王曉萍，周明旺，徐 霞

（甘肅省中醫(yī)院/甘肅中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050）

血漿中升高的同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）水平與心腦血管疾病有著非常密切的聯(lián)系。研究證實，高同型半胱氨酸（Hypohomocysteinemia，HHcy）可激活血管壁炎癥發(fā)生而導(dǎo)致動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）［1］，HHcy血癥為AS和血栓形成等心腦血管疾病發(fā)病的獨立危險因子［2］，作用于AS發(fā)生發(fā)展的各個環(huán)節(jié)［3］。研究表明，以重用岷當(dāng)歸配伍組方的系列制劑如中風(fēng)膏、補腦膏、佛手瓜蔞膠囊等治療心腦血管疾病如腦卒中、缺血性心臟病、動脈粥樣硬化疾病有顯著療效［4-6］。岷當(dāng)歸最高用量達120g，遠高于《中華人民共和國藥典》規(guī)定用量（6～12g）［7］，且臨床療效好，無不良反應(yīng)［8］。本研究觀察大劑量岷當(dāng)歸（60～120g）對HHcy兔血清Hcy與血漿TXB2的影響，以期為岷當(dāng)歸的新藥研發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

試劑：DL-蛋氨酸，購自Sigma公司。同型半胱氨酸（Hcy），購自北京中生生物工程技術(shù)公司。血栓素B2（TXB2）放免測試藥盒購自北京北方生物技術(shù)研究所。岷當(dāng)歸中藥飲片均購自岷縣中藥材有限公司。

藥物：岷當(dāng)歸水煎液藥劑實驗室制備，依據(jù)傳統(tǒng)方法煎煮、過濾，濃縮成0.5g/mL合劑備用。葉酸5mg/片，批號H12020597，天津飛鷹制藥有限公司生產(chǎn)。維生素B610mg/片，批號H12020170，天津力生制藥股份有限公司生產(chǎn)。維生素B1225mg／片，批號H14023321，山西云鵬制藥有限公司生產(chǎn)。

儀器：手術(shù)刀剪刀、電子分析天平、低速離心機、切片機、顯微鏡及照相攝像系統(tǒng)、微量移液器、超低溫冰箱、酶標儀、放免檢測儀。

實驗動物：成年健康普通級日本大耳白兔48只，雌雄各半，4月齡，體質(zhì)量2.0～2.5 kg，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所提供，動物合格證號SCXK（甘）2010-0001。動物飼養(yǎng)于溫度18～24℃、光照明暗各12h清潔的飼養(yǎng)室內(nèi)，分籠喂養(yǎng)。

動物分組與模型制備：48只兔適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機分6組：正常組、模型組、岷當(dāng)歸低、中、高劑量組和葉酸對照組，每組各8只。各組兔均限食量，每兔每日100g。動物模型參照孟磊等［1］的方法制作，背部皮下注射L-蛋氨酸80mg/（kg·d），連續(xù)12周，標準兔飼料喂養(yǎng)。正常組在背部皮下注射與模型組等容量的生理鹽水，標準兔飼料喂養(yǎng)。其他各治療組進行造模。12周末終止實驗。

干預(yù)方法：兔日灌胃液體用量為10mL/（kg·d），各治療組造模第8周開始灌胃，共4周。岷當(dāng)歸低、中、高劑量組：給予不同劑量岷當(dāng)歸水煎液灌胃，按體型系數(shù)換算法中人兔等效藥量換算方法計算給藥劑量，人用岷當(dāng)歸水煎液低、中、高劑量為30g/70kg、60g/70kg、120g/70kg，按70kg成年人的藥物劑量與1.5kg家兔之間的換算系數(shù)為0.07，實驗兔低、中、高劑量組1.4g/（kg·d）、2.8g/（kg·d）、5.6g/（kg·d）。葉酸組參照文獻［10］給予葉酸、維生素B6、維生素B12研碎后灌胃，葉酸1.5mg/（kg·d）、維生素B620mg/（kg·d）、維生素B120.25mg/（kg·d）。正常組、模型組每天予以等量滅菌水灌胃。

觀察指標：末次給藥后24h禁食，不禁水，3%戊巴比妥鈉30mg／kg耳緣靜脈注射麻醉，打開腹腔，下腔靜脈取血9mL，離心后分別取血清、血漿備用。酶標儀ELISA法測定Hcy，放射免疫法測定血漿TXB2。

統(tǒng)計方法：用SPSSl7.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以（±s）表示，用獨立樣本t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

對血清Hcy水平的影響：各組血清HCY指標見表1。

表1 各組血清Hcy指標比較 （μmol/L， ±s）

表1 各組血清Hcy指標比較 （μmol/L， ±s）

注：與正常組比較，★P＜0.05；與模型組比較，※P＜0.05；與葉酸組比較，▲P＜0.05；與中劑量組比較，☆P＜0.05；與高劑量組比較，＃P＜0.05。

組別 例 Hcy正常組 8 12.72±2.43模型組 8 18.55±2.66★葉酸組 8 14.73±1.42※低劑量組 8 16.50±2.02※▲☆＃中劑量組 8 14.83±1.69※高劑量組 8 14.64±2.17※

對血漿TXB2水平的影響：各組血液TXB2指數(shù)見表2。

表2 各組血漿TXB2指標比較 （pg/mL，±s）

表2 各組血漿TXB2指標比較 （pg/mL，±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，※P＜0.05；與葉酸組比較，▲P＜0.05；與低劑量組比較，＃P＜0.05；與中劑量組比較，☆P＜0.05。

組別 例 TXB2正常組 8 1 054.72±20.22模型組 8 1 979.10±24.46*葉酸組 8 1 516.20±18.39※?！畹蛣┝拷M 8 1 376.83±16.82※▲中劑量組 8 1 293.24±25.18※▲高劑量組 8 1 118.48±21.53※▲?！?/p>

3 討 論

Hcy是存在于血漿中的氨基酸，也是半胱氨酸與蛋氨酸代謝中的中間產(chǎn)物之一。在正常人體內(nèi)，Hcy的生成和代謝保持著平衡，血漿中Hcy濃度為5～15μmol/L［11］。因環(huán)境因素或遺傳因素而導(dǎo)致Hcy持續(xù)性超高稱之為HHcy。高Hcy水平可導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷，血管平滑肌細胞增殖，血小板活化，脂類代謝紊亂，誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)發(fā)生等作用［12］。Hcy代謝產(chǎn)生一些活性氧化中間產(chǎn)物，作用于細胞膜，啟動脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，損傷血管內(nèi)皮西部功能，觸發(fā)血小板活化，引起平滑肌細胞增殖，誘導(dǎo)AS發(fā)生［13］。Hcy升高水平與血小板活化狀態(tài)呈明顯的正相關(guān)，Hcy增加和血小板活化是AS過程中血栓形成的重要的病理生理基礎(chǔ)［14］?；罨难“蹇舍尫哦喾N炎癥介質(zhì)，如血小板活化因子、血栓素、血小板生長因子衍生物等，還能產(chǎn)生氧自由基，導(dǎo)致組織損傷。TXB2血小板活化后花生四烯酸代謝產(chǎn)物之一，是TXA2的穩(wěn)定代謝產(chǎn)物，也是促進凝血和血栓形成的重要因素，是與腦梗死發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的一種炎癥介質(zhì)，國內(nèi)外均以測定TXB2作為判斷其濃度的指標［15］。

中醫(yī)認為，痰濁阻滯，則易形成血瘀，血瘀阻滯則使津液停蓄化而為痰，而導(dǎo)致Hcy在體內(nèi)蓄積，造成Hcy和類似AS的病變，引發(fā)中風(fēng)、冠心病等疾病。當(dāng)歸擴張血管、抗血小板聚集、保護血管內(nèi)皮細胞、抗氧化、清除自由基和改善血液流變學(xué)等具有良好作用［16］。當(dāng)歸小劑量應(yīng)用則補血，大劑量應(yīng)用則活血［17］。研究表明岷當(dāng)歸的水分含量、醇溶出物的含量、揮發(fā)油含量等均優(yōu)于其他產(chǎn)地當(dāng)歸的質(zhì)量［18～20］。甘肅岷縣全當(dāng)歸抗血小板聚集及抗凝血方面優(yōu)于其他產(chǎn)地［21］。

研究結(jié)果顯示，模型組血清Hcy與血漿TXB2水平較正常組顯著升高，提示Hcy升高觸發(fā)血小板活化。岷當(dāng)歸單日劑量為30g～120g，各劑量組均能使血清Hcy、TXB2水平下降，岷當(dāng)歸各劑量組優(yōu)于葉酸組，高劑量組優(yōu)于低、中劑量組。因此，大劑量岷當(dāng)歸可降低HHcy兔血清Hcy、TXB2指標，減少Hcy對血管內(nèi)皮的損傷以及抑制Hcy觸發(fā)的血小板活化是其作用機制之一，作用與劑量有一定的相關(guān)性，劑量較大時作用明顯。

［1］張蕓，鴻嘎魯，席建軍.高同型半胱氨酸血癥與心血管疾病的相關(guān)性研究進展［J］.中國循證心血管醫(yī)學(xué)雜志，2016，8（11）：1395-1396.

［2］常娜，魯廣秀.高半胱氨酸與動脈粥樣硬化性型急性腦梗死患者血管病變的相關(guān)性研究［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報，2014（2）：203-205.

［3］祖權(quán)，關(guān)立克.高同型半胱氨酸血癥與動脈粥樣硬化的關(guān)系及其臨床意義［J］.吉林醫(yī)學(xué)，2015，36（1）：110-112.

［4］李妍怡，劉志軍，楊瑞.補腦膏治療血管性癡呆70例［J］.中醫(yī)研究，2010，21（1）：41-43.

［5］李妍怡，鞏婷，楊瑞龍.佛手瓜蔞膠囊對心肌缺血家兔血清NO、NOS及GSH-PX活性的影響［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2008，6（2）：164-166.

［6］李妍怡，竇友義.中風(fēng)膏對中風(fēng)患者血液流變學(xué)及血脂水平的影響［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2001，28（5）：281.

［7］國家藥典委員會.中國藥典（一部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：124-125.

［8］李妍怡，竇友一，東紅.大劑量岷當(dāng)歸應(yīng)用的毒副作用臨床研究［J］.蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2002，28（2）：8-10.

［9］孟磊，高煒，趙春玉，等.高同型半胱氨酸血癥引起家兔動脈硬化［J］.北京大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2001，33（6）：536-539.

［10］王國慶，康愛英.丹參、維生素治療HHcy兔腹主動脈血管超聲及病理改變［J］.中國實用神經(jīng)疾病雜志，2013，16（1）：29-32.

［11］張偉麗，祝立新，孫凱，等.高同型半胱氨酸水平與腦卒中患者心腦血管事件再發(fā)風(fēng)險的關(guān)系［J］.臨床內(nèi)科雜志，2009，26（10）：666-668.

［12］TURKCU FM，KOZ OG，Yarangumeli A，et al.Plasma homocysteine，folic acid，and vitamin B12 levels in patients with pseudoexfoliation syndrome，pseudoexfoliation glaucoma，and normotensive glaucoma［J］. Medicina（Kaunas），2013，49（5）：214.

［13］任曉麗，楊波，陳錫文，等.高蛋氨酸飲食對雄性大鼠血漿6-酮-前列腺素Flα血栓素B2含量和PGI2/TXA2系統(tǒng)的影響［J］.實驗動物與比較醫(yī)學(xué)，2010，30（4）：297-299.

［14］王朝暉，杜林林，龔平，等.動脈粥樣硬化形成過程中血小板活化和同型半胱氨酸動態(tài)變化及其相關(guān)性研究［J］.中國血液流變學(xué)雜志，2006，16（1）：12-14.

［15］王崢，郝紅軍，高楓，等.中老年人腦梗死患者血栓素B2和6-酮-前列腺素lα水平對血栓前狀態(tài)的評估作用［J］.中國臨床康復(fù)，2005，9（5）：102-103.

［16］XU XC，TIAN XY.Observation of clinical effect of ferulate in the treatment of transient ischemic attack［J］.Evalu Anal Drug-Use in Hosp China（中國醫(yī)院用藥評價與分析），2008，8（6）：456-457.

［17］仝小林.重劑起沉疴［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：536.

［18］陳江弢.當(dāng)歸和木香等中藥的標準化研究［D］.昆明：中國科學(xué)院昆明植物研究所，2009：61-63.

［19］曲亞玲，郭延生，華永麗，等.甘肅道地藥材當(dāng)歸土炒飲片質(zhì)量標準研究［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2010，29（4）：5-8.

［20］吳燕燕，尚明英，蔡少青，等.當(dāng)歸的化學(xué)成分指紋圖譜［J］.藥學(xué)學(xué)報，2008，43（7）：728-732.

［21］李敏，孫虹，李琰，等.不同產(chǎn)地當(dāng)歸對血小板聚集及凝血時間活性的比較［J］.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2003，9（2）：47-50.