細(xì)胞陽性百分率，兩者得分相加來進(jìn)行判定[2]。無染色記為0分，淡黃色記為1分，棕黃色記為2分，棕褐色記為3分；細(xì)胞陽性率＜5%記為0分，≥5%～＜25%記為1分，≥25%～＜50%記為2分，≥50%記為3分。上述二項(xiàng)相加，0～1分為陰性（-），2～3分為（+），4分為（++），5～ 6分為（+++）。統(tǒng)計(jì)時，0～1分為陰性，其余均為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)和半定量數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Spearman's等級相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HIF-2α和VE-cadherin在正常宮頸組織和宮頸腺癌中的蛋白表達(dá)

HIF-2α的表達(dá)于細(xì)胞核和細(xì)胞漿，呈棕黃色顆粒（見圖1），VE-cadherin主要表達(dá)于胞漿（見圖2）。HIF-2α在宮頸腺癌組織中的陽性表達(dá)率為56.67%，在正常宮頸組織中的陽性表達(dá)率11.1%，HIF-2α在宮頸癌組的表達(dá)明顯高于正常宮頸組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；VE-cadherin在宮頸腺癌組中的陽性表達(dá)率為65.00%，明顯高于正常宮頸組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。見表1。

圖1 HIF-2α在宮頸腺癌中的陽性表達(dá)（Envision ×200）

圖2 VE-cad在宮頸腺癌中的陽性表達(dá)（Envision ×200）

表1 HIF-2α和 VE-cadherin 在正常宮頸組織和宮頸腺癌中的蛋白表達(dá)

2.2 HIF-2α和VE-cadherin蛋白的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

HIF-2α和VE-cadherin蛋白的表達(dá)與腫瘤瘤體的大小、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。與年齡、分化程度無關(guān)（P＞0.05）。見表2。

2.3 宮頸腺癌HIF-2α與VE-cadherin蛋白的表達(dá)的相關(guān)性

HIF-2α和VE-cadherin表達(dá)水平免疫組化的半定量數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)分析顯示：HIF-2α和VE-cadherin在宮頸腺癌中的表達(dá)具有正相關(guān)關(guān)系，二者相關(guān)系數(shù)為0.632，P＜0.05。見表3。

表2 HIF-2α and VE-cadherin 蛋白表達(dá)與宮頸腺癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

表3 HIF-2α and VE-cadherin 蛋白表達(dá)水平在宮頸腺癌原發(fā)病灶中的相關(guān)性

3 討論

缺氧誘導(dǎo)因子（HIF）是細(xì)胞適應(yīng)缺氧微環(huán)境的主要調(diào)節(jié)因子，其持續(xù)表達(dá)并調(diào)節(jié)大量編碼基因，參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程[3]。目前明確HIF家族主要包含HIF-1、HIF-2以及HIF-3[4]。HIF主要由氧不穩(wěn)定的HIF-1α、HIF-2α和HIF-3α功能性亞基及穩(wěn)定表達(dá)的組成性亞基HIF-β構(gòu)成。研究表明缺氧時，HIF-α的穩(wěn)定性增強(qiáng)，由細(xì)胞質(zhì)中轉(zhuǎn)入細(xì)胞核與芳香烴受體核轉(zhuǎn)位蛋白（aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator，ARNT）形成二聚體，然后與靶基因啟動子中的缺氧反應(yīng)元件（hypoxia response elements，HRE）結(jié)合，通過招募轉(zhuǎn)錄因子促進(jìn)靶基因轉(zhuǎn)錄，參與了腫瘤血管生成，細(xì)胞增殖、存活、代謝、侵襲和轉(zhuǎn)移，調(diào)節(jié)腫瘤干細(xì)胞生長[5-7]。還有研究表明HIF參與調(diào)節(jié)放射治療、化療及免疫治療相關(guān)基因，增加腫瘤的耐藥性[7-8]。

HIF-2α是缺氧誘導(dǎo)因子家族中的關(guān)鍵因子，它位于2P21-P16，編碼含有870氨基酸的蛋白。HIF-2α的表達(dá)具有組織特異性和種屬特異性，它參與多種生物學(xué)過程。有研究表明特異性的拮抗HIF-2α能抑制腫瘤血管生成；甚至臨床實(shí)驗(yàn)表明使用HIF-2小分子抑制劑（如PT2385和PT2399）能特異性分解HIF-2α和HIF-β形成的二聚體，從而有效阻斷透明細(xì)胞腎細(xì)胞癌細(xì)胞生長、增殖和腫瘤血管形成[9]。Wang等[10]研究指出，HIF-2α與干細(xì)胞因子（stem cell factor，SCF）基因啟動子中的HRE相互作用促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄，通過正向調(diào)節(jié)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程促進(jìn)肝癌細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。本研究表明HIF-2α的陽性表達(dá)率為56.67%，明顯高于正常宮頸組織11.11%，而且其表達(dá)水平與癌組織的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和腫瘤的臨床分期有關(guān)，與其他研究者的研究結(jié)果類似[11-13]。提示HIF-2α在宮頸腺癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移中起著一定作用。

VE-cadherin是一種跨膜蛋白，它位于血管內(nèi)皮細(xì)胞之間，參與細(xì)胞間粘附，通過影響血管的通透性參與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為[14]。它在高度侵襲性腫瘤中表達(dá)，而在非侵襲性腫瘤中不表達(dá)[15]。有研究表明將基因修飾的樹突狀細(xì)胞疫苗（DC-VEC）轉(zhuǎn)入已接種腫瘤細(xì)胞的小鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)DC-VEC疫苗能延緩腫瘤進(jìn)程和延長小鼠生存期，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了大量免疫球蛋白，腫瘤組織中T細(xì)胞浸潤增加并且表現(xiàn)出強(qiáng)烈的抗VE-cadherin細(xì)胞毒性作用，使得腫瘤的血管生成也受到抑制；還有研究表明下調(diào)VE-cadherin表達(dá)能抑制惡性黑色素瘤血管生成擬態(tài)的形成[15-16]。提示VE-cadherin可能是通過調(diào)節(jié)腫瘤免疫、腫瘤營養(yǎng)供給來影響腫瘤的生長。本研究表明VE-cadherin的陽性表達(dá)率為65.00%，明顯高于正常宮頸組織5.56%，而且其表達(dá)水平與癌組織的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和腫瘤的臨床分期有關(guān)，這與其它腫瘤的研究基本一致。但是值得注意的是，Zhao等[17]得到了相反的結(jié)論。

研究表明VE-cadherin的表達(dá)與HIF-2α、HIF-1α、Bcl-2及 R3-PTPs有關(guān)。HIF-2α 可與Ets-1、Twist-1等協(xié)同作用于VE-cadherin啟動子中的HRE，調(diào)控其表達(dá)并參與血管生成，影響腫瘤的生長[18-21]。本研究表明HIF-2α和VE-cadherin在宮頸腺癌中呈正相關(guān)關(guān)系，r=0.632（P＜0.05）。提示VE-cadherin可能是HIF-2α的下游靶基因，HIF-2α可能是通過誘導(dǎo)VE-cadherin的表達(dá)來增加宮頸腺癌浸潤及轉(zhuǎn)移的機(jī)會。因此聯(lián)合檢測宮頸腺癌患者腫瘤組織中HIF-2α和VE-cadherin的表達(dá)水平可能對其腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移有一定預(yù)警作用。同時HIF-2α抗體、VE-cadherin抗體和抗血管生成劑在宮頸腺癌的治療方面可能具有潛在的基礎(chǔ)與臨床研究價值，可以為宮頸腺癌的治療提供新的思路。

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2017-09-25）