王 藝，周家璇，施志強，黃春江

(云南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，云南 昆明 650021)

慢性咽炎為咽部黏膜、黏膜下及淋巴組織的慢性彌漫性炎癥，是上呼吸道慢性炎癥的一部分，多見于成年人，以咽部不適、干燥感或微痛、灼熱感、梗阻感、癢感、蟻行感、刺激性咳嗽等為主要臨床特征，且患者經(jīng)臨床治療后，局部炎癥已完全得到控制，局部黏膜組織已恢復(fù)到接近于正常，但是患者仍舊覺得咽部不適，伴隨有焦慮、急躁和緊張等精神癥狀[1-3]。對于局部炎癥消退后為何還會存在異物感,長期反復(fù)發(fā)作后為何會出現(xiàn)焦慮、抑郁等心理及精神癥狀，兩者發(fā)病是否具有相關(guān)性等一系列問題尚待研究[4]。本研究通過不同方法構(gòu)建慢性咽炎大鼠模型，觀察了中藥咽炎消合劑對慢性咽炎大鼠血清5-羥色胺(5-HT)水平的影響，探討了慢性咽炎的發(fā)生發(fā)展與影響情緒的關(guān)鍵神經(jīng)遞質(zhì)5-HT異常表達的相關(guān)性，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 實驗資料

1.1實驗動物 4月齡雄性Wistar大鼠49只，北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，動物合格證號：SCXK(川)2015-030，體質(zhì)量(200±20)g，送達動物房后適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始造模。

1.2主要藥品、試劑和儀器 咽炎消合劑 (院內(nèi)中藥復(fù)方制劑，由浙貝母、僵蠶、法半夏、柴胡、厚樸、桔梗、白術(shù)、茯苓等組成，采用咽炎消合劑臨床成人用量與動物體型系數(shù)計算法換算成大鼠灌胃的等效劑量)；5-HT 96T ELISA試劑盒(Abcam公司)；10%氨水(SIGMA公司，批號：201610101)，250 mL瓶裝；肝素鈉(SIGMA公司)；6×Loading buffer(Takara公司)；喉頭噴霧器(金喉健噴霧劑10 mL藥瓶)；透射電鏡及多用光學(xué)顯微鏡(JEOL公司，JEM-1200EX)，酶標儀(Bio-Rad公司)，自制開口器。

1.3實驗方法 將49只Wistar大鼠隨機分為空白對照組、標準模型組、標準模型藥物低劑量組、標準模型藥物高劑量組、肝郁脾虛模型組、肝郁脾虛藥物低劑量組、肝郁脾虛藥物高劑量組，每組7只。除空白對照組外，標準模型各組參考文獻[2]方法建立慢性咽炎標準模型：用10%氨水噴大鼠咽部，每次用噴霧器噴2撳，間隔8 h 1次, 連續(xù)21 d，造模第22天開始停止上述造模因素,自然飼養(yǎng)條件下觀察。肝郁脾虛各組參考文獻[5-6]方法建立慢性咽炎肝郁脾虛模型：在標準模型造模方法基礎(chǔ)上，每日8：00—11：00將大鼠束縛于束縛筒內(nèi)(用于限制大鼠的活動),同時隔日喂食(隔日禁食,隔日足量給食),連續(xù)21d，造模第22天開始停止上述造模因素,自然飼養(yǎng)條件下觀察。確定造模成功后，2種模型的藥物低劑量組給予咽炎消合劑1 mL/d(含生藥量2.0 g/mL)灌胃，2種模型的藥物高劑量組給予咽炎消合劑2 mL/d(含生藥量2.0 g/mL)灌胃，2種模型組和空白對照組給予生理鹽水2 mL灌胃，均連續(xù)10 d。

1.4觀察指標 實驗過程中觀察各組大鼠的體溫、食量、體質(zhì)量、大便等情況。灌胃結(jié)束后采用眼眶取血法取不低于1 mL的血液，低速離心后制備血清，并于當(dāng)日參照Abcam廠家說明書(ab133053-Serotonin ELISA Kit v6 (website).pdf)檢測5-HT水平。然后處死各組大鼠，取咽部組織，制作病理切片，HE染色鏡下重點觀察結(jié)締組織、復(fù)層扁平上皮層、腺體、肌細胞情況。

2 結(jié) 果

2.1各組大鼠一般情況 標準模型組和肝郁脾虛模型組大鼠體質(zhì)量略低于正常對照組大鼠，且模型大鼠都存在喉中鳴響癥狀，有搔抓口唇兩側(cè)動作。標準模型組大鼠飲水量增加；肝郁脾虛模型組大鼠飲水量趨于正常，但存在皮毛疏松、粗糙、無光澤，納食少、活動少、體質(zhì)量減輕、時有便溏、肛門污穢表現(xiàn)，以造模20 d后尤為明顯，符合中醫(yī)肝郁脾虛證型的特征，并且與臨床上慢性咽炎伴隨精神癥狀具有一定的相似性。各給藥組大鼠灌胃結(jié)束后局部癥狀已不明顯，納食、活動基本正常，便溏、肛門污穢表現(xiàn)也基本消失。

2.2各組大鼠血清5-HT水平 空白對照組、標準模型組、標準模型藥物低劑量組、標準模型藥物高劑量組、肝郁脾虛模型組、肝郁脾虛藥物低劑量組、肝郁脾虛藥物高劑量組血清5-HT水平分別為(1 485.34±56.54)ng/mL、(1 273.69±26.95)ng/mL、(1 410.55±42.26)ng/mL、(1 431.93±85.86)ng/mL、(1 267.83±29.60)ng/mL、(1 607.48±86.24)ng/mL、(1 458.69±46.64)ng/mL。標準模型組和肝郁脾虛模型組血清5-HT水平均明顯低于空白對照組(P均<0.05)，標準模型組和肝郁脾虛模型組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；標準模型給藥組和肝郁脾虛給藥組血清5-HT水平均明顯高于相應(yīng)模型組(P均<0.05)，且肝郁脾虛給藥組血清5-HT水平明顯高于標準模型給藥組(P均<0.05)。

2.3各組大鼠咽部組織病理表現(xiàn) 空白對照組大鼠咽部黏膜層、肌層、骨骼肌層組織正常，見圖1；標準模型組和肝郁脾虛模型組大鼠咽部組織有輕微的上皮組織增生，乳突狀或者釘狀增生明顯，小血管有擴增現(xiàn)象，有炎細胞浸潤，部分區(qū)域有組織充血情況，黏液腺腫大，分泌物增加，少數(shù)有纖維組織增生和固有層腫脹，也有大鼠表現(xiàn)為上皮層變薄，見圖2和圖3。各給藥組大鼠咽部上皮增生和炎細胞浸潤情況明顯改善，釘狀增生減少，血管擴張現(xiàn)象基本消失，組織無充血，黏液腺無腫大，表現(xiàn)接近于空白對照組。

圖1 空白對照組咽部組織病理表現(xiàn)

圖2 標準模型組咽部組織病理表現(xiàn)

圖3 肝郁脾虛型模型組咽部組織病理表現(xiàn)

3 討 論

中醫(yī)認為慢性咽炎屬于“慢喉痹”“虛火喉痹”范疇，病因病機以肝郁氣滯、脾胃虛弱、虛火灼咽、痰濕瘀阻為多見，其中肝郁可化火，火熱日久可致傷陰耗液，虛火灼咽；而持久的情志活動會造成內(nèi)臟氣機紊亂，氣滯則肝郁，氣虛則脾失所養(yǎng)，氣機阻滯血行不暢，瘀滯于喉[7]；另外七情所傷可致氣逆液濁而變?yōu)樘碉?，痰氣結(jié)于咽喉為梅核氣，梗梗不利。用現(xiàn)代應(yīng)激理論來解釋就是，咽部不適癥狀為一種應(yīng)激源，應(yīng)激源的長期刺激可引起機體應(yīng)激反應(yīng)，即中醫(yī)的“證”(證候)。不同證候就是不同個體表現(xiàn)出的不同反應(yīng)狀態(tài)，這種狀態(tài)就是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)有關(guān)生理及病理(包括功能性和器質(zhì)性)的綜合反應(yīng)，因此應(yīng)激反應(yīng)與中醫(yī)證候在本質(zhì)上具有高度的相關(guān)性。在一定條件下，應(yīng)激反應(yīng)同時也可作為一種應(yīng)激源對機體造成影響。慢性應(yīng)激反應(yīng)可使大鼠外周及中樞神經(jīng)遞質(zhì)合成代謝紊亂，如5-HT含量明顯改變等[8-9]。基于以上理論，本研究利用慢性應(yīng)激原理誘導(dǎo)建立大鼠標準慢性咽炎模型及肝郁脾虛型慢性咽炎模型，觀察了咽炎消合劑對5-HT代謝的影響。

本研究結(jié)果顯示，肝郁脾虛慢性咽炎模型大鼠除了具有標準慢性咽炎模型大鼠的特征外，還出現(xiàn)了攝食率降低、體質(zhì)量減輕、時有便溏、肛門污穢以及騷動不安或活動次數(shù)下降等行為改變，符合中醫(yī)肝郁脾虛證型的特征，并且與文獻[10]報道相符；給予咽炎消合劑灌胃10 d后，慢性咽炎大鼠局部癥狀基本消失，無明顯焦慮、抑郁等精神癥狀，且咽部組織病理表現(xiàn)基本恢復(fù)正常。檢測血清5-HT水平發(fā)現(xiàn)，標準模型組和肝郁脾虛模型組血清5-HT水平均明顯低于空白對照組，各給藥組血清5-HT水平均明顯高于模型組，推測慢性咽炎與5-HT的代謝異常具有一定的相關(guān)性，咽炎消合劑的疏肝解郁、健脾益氣功效在動物模型上除了能夠控制和消除局部炎癥癥狀外，對神經(jīng)中樞也具有調(diào)節(jié)作用。值得注意的是，肝郁脾虛給藥組血清5-HT水平明顯高于標準模型給藥組，肝郁脾虛藥物低劑量組的5-HT水平甚至高于空白對照組，這說明肝郁脾虛的動物模型比標準動物模型更符合中醫(yī)肝郁脾虛這一中醫(yī)證候?qū)W特征，同時也說明咽炎消合劑可通過調(diào)節(jié)5-HT代謝進而改善慢性咽炎的軀體和精神癥狀。

綜上所述，慢性咽炎與5-HT的代謝異常具有一定的相關(guān)性，肝郁脾虛為主要病

機；咽炎消合劑除了能夠控制和消除咽部炎癥癥狀外，對神經(jīng)中樞也具有調(diào)節(jié)作用。

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