周煥娣 黃小軍 夏燕卿

【摘要】 目的 探討P16/Ki67蛋白檢測在宮頸上皮內(nèi)瘤變診斷中的應(yīng)用價值。方法 16949例行宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查者作為研究對象， 全部細(xì)胞標(biāo)本均行巴氏染色和P16及Ki67免疫細(xì)胞化學(xué)染色， 以宮頸活檢結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)， 觀察P16及Ki67診斷結(jié)果。結(jié)果 16949例婦科細(xì)胞學(xué)檢查者中全部細(xì)胞標(biāo)本均行P16免疫化學(xué)染色， 陰性14720例， 陽性2012例， 強(qiáng)陽性217例， 總陽性率13.67%。在改良液基細(xì)胞系統(tǒng)基礎(chǔ)上實施P16和Ki67蛋白檢測， 特異性明顯。P16和Ki67蛋白檢測的陽性表達(dá)率越高， CIN病變級別越高。結(jié)論 在宮頸上皮內(nèi)瘤變的診斷中， 在改良液基細(xì)胞系統(tǒng)基礎(chǔ)上實施P16和Ki67蛋白檢測， 具有重要的應(yīng)用價值， 可以明確CIN病變的分級， 提高診斷正確率， 降低漏診率， 為臨床治療提供科學(xué)的依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 宮頸上皮內(nèi)瘤變;宮頸癌;P16;Ki67;應(yīng)用價值

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.12.007

【Abstract】 Objective To investigate the application value of P16/Ki67 protein detection in the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia. Methods A total of 16949 patients with thinprep cytologic test as study subjects. All cell specimens were stained with PAP staining， P16 and Ki67 immunocytochemistry. The cervical biopsy results were taken as the gold standard， and the diagnostic results of P16 and Ki67 were observed. Results In all 16949 cases of gynecological cytology， all the cell specimens were stained with P16 immunochemistry， with 14720 negative cases， 2012 positive cases， 217 strong positive cases， and the total positive rate was 13.67%. The detection of P16 and Ki67 proteins on the basis of a modified liquid-based cell system has obvious specificity. The higher the positive rate of P16 and Ki67 protein detection， the higher the CIN lesion level. Conclusion In the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia， detection of P16 and Ki67 protein in modified liquid based cell systems shows important application value， and it can identify the classification of CIN lesions， improve the accuracy of diagnosis， reduce the rate of missed diagnosis， and provide a scientific basis for clinical treatment.

【Key words】 Cervical intraepithelial neoplasia; Cervical cancer; P16; Ki67; Application value

宮頸癌是中國女性常見腫瘤之一， 超過99%的宮頸癌都由高危型人乳頭瘤病毒（HPV）引起并導(dǎo)致P16INK4a和Ki67表達(dá)上調(diào)。從正常宮頸發(fā)生病變繼而進(jìn)展到宮頸癌大約需8～12年[1， 2]。使用P16INK4a和Ki67作為輔助低度鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）和鱗狀上皮細(xì)胞高度病變（HSIL）診斷的分子生物學(xué)指標(biāo)在組織學(xué)中具有高度特異性和敏感性。宮頸液基細(xì)胞學(xué)篩查目前已在臨床推廣應(yīng)用多年， 取得了顯著的經(jīng)濟(jì)效益， 然而以巴氏染色為基礎(chǔ)的篩查技術(shù)漏診誤診率較高， 從而延誤假陰性患者的最佳治療時機(jī)。所以急需發(fā)展一種技術(shù)降低假陰性率， 目前的研究顯示P16INK4a和Ki67在液基細(xì)胞標(biāo)本中非特異性染色太強(qiáng)， 影響了其應(yīng)用價值[3]。本研究旨在消除其非特異性染色并降低成本， 進(jìn)而顯著地降低宮頸液基細(xì)胞學(xué)篩查的假陰性率， 從而低成本高效率的降低宮頸癌發(fā)病率和死亡率。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取東莞市第八人民醫(yī)院2015年2月～

2017年11月共16949例行宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查者作為研究對象， 取樣本， 使用改良液基細(xì)胞系統(tǒng)行巴氏染色和P16及Ki67免疫細(xì)胞化學(xué)染色， 以宮頸活檢結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)， 觀察P16及Ki67診斷結(jié)果。其中婦科活檢、超高頻電波刀（LEEP刀）切除、宮頸錐切及子宮全切標(biāo)本共2070例， 檢查結(jié)果：陰性1423例， 宮頸上皮內(nèi)瘤變1級（CIN 1）或CNI 1～2級

533例， CIN 2級以上114例（包括21例浸潤性鱗癌）、腺癌及其它癌9例（宮頸原位及浸潤性腺癌、內(nèi)膜腺癌、癌肉瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌癌、透明細(xì)胞癌）。

1. 2 方法 ①細(xì)胞芯片制作。取標(biāo)本中有效細(xì)胞制成2行×5列細(xì)胞芯片備用。②免疫化學(xué)染色。所用鼠單克隆抗體P16及試劑盒為安必平或邁新公司產(chǎn)品。

1. 3 觀察指標(biāo) 觀察宮頸液基細(xì)胞標(biāo)本中免疫細(xì)胞化學(xué)染色后陽性細(xì)胞的強(qiáng)度、數(shù)量。

2 結(jié)果

2. 1 P16檢驗結(jié)果 16949例婦科細(xì)胞學(xué)檢查者中全部細(xì)胞標(biāo)本均行P16免疫化學(xué)染色， 陰性14720例， 陽性2012例， 強(qiáng)陽性217例， 總陽性率13.67%。見表1。

2. 2 不同程度宮頸病變的P16表達(dá) 2070例行宮頸病理檢查， 陰性142例（9.98%）， CIN 1～2級533例（100.00%）， CIN 2級以上114例（100.00%）。見表2。

2. 3 不同程度宮頸病變的Ki67表達(dá) 2070例行宮頸病理檢查， 陰性180例， 陽性指數(shù)<10（基層陽性）;CIN 1～2 級

533例， 陽性指數(shù)（65.00±8.32）;CIN 2級以上114例， 陽性指數(shù)（91.12±4.21）。見表3。

3 討論

P16是E2F轉(zhuǎn)錄因子的目標(biāo)蛋白之一， 在宮頸上皮內(nèi)瘤變當(dāng)中， 是細(xì)胞生長周期失控的敏感的特異性指標(biāo)[4]。在細(xì)胞學(xué)篩查的基礎(chǔ)上加染P16可以解決以上細(xì)胞學(xué)檢查的諸多問題， P16在組織學(xué)中對CIN病變具有高度特異性， 但在液基細(xì)胞學(xué)涂片中這種特異性卻消失， 當(dāng)把液基細(xì)胞標(biāo)本做成細(xì)胞蠟塊切片以后， 其特異性又回到組織學(xué)檢查的水平[5-7]。因此如果能在細(xì)胞涂片標(biāo)本中就恢復(fù)其特異性， 就可以顯著降低病理醫(yī)生的工作量和誤診漏診風(fēng)險， 也可以完全自動化和標(biāo)準(zhǔn)化， 降低篩查成本[8]。P16不僅有助于病理科醫(yī)生對CIN進(jìn)行準(zhǔn)確分級， 并且可以幫助臨床醫(yī)生更全面的認(rèn)識癌前病變和宮頸癌的特點(diǎn)， 有助于對患者選擇更合理的方式， 降低宮頸癌發(fā)病率和死亡率[9]。因此， P16蛋白檢測在宮頸上皮內(nèi)瘤變的診斷中具有重要的應(yīng)用價值。

Ki67屬于一種增殖細(xì)胞的核抗原， 細(xì)胞增殖屬于基本的生物過程， 被高度協(xié)調(diào)機(jī)制所控制， 一旦調(diào)控機(jī)制出現(xiàn)錯誤， 將會導(dǎo)致人體出現(xiàn)腫瘤[10]。Ki67增殖指數(shù)的高低可以表示腫瘤的分化程度， 增殖指數(shù)越高， 表示患者病情越嚴(yán)重， 患者的生存時間越短[11]。聯(lián)合使用P16/Ki67蛋白檢測對宮頸病變患者進(jìn)行診斷可以顯著提高診斷的正確率， 使患者及早發(fā)現(xiàn)， 及早治療。

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[收稿日期：2017-12-13]