王雷　于榮

中圖分類(lèi)號(hào) R917 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）01-0062-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.01.16

摘 要 目的：建立同時(shí)測(cè)定利爾眠膠囊中鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛含量的方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為Agilent Zorbax SB-C18，流動(dòng)相為乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（23 ∶ 77，V/V），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為345 nm（0～20 min，鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬?。┖?90 nm（>20～30 min，桂皮醛），柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為10 μL。結(jié)果：鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛進(jìn)樣量檢測(cè)線性范圍分別為0.036 80～0.736 0、0.016 76～0.335 2、0.004 140～0.082 80 μg（r≥0.999 5）；檢測(cè)限分別為0.110 4、0.050 3、0.124 2 ng，定量限分別為0.368 0、0.167 6、0.414 0 ng；精密度、穩(wěn)定性（12 h）、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD均<2.0%（n=6）；加樣回收率為96.16%～99.73%，RSD為0.99%～1.21%（n=6）。結(jié)論：建立的方法操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好，適用于同時(shí)測(cè)定利爾眠膠囊中鹽酸小檗堿等3種成分的含量。

關(guān)鍵詞 利爾眠膠囊；高效液相色譜法；鹽酸小檗堿；鹽酸巴馬?。还鹌と?；含量測(cè)定

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish a method for simultaneous determination of 3 components in Liermian capsule， including berberine hydrochloride， palmatine hydrochloride and cinnamaldehyde. METHODS： HPLC method was adopted. The determination was performed on Agilent Zorbax SB-C18 with mobile phase consisted of acetonitrile-0.05 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution （23 ∶ 77， V/V） at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelengths were set at 345 nm （0-20 min， berberine hydrochloride， palmatine hydrochloride） and 290 nm （>20-30 min， cinnamaldehyde）， and column temperature was 30 ℃. The sample size was 10 μL. RESULTS： The linear ranges of berberine hydrochloride， palmatine hydrochloride and cinnamaldehyde were 0.036 80-0.736 0， 0.016 76-0.335 2， 0.004 140-0.082 80 μg （r≥0.999 5）. The limits of detection were 0.110 4， 0.050 3，0.124 2 ng， and the limits of quantitation were 0.368 0， 0.167 6， 0.414 0 ng， respectively. RSDs of precision， stability （12 h） and reproducibility tests were all lower than 2.0% （n=6）. The recoveries were 96.16%-99.73% （RSD=0.99%-1.21%， n=6）. CONCLUSIONS： Established method is simple， reproducible and suitable for simultaneous determination of 3 components such as berberine hydrochloride in Liermian capsule.

KEYWORDS Liermian capsule； HPLC； Berberine hydrochloride； Palmatine hydrochloride； Cinnamaldehyde； Content determination

利爾眠膠囊是由黃連、肉桂兩味藥材組成的中藥復(fù)方制劑，具有清心降火、交通心腎的作用，用于心腎不交所致的失眠多夢(mèng)、心悸不寧[1-2]等癥。其中黃連的主要成分為鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀，這兩種成分具有抗菌、抗炎、抗焦慮、抗抑郁、治療心血管系統(tǒng)疾病等多種藥理作用[3-4]；肉桂的主要成分為桂皮醛，該成分具有鎮(zhèn)靜、抗炎、解熱鎮(zhèn)痛、改善心血管疾病、抗菌等藥理作用[5]。利爾眠膠囊收載于《國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編·內(nèi)科·心系分冊(cè)》，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為WS-10171（ZD-0171）-2002[6]，其含量測(cè)定采用薄層掃描法測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，方法專(zhuān)屬性不強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確性差，且樣品處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，步驟煩瑣。目前，有關(guān)利爾眠膠囊的質(zhì)量控制研究亦未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。因此，筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)[7-13]，采用高效液相色譜法（HPLC）建立了同時(shí)測(cè)定利爾眠膠囊黃連中鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀，肉桂中桂皮醛含量的方法，以期為完善該制劑的質(zhì)量控制方法提供參考。

1 材料

1.1 儀器

1200型HPLC儀，包括四元泵、紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、ChemStation化學(xué)工作站（美國(guó)Agilent公司）；Mettler AE240 型十萬(wàn)分之一電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；KQ3200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

利爾眠膠囊（成都九芝堂金鼎藥業(yè)有限公司，批號(hào)：160412、160921、170327，規(guī)格：0.35 g/粒）；鹽酸小檗堿對(duì)照品（批號(hào)：110713-201212）、鹽酸巴馬汀對(duì)照品（批號(hào)：110732-201611）、桂皮醛對(duì)照品（批號(hào)：710-200011）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度均>86%；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（23 ∶ 77，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：345 nm（0～20 min，鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬?。?、290 nm（>20～30 min，桂皮醛）；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對(duì)照品溶液 分別精密稱(chēng)取鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛對(duì)照品58.95 、24.14、10.35 mg，加甲醇分別制成每1 mL含鹽酸小檗堿2.044 0 mg、鹽酸巴馬汀0.838 1 mg、桂皮醛0.414 0 mg的單一對(duì)照品貯備液；再分別精密量取鹽酸小檗堿對(duì)照品貯備液0.9 mL、鹽酸巴馬汀對(duì)照品貯備液1.0 mL、桂皮醛對(duì)照品貯備液0.5 mL，置于同一50 mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 取樣品內(nèi)容物適量，研細(xì)，取約100 mg，精密稱(chēng)定，置于200 mL量瓶中，加甲醇定容，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲（功率：150 W，頻率：40 kHz，下同）處理30 min，放冷至室溫，再次稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液 按樣品處方比例和制備工藝分別配制缺黃連、缺肉桂的陰性樣品，再按“2.2.2”項(xiàng)下制備方法制成陰性樣品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜。結(jié)果，在該色譜條件下，各待測(cè)成分間、待測(cè)成分與雜質(zhì)峰間均能達(dá)到基線分離，分離度均>1.5，其他成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，理論板數(shù)以鹽酸小檗堿峰計(jì)不低于3 000，詳見(jiàn)圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液1、2、5、10、15、20 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以待測(cè)成分進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（x，μg）、峰面積為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性回歸，得鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛的回歸方程分別為y=4 559x-15.05（r=0.999 6）、y=2 836x+7.529（r=0.999 8）、y=17 173x+28.62（r=0.999 5）。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛進(jìn)樣量檢測(cè)線性范圍分別為0.036 80～0.736 0、0.016 76～ 0.335 2、0.004 140～0.082 80 μg。

2.5 檢測(cè)限與定量限考察

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，倍比稀釋?zhuān)础?.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為3 ∶ 1時(shí)，得檢測(cè)限；當(dāng)信噪比為10 ∶ 1時(shí)，得定量限。結(jié)果，鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛的檢測(cè)限分別為0.110 4、0.050 3、0.124 2 ng，定量限分別為0.368 0、0.167 6、0.414 0 ng。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛峰面積的RSD分別為0.41%、0.37%、0.85%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)：160412）適量，分別在室溫下放置0、1、2、4、8、12 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛峰面積的RSD分別為1.48%、0.99%、1.63%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批（批號(hào)：160412）樣品內(nèi)容物適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算樣品含量。結(jié)果，鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛含量的平均值分別為68.85、32.13、7.57 mg/g，RSD分別為0.85%、1.89%、1.35%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知含量的樣品（批號(hào)：160412）適量，共6份，每份約50 mg，分別置于200 mL量瓶中，各加入待測(cè)成分對(duì)照品適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.10 樣品含量測(cè)定

取3批樣品內(nèi)容物適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算樣品含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 提取條件的選擇

筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)[4]，比較了加熱回流和超聲兩種提取方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用上述兩種提取方法鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的含量相當(dāng)；而采用超聲提取時(shí)桂皮醛的含量較高，這可能與桂皮醛具有揮發(fā)性，長(zhǎng)時(shí)間加熱導(dǎo)致其損失有關(guān)。綜合考慮選擇超聲提取為本試驗(yàn)的提取方法。筆者還比較了甲醇及不同比例甲醇-水作為溶劑的提取效果，結(jié)果顯示甲醇為提取溶劑時(shí)，上述3種成分的提取含量最高，色譜中雜質(zhì)峰最少，故確定甲醇為本試驗(yàn)的提取溶劑。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

參考相關(guān)文獻(xiàn)[14-18]可知，鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的特征吸收波長(zhǎng)為345 nm[8-10]，桂皮醛的特征吸收波長(zhǎng)為290 nm。因此，本試驗(yàn)通過(guò)HPLC儀的波長(zhǎng)切換功能，選擇上述各待測(cè)成分的特征吸收波長(zhǎng)進(jìn)行含量測(cè)定。

3.3 對(duì)結(jié)果的討論

利爾眠膠囊標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：本品每粒含黃連以鹽酸小檗堿計(jì)，不得少于17.5 mg。本研究3批樣品中的鹽酸小檗堿含量均>17.5 mg/粒，符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[6]。

綜上所述，本研究建立的方法操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好，適用于同時(shí)測(cè)定利爾眠膠囊中鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、桂皮醛的含量。

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（收稿日期：2017-06-14 修回日期：2017-08-14）

（編輯：劉 柳）