尉杰忠， 閆玉清， 谷青芳， 余鴻強, ， 郭敏芳， 劉春云， 宋國斌， 柴 智， 王 青， 肖保國， 張漢霆， 降雨強， 馬存根△

(1山西大同大學腦科學研究所， 山西 大同 037009； 2中國科學院遺傳與發(fā)育生物學研究所分子發(fā)育生物學國家重點實驗室， 北京 100101； 3山西中醫(yī)藥大學神經(jīng)生物學研究中心， 山西 太原 030024； 4復旦大學附屬華山醫(yī)院神經(jīng)病學研究所， 上海 200025； 5西弗吉尼亞大學健康科學中心行為醫(yī)學與精神病學系及生理學、藥理學與神經(jīng)科學系， 美國 西弗吉尼亞州 摩根城 26506)

阿爾茨海默病(Alzheimer disease，AD)是常見的老年性中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system, CNS)變性疾病。在我國隨著老齡化社會的到來，AD患者迅猛增加，2000年為371萬，2010年為569萬，到2015年增加到950萬[1]，AD已成為越來越嚴峻的威脅老年健康的重大疾病。目前AD 發(fā)病的細胞分子機制尚未闡明，但AD的基本病理特征中神經(jīng)元變性丟失，特別是膽堿能神經(jīng)元變性是AD 形成的基本病理特征，而神經(jīng)元內Tau 蛋白過度磷酸化導致神經(jīng)原纖維纏結(neurofibrillary tangles, NFT)可能是膽堿能神經(jīng)元變性的實質原因[2]。因此，在AD的治療策略中繞過復雜的致病信號通路和分子機制，直接修復受損的膽堿能神經(jīng)元或促進神經(jīng)再生不失為一種保護神經(jīng)細胞，并有效干預AD病理過程的治療策略和藥物研究思路。

神經(jīng)再生一方面指神經(jīng)細胞的修復、神經(jīng)突觸的再生和重建，另一方面指神經(jīng)干細胞的動員、增殖和分化。通過神經(jīng)再生重建神經(jīng)細胞之間的突觸聯(lián)系，實現(xiàn)神經(jīng)再支配，從而使認知功能得以恢復[3]。因此，神經(jīng)細胞的修復、突觸重建連接和內源性神經(jīng)干細胞再生補充成為改善AD基本病理特征的必要結構和條件。然而，在AD的中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理狀態(tài)下，β-淀粉樣蛋白(amyloid β-protein，Aβ)形成神經(jīng)毒性最強的寡聚體導致神經(jīng)損傷變性丟失，使得神經(jīng)細胞修復再生難以實現(xiàn)，歸結其原因為以下幾個方面：(1)長期病理條件下受損的神經(jīng)細胞生長很不穩(wěn)定，損傷后自身修復能力很弱，極易發(fā)生神經(jīng)細胞的凋亡和死亡[4]；(2)神經(jīng)細胞損傷繼發(fā)微環(huán)境中產(chǎn)生神經(jīng)突觸再生抑制蛋白(如Nogo-A、MAG和OMgp等)，抑制神經(jīng)突觸再生，破壞神經(jīng)細胞之間的突觸聯(lián)系，造成神經(jīng)功能逐漸缺失[5]；(3)神經(jīng)損傷后CNS自身動員內源性神經(jīng)干細胞增殖、神經(jīng)元分化和神經(jīng)元突觸形成的能力有限，導致新生神經(jīng)元沒有及時補充更新[6]。

Rho/Rho激酶(Rho kinase,ROCK)信號通路對細胞的增殖分裂和生長遷移等生物活動具有重要的調節(jié)作用。大量研究表明諸多神經(jīng)系統(tǒng)疾病均涉及ROCK的異常激活，從不同的層面影響疾病發(fā)生和發(fā)展[7-8]。ROCK一方面可以調節(jié)Aβ1-42的產(chǎn)生，抑制ROCK可減少Aβ1-42的產(chǎn)生，增加可溶性淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein, APP)或Aβ1-42的前體[9-10]; 另一方面ROCK激活使腦衰蛋白反應調節(jié)蛋白2(collapsin response mediator protein-2,CRMP-2)磷酸化，阻礙微管蛋白組裝，參與神經(jīng)突觸生長抑制[11]。研究顯示抑制ROCK可增加海馬錐體神經(jīng)元突觸密度和長度，促進神經(jīng)突觸再生，改善空間學習和工作記憶[12]。我們的前期研究也證實應用ROCK抑制劑鹽酸法舒地爾(fasudil)可減輕Aβ1-42在腦內的沉積，減輕免疫炎性反應，恢復神經(jīng)功能，改善AD疾病模型淀粉樣前體蛋白/早老素1雙轉基因(amyloid precursor protein/presenilin 1 double transgenic，APP/PS1 Tg)小鼠空間記憶和學習能力[13]。Fasudil可以促進中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)細胞突觸再生、生長錐再建和神經(jīng)功能恢復[14-15]。

體外研究已經(jīng)顯示，ROCK抑制劑或shRNA介導的ROCK基因沉默均能促進神經(jīng)干細胞增殖、分化為功能性神經(jīng)元，并可降低神經(jīng)干細胞分化后細胞的凋亡率[16]。我們前期體內實驗發(fā)現(xiàn)fasudil 可促進體內神經(jīng)干細胞動員和膽堿能神經(jīng)元分化[17]。體外實驗發(fā)現(xiàn)，fasudil可促進原代神經(jīng)干細胞小球形成并增殖，促進神經(jīng)干細胞向Tuj-1+神經(jīng)細胞分化。本研究的目的是在我們前期系列研究的基礎上進一步證實應用ROCK抑制劑是否對APP/PS1 Tg小鼠神經(jīng)再生(包括神經(jīng)細胞突觸修復及神經(jīng)干細胞動員、增殖)有促進作用，為臨床應用ROCK抑制劑的神經(jīng)細胞保護作用治療AD開辟新的治療策略和藥物研發(fā)思路。

材 料 和 方 法

1 實驗動物

雄性8 月齡APP/PS1 Tg小鼠20只(購自南京大學模式動物研究所,動物合格證編號為2009002302753),表達瑞典突變型人695(human 695 with Swedish mutation，HuAPP695swe)和突變型人早老素1δE9(mutant human presenilin 1 deltaE9，PS1-dE9)，隨機分為fasudil干預組(fasudil組，25 mg·kg-1·d-1，參照早期實驗的濃度和劑量[13]，n=10)和生理鹽水組(NS組，9 g/L NaCl，n=10)，以同窩同性別野生型C57BL/6小鼠作為正常對照組(WT組，n=10)，干預療程為2個月。動物實驗均按照國際實驗動物科學理事會的指導方針執(zhí)行，按照國際動物實驗委員會有關的規(guī)章制度進行，山西大同大學動物實驗倫理委員會批準進行動物實驗。實驗動物飼養(yǎng)在山西大同大學實驗動物中心(25 ℃左右，相對濕度40%，屏障環(huán)境)，普通小鼠飼料喂養(yǎng)。

2 主要實驗試劑和儀器

鹽酸法舒地爾注射液(商品名: 川威)購自天津紅日藥業(yè)股份有限公司；兔抗小鼠phospho-APP (Thr668) 抗體、兔抗小鼠phospho-Tau (Ser396)抗體、兔抗小鼠PSD-95抗體和大鼠抗小鼠nestin抗體購自Cell Signaling Technology；兔抗小鼠膽堿乙酰轉移酶(choline acetyltransferase,ChAT)抗體購自Abcam；辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)標記的山羊抗大鼠IgG和HRP的標記山羊抗兔IgG購自碧云天生物技術有限公司；Western blot試劑盒購自Bio-Rad。

Morris水迷宮(Morris water maze，MWM)裝置及SMART 3.0軟件購自深圳瑞沃德生命科技有限公司；ChemiDoc XRS+凝膠成像分析儀購自Bio-Rad;BX51型熒光顯微鏡購自Olympus；CM1950冰凍切片機購自Leica。

3 方法

3.1MWM實驗 采用國際通用的MWM實驗來訓練和測評小鼠空間學習和認知功能。水迷宮為直徑90 cm、高50 cm的圓形水池，水池上方設置攝像頭，確保整個迷宮都在攝像頭視野內，觀察并記錄小鼠的運動軌跡等參數(shù)。調節(jié)水溫在25 ℃左右，水池內用無毒白色素調和，使池水不透明，水池置于安靜、溫和光照的房間，水池壁露出水面的部分隨機位置黏貼4幅黑色圖案(用于動物在MWM中參考定位)。水迷宮通過SMART 3.0軟件分為4個象限：西北(northwest，NW)象限、東北(northeast，NE)象限、西南(southwest，SW)象限和東南(southeast，SE)象限，每個象限又分為內區(qū)和外區(qū)，共有8個區(qū)域。訓練階段在SW 象限的內區(qū)放置一個5.0×5.0 cm的圓形平臺，平臺暴露于水面以上2.5 cm，訓練小鼠從入水點(保持入水位置相同)尋找到并爬上平臺，每天1次，共進行6次訓練，每次時長60 s，如果訓練期間小鼠未找到平臺，則人為引導小鼠到達平臺，并在平臺停留20 s。檢測階段：訓練結束后，平臺位置不變，置于水面以下2.5 cm，同訓練程序，進行6次認知功能測定，通過攝像頭跟蹤小鼠運動軌跡， SMART 3.0軟件系統(tǒng)記錄運動時間和距離的指標，包括：(1)動物從入水點到達平臺位置的時間(latency to target)；(2)動物在平臺所在象限(SW)活動時間占總活動時間的比例[time in SW (%)]；(3)動物在平臺所在象限游泳的距離占總路徑距離的比例[distance in SW (%)]。繪制運動軌跡圖。

3.2免疫熒光組織化學染色法檢測小鼠腦組織p-Tau、ChAT、BrdU和nestin的蛋白表達和分布 各組動物采用腹腔注射0.1 kg/L水合氯醛(每只200 μL)進行常規(guī)麻醉。麻醉穩(wěn)妥后，開胸暴露心臟，用0.1 mol/L PBS灌注左心室，同時剪破右心耳，灌流至肝臟變白，換用4%多聚甲醛心臟灌注固定。冰上快速分離腦組織，10%、20%和30%梯度蔗糖脫水，OCT包埋。液氮下制備組織塊，用冰凍切片機切片，厚度為10 μm，-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。免疫熒光組織化學染色時，切片置于室溫徹底干燥，0.1 mol/L PBS浸洗5 min，3次，10%牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)封閉1 h， 10% BSA聯(lián)合0.03% Triton室溫作用30 min；分別孵育兔抗小鼠p-Tau抗體(1∶500)、兔抗小鼠ChAT抗體(1∶400)和兔抗小鼠PSD-95抗體(1∶800)等抗體，4 ℃濕盒過夜；洗滌后，孵育對應的Alexa Fluor? 488標記的山羊抗兔 II 抗或Alexa Fluor? 555標記的山羊抗大鼠 II 抗(1∶1 000)，避光室溫下孵育2 h；50%甘油封片，熒光顯微鏡觀察蛋白表達和分布。

3.3Western blot法檢測小鼠腦組織p-APP(Thr668)和p-Tau(Ser396)的蛋白水平 腦組織取材同上，在冰上用組織研磨器充分裂解腦組織(按照10 mg 腦組織配比100 μL裂解液)，高速離心提取蛋白，BCA法測定蛋白含量，調整各組蛋白質含量相同，加入上樣緩沖液，100 ℃水浴中變性10 min。通過10% SDS-PAGE分離各組蛋白提取物，轉移至0.2 μm聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride，PVDF)膜。4 ℃冰箱孵育兔抗小鼠p-APP (Thr668)抗體(1∶1 000)、兔抗小鼠p-Tau(Ser396)抗體(1∶1 000)和兔抗小鼠ChAT抗體(1∶1 000);次日加HRP標記山羊抗兔IgG II 抗(1∶10 000)，室溫孵2 h；TBST洗膜，通過凝膠成像分析儀的Image Lab 5.0軟件操作曝光成像并測定吸光度(A)，以A目的蛋白/Aβ-actin的比值表示目的蛋白相對表達水平。

4 統(tǒng)計學處理

所有數(shù)據(jù)被重復測3次，數(shù)據(jù)采用GraphPad Prism 5.0 統(tǒng)計軟件進行處理。計量資料用均數(shù)±標準差(mean±SD)表示。組間比較采用Bonferroni校正的t檢驗，檢驗前先進行單因素方差分析(one-way ANOVA)以確定是否存在整體統(tǒng)計學變化。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

1 Fasudil改善APP/PS1 Tg小鼠認知功能

與WT組相比，NS組的latency to target明顯增加，而time in SW (%)和distance in SW (%)明顯減少(P<0.01)，見圖1，說明AD動物模型成功，認知功能較WT組下降。

Figure 1. The spatial learning of the mice in each group tested by Morris water maze (MWM). A: the typical trajectory diagram of the mice in each group; B: the corresponding parameters of MWM were recorded in the retention test session, representing the time and distance spent by animals from the starting site onto the platform or SW zone. Mean±SD.n=10.*P<0.05,**P<0.01vsNS group．

圖1各組小鼠空間認知功能的MWM測試

在fasudil組，應用fasudil連續(xù)2個月治療的AD模型動物認知功能明顯較NS組改善，latency to target時間縮短，而time in SW (%)和distance in SW(%)明顯提高(P<0.05)，見圖1。這一結果提示fasudil可改善AD疾病模型APP/PS1 Tg小鼠的認知功能。

2 Fasudil明顯減少p-Tau、增加p-APP在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的蛋白水平

免疫熒光組織化學染色顯示，p-Tau在10月齡APP/PS1 Tg小鼠的海馬齒狀回、CA3區(qū)和大腦皮層呈散在分布，形狀不規(guī)則,與WT組相比，NS組上述腦區(qū)p-Tau的蛋白水平明顯增加,見圖2；Western blot分析提示，NS組腦內的p-Tau 蛋白水平均高于WT組(P<0.05),見圖3。通過fasudil治療后APP/PS1 Tg小鼠上述腦區(qū)p-Tau的蛋白水平明顯較NS組減少, Western blot檢測提示，fasudil組腦內的p-Tau 蛋白水平較NS組明顯下降(P<0.01),見圖2、3。另外，fasudil治療促進小鼠腦內p-APP蛋白水平增加(P<0.05)，增加可溶性APP可能間接導致腦內寡聚體Aβ的減少，見圖3。

Figure 2. The phosphorylation of Tau protein in hippocampal dentate gyrus, hippocampal CA3 area and cerebral cortex of the mice in the three groups detected by immunohistochemistry (×40).

圖2小鼠海馬齒狀回、CA3區(qū)和大腦皮層的p-Tau蛋白水平和分布

Figure 3. The protein levels of p-Tau and p-APP in the brain tissues of the mice in the three groups determined by Western blot．Mean±SD．n=3.*P<0.05,**P<0.01vsNS group.

圖3Westernblot法檢測各組小鼠腦內p-Tau和p-APP的蛋白水平

3 Fasudil促進海馬膽堿能神經(jīng)元再生

ChAT是催化乙酰膽堿合成的酶，表達在膽堿能神經(jīng)元中，ChAT的檢測常被作為膽堿能神經(jīng)元的標志物，膽堿能神經(jīng)元形態(tài)和數(shù)量的變化用于反映AD的認知功能水平[18]。免疫熒光組織化學染色結果顯示，10月齡APP/PS1 Tg小鼠(NS組)的海馬齒狀回ChAT的表達較WT組減少，神經(jīng)元軸突明顯縮短，部分神經(jīng)元的形態(tài)不完整;通過2個月的fasudil治療后，fasudil組的APP/PS1 Tg小鼠海馬齒狀回膽堿能神經(jīng)元(ChAT+/BrdU+)數(shù)量較NS組增多,而且膽堿能神經(jīng)元的軸突長度明顯較NS組延長，恢復部分膽堿能神經(jīng)元的形態(tài),見圖4。Western blot分析也證實，fasudil組腦內ChAT蛋白水平明顯較NS組上升(P<0.01),見圖5。

Figure 4. The expression of ChAT in hippocampal dentate gyrus of the mice in the three groups detected by immunohistochemistry(×40).

圖4小鼠海馬齒狀回膽堿能神經(jīng)元ChAT的表達

Figure 5. The protein levels of ChAT in the brain tissues of the mice in the three groups determined by Western blot. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsNS group．

圖5Westernblot法檢測各組小鼠腦內ChAT蛋白水平

4 Fasudil促進海馬齒狀回顆粒下區(qū)(subgranular zone,SGZ)和腦室下區(qū)(subventricular zone,SVZ)內源性神經(jīng)干細胞增殖

成體小鼠腦內神經(jīng)干細胞發(fā)生主要在大腦的SVZ和SGZ 2個區(qū)域[19]。成體神經(jīng)干細胞的動員和發(fā)生主要參與了大腦的可塑性、學習與記憶[20-22]。首先我們觀察了各組SVZ和SGZ細胞增殖(BrdU+細胞)情況，免疫熒光組織化學染色結果顯示在NS組小鼠腦SVZ和SGZ細胞增殖較WT組明顯減少，而fasudil組在上述2個腦區(qū)有大量細胞增殖，見圖6。為了進一步確認增殖的細胞類型，我們檢測了SVZ nestin和BrdU的表達情況，免疫熒光組織化學染色結果顯示，在小鼠腦SVZ，NS組nestin+BrdU+細胞較WT組減少，而fasudil組較NS組明顯增多，見圖7。上述結果證實，fasudil在SGZ和SVZ這2個腦內神經(jīng)干細胞發(fā)生區(qū)域對內源性神經(jīng)干細胞增殖有積極的促進作用。

Figure 6. The number of BrdU+cells in brain subgranular zone (SGZ) and subventricular zone (SVZ) of the mice in the three groups detected by immunohistochemistry (×40). Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vsNS group．

圖6小鼠腦內SGZ和SVZBrdU+細胞的數(shù)量

Figure 7. The number of nestin+BrdU+proliferating neural stem cells in brain SVZ of the mice in the three groups detected by immunohistochemistry (×40). Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vsNS group．

圖7各組小鼠腦內SVZnestin+BrdU+增殖的神經(jīng)干細胞的數(shù)量

討 論

目前AD的病理機制尚未完全闡明，AD的治療仍缺乏有效藥物。已獲批準的用于防治AD的藥物包括乙酰膽堿酯酶抑制劑(如多奈哌齊、利斯的明)及NMDA受體拮抗劑(如美金剛)等只能延緩認知功能進行性障礙的癥狀，但不能影響整個疾病的進展。AD理想的治療是希望從根本上阻斷神經(jīng)元繼續(xù)變性死亡或者修復正在損害的神經(jīng)元，甚至動員神經(jīng)干細胞的潛力及時補充丟失的神經(jīng)元，促進突觸重塑，恢復記憶，從而達到真正意義上的治療[23]。AD的病因雖然不清晰，但最為明顯的病理特征是前腦基底核內膽堿能神經(jīng)元的變性和丟失，這些核團聚集腦內90%以上的膽堿能神經(jīng)元。盡管神經(jīng)元變性丟失的原因很多，如膽堿能學說、β-淀粉樣蛋白瀑布學說、泛素-蛋白酶體系統(tǒng)失衡、神經(jīng)血管和氧化應激學說等[24]，但目前仍缺乏普遍的共識。其中Tau 蛋白學說是一個重要的學說，過度磷酸化的Tau 蛋白影響了膽堿能神經(jīng)細胞骨架的微管蛋白的穩(wěn)定結構，導致p-Tau在神經(jīng)細胞沉積形成NFT，破壞神經(jīng)細胞及神經(jīng)突觸的正常功能，發(fā)生神經(jīng)元變性丟失。了解AD神經(jīng)變性的細胞和分子基礎，尋找有效干預AD的策略是臨床神經(jīng)科學迫切需要解決的現(xiàn)實問題。

Rho/ROCK信號通路是調節(jié)細胞骨架微管蛋白重要的信號通路，ROCK也是細胞骨架中肌動蛋白的關鍵成分絲氨酸/蘇氨酸激酶。越來越多的研究開始關注ROCK在神經(jīng)細胞中調控神經(jīng)突觸生長抑制、神經(jīng)軸突再生等涉及神經(jīng)細胞骨架的細胞分子機制[25]。激活ROCK導致神經(jīng)細胞生長錐萎縮和軸突抑制，而抑制ROCK可減輕多種原因導致的神經(jīng)損傷，促進神經(jīng)細胞的存活和神經(jīng)突起的延長[26]。法舒地爾是一種具有水溶性和脂溶性基團、易溶于水、可自由通過血-腦屏障的小分子化合物，通過與ATP競爭ROCK催化區(qū)的ATP結合位點而阻斷ROCK的活性。在本研究中，應用ROCK抑制劑fasudil持續(xù)2個月的療程治療8月齡的APP/PS1 Tg小鼠，觀察fasudil對APP/PS1 Tg小鼠認知功能、CNS內海馬和皮層p-Tau蛋白表達的影響。通過MWM測試和SMART 3.0軟件系統(tǒng)分析，fasudil治療組較NS組動物到達平臺位置的時間縮短，在平臺所在象限活動時間和距離比例均增加，證實fasudil可改善APP/PS1 Tg小鼠空間認知功能。進一步的細胞分子研究發(fā)現(xiàn)，fasudil促進APP/PS1 Tg小鼠CNS中p-Tau 蛋白水平下調，通過增加p-APP蛋白(可溶性APP)水平，間接減少腦內Aβ的沉積。本研究觀察fasudil的這些調控機制可能是改善APP/PS1 Tg小鼠認知功能障礙的原因之一。目前，fasudil已經(jīng)是臨床中獲批使用的擴血管藥物，主要用于防治蛛網(wǎng)膜下腔出血后血管痙攣，這種通過血管擴張作用，增加局部腦流量進而改善APP/PS1 Tg小鼠認知功能的作用還需后期研究，進一步觀察和探討。

在AD的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后，由于微環(huán)境中神經(jīng)生長刺激因子的缺乏和多種神經(jīng)突觸再生抑制蛋白(如Nogo-A、MAG 或OMgp等)的存在，導致ROCK的活化[27]，引起肌球蛋白輕鏈磷酸化，致使肌球蛋白收縮，從而改變神經(jīng)細胞骨架動力學，導致神經(jīng)細胞生長錐的脫落和突觸再生抑制，使神經(jīng)的再生過程被阻斷[25]。本研究觀察到，10月齡APP/PS1 Tg小鼠的海馬區(qū)表達ChAT的膽堿能神經(jīng)元明顯較WT組減少，神經(jīng)元軸突縮短，形態(tài)不完整。而通過fasudil治療抑制ROCK的活化，逆轉神經(jīng)再生抑制的過程，fasudil組的APP/PS1 Tg小鼠海馬DG區(qū)膽堿能神經(jīng)元數(shù)量增多，而且神經(jīng)軸突形態(tài)明顯延長。我們前期體內實驗發(fā)現(xiàn)fasudil 可促進體內神經(jīng)干細胞動員和膽堿能神經(jīng)元分化[17]。體外實驗顯示fasudil可促進原代神經(jīng)干細胞增殖并形成小球，并向神經(jīng)元分化。本研究通過免疫熒光組織化學染色的方法證實在fasudil治療組APP/PS1 Tg小鼠的SVZ有大量nestin+BrdU+的內源性神經(jīng)干細胞增殖。ROCK抑制劑fasudil通過抑制ROCK的過度激活，一方面促進APP/PS1 Tg小鼠海馬膽堿能神經(jīng)元細胞骨架修復，神經(jīng)軸突再生，另一方面促進SGZ和SVZ內源性神經(jīng)干細胞動員和增殖，為下一步分化為神經(jīng)元，增補丟失或變性的神經(jīng)元提供基礎。

本研究應用ROCK抑制劑fasudil抑制APP/PS1 Tg小鼠CNS內p-Tau蛋白水平，使NFT沉積下降，減少過度磷酸化Tau 蛋白對膽堿能神經(jīng)元骨架的影響，修復神經(jīng)元軸突變性。同時通過增加可溶性p-APP蛋白水平，間接減少毒性寡聚體Aβ的沉積[13]，緩解由p-Tau和Aβ沉積對神經(jīng)元的毒性損害。此外，fasudil還促進膽堿能神經(jīng)元細胞骨架修復，動員內源性神經(jīng)干細胞增殖，對APP/PS1 Tg小鼠認知功能障礙、神經(jīng)損傷再生都具有潛在的治療作用。隨著對Rho/ROCK信號分子在神經(jīng)退行性疾病中的作用和相關機制的研究，ROCK抑制劑可促進神經(jīng)保護和神經(jīng)再生形成，將為這類神經(jīng)系統(tǒng)疾病功能恢復提供新的思路和作用靶點。