楊子秋

(云南省大理州食品檢驗(yàn)檢測(cè)院，云南大理 671000)

近年來，在食品工業(yè)持續(xù)發(fā)展的影響下，食品質(zhì)量安全問題也隨之越來越顯著，尤其是違規(guī)使用或者超量使用食品添加劑的問題頻頻出現(xiàn)。政府各級(jí)食品安全監(jiān)管部門都引起了高度重視，這同時(shí)也使得各級(jí)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的檢驗(yàn)任務(wù)隨之加重[1-2]。當(dāng)前現(xiàn)有的國家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)主要采取的是不同的分析測(cè)試以及處理技術(shù)，通常只能夠?qū)?種或者2～3種進(jìn)行測(cè)定，能夠?qū)崿F(xiàn)3種以上添加劑檢測(cè)的方法相對(duì)較少，為了能夠更好地提升檢驗(yàn)效率，提升食品質(zhì)量安全，構(gòu)建多種食品添加劑同時(shí)檢測(cè)的方法成為了關(guān)鍵[3]。本試驗(yàn)在果蔬汁檢測(cè)中，采用高效液相色譜法進(jìn)行5種添加劑的同時(shí)測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1試驗(yàn)材料 從市面上購入7種不同的果蔬汁，分別為胡蘿卜汁、番茄汁、石榴汁、杏汁、黑加侖汁、紅棗汁、香梨汁。

1.1.2試劑 甲醇(HPLC級(jí))、稀氨水(1+1)(天津精細(xì)化工)；山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、乙?；前匪徕洏?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(安賽蜜)、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(100%純度)(中國計(jì)量科學(xué)研究院)；乙酸銨溶液(精密稱量分析純乙酸銨1.54g自行自備)；混標(biāo)使用液(分別取5中標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，離子水稀釋定容至10mL刻度，過濾后獲得0.00、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg/mL標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。)

1.1.3儀器與設(shè)備 華志電子天平，HZK-210；高效液相色譜儀，安捷倫1260配紫外檢測(cè)器；離心機(jī)，貝克曼庫爾特，Microfuge 20；超聲儀，上海生析超聲儀器有限公司，F(xiàn)S-750T；紫外可見光分光光度計(jì)，島津，UV2450。

1.2 方法

1.2.1樣品處理 從果蔬汁中精確稱量10.00g樣品，將其置于25mL比色管內(nèi)(若含有二氧化碳，需通過微溫?cái)嚢璺▽⑵淙コ?；若含有乙醇，則通過水浴加熱法將其去除。)，以稀氨水對(duì)pH值進(jìn)行調(diào)節(jié)，使其控制在7～8左右，超聲條件下持續(xù)提取10min，去離子水定容至25mL充分搖勻；以4 500r/min速度進(jìn)行10min理性處理，取上清液，經(jīng)過水系0.45μm微孔濾膜進(jìn)行過濾之后，行高效液相色譜測(cè)定。

1.2.2波長(zhǎng)選擇 因在紫外區(qū)域苯甲酸、安賽蜜、脫氫乙酸、糖精鈉以及山梨酸均能夠得到吸收，為此，采用紫外檢測(cè)器[4]。經(jīng)由紫外可見分光光度計(jì)在190～400nm范圍內(nèi)對(duì)各組標(biāo)準(zhǔn)溶液實(shí)施光譜掃描。結(jié)合各吸光度圖譜分析，苯甲酸的最大吸收波長(zhǎng)為216nm，安賽蜜的最大吸收波長(zhǎng)為224.0nm，脫氫乙酸的最大吸收波長(zhǎng)為235.5nm，糖精鈉的最大吸收波長(zhǎng)為220.0nm，山梨酸的最大吸收波長(zhǎng)為226.5nm。結(jié)合各組情況，最終確定檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm。

1.2.3流動(dòng)相比例 在流動(dòng)相時(shí)，主要采取乙酸銨(0.02mol/L)與甲醇溶液來選取相應(yīng)的流速和比例。在甲醇—乙酸銨溶液體系中，隨著甲醇從2%逐漸增加到10%，5種需要檢測(cè)的添加劑保留時(shí)間表現(xiàn)為隨之縮短，因脫氫乙酸與糖精鈉的出峰時(shí)間非常相近，并且非常明顯。經(jīng)過綜合分析，在流動(dòng)相中甲醇為5%時(shí)，各種添加劑保留時(shí)間、出峰時(shí)間、分離效果以及峰型能夠達(dá)到最佳，最終確定該方法的流動(dòng)相比例為甲醇與乙酸銨溶液(0.02mol/L)分別為5∶95(V∶V)。

1.2.4流速選擇 在確定的流動(dòng)相體系下，隨著流速從1.0mL/min逐漸下降到0.7mL/min，待測(cè)添加劑盡管能夠?qū)崿F(xiàn)分離且達(dá)到較好峰形，但在流速達(dá)到0.9mL/min時(shí)，柱效較好的250nm的Kromasil 100-5 C18柱能夠?qū)崿F(xiàn)較好的分離。通過綜合分析，最終確定流速為1.0mL/min。

1.2.5色譜條件 色譜柱：Kromasil 100-5 C18(250mm×4.6mm，5μg)；流動(dòng)相：甲醇：0.02mol/L乙酰胺溶液=5∶95(V∶V)；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：20μL；柱溫：30℃；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器(DAD)，190～600nm；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm(附圖)。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍

將苯甲酸、安賽蜜、脫氫乙酸、糖精鈉以及山梨酸稀混標(biāo)使用液稀釋成濃度分別為0.00、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，分別進(jìn)樣20μL，通過色譜條件來進(jìn)行測(cè)定，以峰面積來作為縱坐標(biāo)，各組的濃度則設(shè)置為橫坐標(biāo)，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。結(jié)果顯示，苯甲酸在0.00～0.1mg/mL濃度范圍內(nèi)，表現(xiàn)為良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=49 990.974 1X-240.078 69，r=0.97；安賽蜜在0.00～0.1mg/mL濃度范圍內(nèi)，表現(xiàn)為良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=44 614.713 3X-79.077 259，r=0.98；脫氫乙酸在0.00～0.1mg/mL濃度范圍內(nèi)，表現(xiàn)為良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=70 280.006 3X+922.968 52，r=0.96；糖精鈉在0.00～0.1mg/mL濃度范圍內(nèi)，表現(xiàn)為良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=31 900.711 8X-55.758 452，r=0.98；山梨酸在0.00～0.1mg/mL濃度范圍內(nèi)，表現(xiàn)為良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=85 309.931 6X-190.754 64，r=0.98。

2.2 精密度和重現(xiàn)性試驗(yàn)

進(jìn)行5份空白樣品平行試樣，分別向其中加入等量混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，使得各組溶液濃度能夠達(dá)到0.06mg/mL，根據(jù)試驗(yàn)方法來對(duì)其實(shí)施處理后，行精密度試驗(yàn)，同時(shí)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算。在對(duì)0.06mg/mL空白樣品，以峰面積A來對(duì)取得的測(cè)定值進(jìn)行表示，彼此接近的程度與實(shí)際分析結(jié)果的重復(fù)性要求非常接近，各組相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)(表1)。

表1 精密度

2.3 加標(biāo)回收試驗(yàn)

對(duì)購入的7種不同的果蔬汁樣品進(jìn)行加標(biāo)測(cè)定回收率，分別向果蔬汁中加入5種0.04mol/L混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，平均回收率見表2。

表2 回收率

3 結(jié)論

高效液相色譜法對(duì)果蔬汁中苯甲酸、安賽蜜、脫氫乙酸、糖精鈉以及山梨酸添加劑進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在0.00～0.1mg/mL濃度范圍內(nèi)，均表現(xiàn)為良好的線性關(guān)系，加標(biāo)回收率為98%～99%，RSD為1.01%～1.51%。由此可知，高效液相色譜法是一種操作簡(jiǎn)單、簡(jiǎn)便易行，具有一定準(zhǔn)確性和靈敏度較高的檢測(cè)方法，通過采用該方法可較好地實(shí)現(xiàn)對(duì)果蔬汁產(chǎn)品質(zhì)量的快速檢驗(yàn)。◇

[1]武中庸，赫欣睿，葉永麗，等.高效液相色譜法在食品添加劑檢測(cè)中的應(yīng)用[J].西北民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2016，37(2)：65-69.

[2]高文惠，龐軍，高林，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定食品中多種添加劑[J].中國食品學(xué)報(bào)，2014，14(12)：148-153.

[3]陳沛金，張毅，肖鋒，等.高效液相色譜法測(cè)定糖果、蜜餞和飲料中19種食品添加劑[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2014，5(11)：3487-3494.

[4]林海丹，鄒志飛，秦燕，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定食品中18種食品添加劑[J].食品科學(xué)，2013，34(8)：228-231.

[5]伍雅婷，郭怡陽，黃常剛，等.HPLC同步測(cè)定多種合成色素含量檢測(cè)結(jié)果的不確定度評(píng)定[J].中國食物與營(yíng)養(yǎng)，2016，22(12)：22-26.

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