李金飛 賈志姣 綜述 丁雷 審校

耳鳴動(dòng)物模型的建立，對(duì)于其機(jī)制、病理及臨床診治研究至關(guān)重要。筆者查閱大量相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道并予以整理歸納，進(jìn)行綜述以供參考。

1 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)耳鳴造模發(fā)展

1.1 經(jīng)典造模法

1.1.1 飲水抑制 Jastreboff等［1］在1988年用飲水抑制法，背景噪聲停止即刻對(duì)大鼠進(jìn)行電擊刺激，經(jīng)過一段時(shí)間強(qiáng)化訓(xùn)練，形成“背景噪聲停止大鼠舔水減少”的條件反射，統(tǒng)計(jì)背景噪聲停止前后各1分鐘內(nèi)大鼠的舔水率，證實(shí)水楊酸可致大鼠感受到耳鳴，這一模型已得到廣泛承認(rèn)，拓展了耳鳴的深入研究。

1.1.2 跳臺(tái)反射 Guitton等［2］訓(xùn)練大鼠建立一種聲音刺激-足底電擊-跳臺(tái)逃避的條件反射，通過觀察大鼠無聲條件下頻繁的跳臺(tái)逃避行為行為（假陽性反應(yīng)），同樣證實(shí)大鼠注射水楊酸鈉后感受到耳鳴。

與飲水抑制法相比，跳臺(tái)反射減少了大鼠抑水過程中全身狀態(tài)的影響，且影響因素可控，適用于對(duì)動(dòng)物身體狀態(tài)有特殊要求的手術(shù)干預(yù)等情況；大鼠對(duì)條件反射聲音敏感，記憶時(shí)間可長達(dá)6～7天，適用于周期相對(duì)較長的耳鳴實(shí)驗(yàn)。

1.1.3 聲音驚嚇刺激 Turner等［3］發(fā)現(xiàn)驚嚇可由噪聲產(chǎn)生--聽覺驚跳反射，并制作了聲音驚嚇刺激反射(whole-bodystartle reflex，WBS反射)大鼠耳鳴模型。該模型對(duì)動(dòng)物狀態(tài)影響更小，且無需訓(xùn)練，建模過程的簡化可節(jié)省大量時(shí)間；但位于腦干下部的驚嚇反射中樞與耳鳴相同中樞水平的交叉，可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，故需設(shè)計(jì)對(duì)照組。

1.2 經(jīng)典造模改進(jìn)

飲水抑制法操作復(fù)雜，設(shè)備條件要求較高，大鼠特定時(shí)間內(nèi)舔水次數(shù)可達(dá)350～1600次，甚至6000～8000次，如果沒有特殊設(shè)備根本無法檢測(cè)。從應(yīng)用角度出發(fā)，用其他行為學(xué)指標(biāo)代替舔水率，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)：Bauer等［4］食物獎(jiǎng)勵(lì)法，觀察口服水楊酸鈉溶液大鼠的攝食次數(shù)；Ruttiger等［5］給水獎(jiǎng)勵(lì)法，記錄穿梭箱內(nèi)大鼠來回穿梭找水的次數(shù)；李明等［6］食物抑制法，觀察大鼠踏板取食的次數(shù)；賈明輝等［7］研究表明，行為學(xué)指標(biāo)“舔水時(shí)間或次數(shù)”代替“舔水率”，均能夠很好的證明大鼠感覺到耳鳴的存在。Heffner還建立了單側(cè)耳鳴動(dòng)物模型[8]，即給予有渴覺的倉鼠左右兩個(gè)不同方向的聲刺激，當(dāng)倉鼠成功辨明聲音來源的方向并向相應(yīng)的方向移動(dòng)時(shí)給予飲水獎(jiǎng)勵(lì)，而移動(dòng)方向錯(cuò)誤時(shí)給予微弱的電擊。

隨著對(duì)跳臺(tái)反射模型相關(guān)影響因素的研究，該模型得到不斷的完善。梅國江等［9］用相互貫通的六邊形小室訓(xùn)練器替代跳臺(tái)進(jìn)行電擊刺激，克服了同類行為試驗(yàn)方法的缺陷；張恩柱等［10］將刺激時(shí)間及訓(xùn)練間隔時(shí)間加以適當(dāng)改進(jìn)，提供了更為方便、可行、有效的耳鳴建模法，具有成功率高、穩(wěn)定且可操作性好的優(yōu)點(diǎn)，已成為建立耳鳴模型的一個(gè)方向，并廣泛應(yīng)用于耳鳴發(fā)生機(jī)制及藥物對(duì)耳鳴治療效果觀察方面的研究［11］。

1.3 耳鳴誘發(fā)方法

耳毒性藥物法和噪聲，仍是目前較多采用的耳鳴誘發(fā)方法[12]。

1.3.1 耳毒性藥物法 水楊酸鈉注射2小時(shí)后，急性耳鳴可作為首發(fā)或唯一癥狀，因其較易通過血腦屏障作用于聽覺中樞，調(diào)節(jié)五羥色胺和γ-氨基丁酸（GABA）活動(dòng)而誘發(fā)耳鳴［13，14]。水楊酸鹽引起耳鳴的成功率高、操作簡單、全身副作用小，產(chǎn)生的耳鳴聲音特性與10 kHz、70 dB的純音基本一致［15］，能夠被優(yōu)化同步記錄神經(jīng)震蕩活動(dòng)，高效、客觀的檢測(cè)到大鼠是否感知耳鳴［16］，并有國內(nèi)學(xué)者在此造模基礎(chǔ)上發(fā)表了多篇報(bào)道［17，18]。此外，應(yīng)注意造模過程中背景噪聲盡可能與其聲學(xué)特點(diǎn)相一致。奎寧與水楊酸鈉引發(fā)的動(dòng)物耳鳴行為相似，可解釋為動(dòng)物感受到耳鳴的結(jié)果。Ochi等[19]發(fā)現(xiàn)奎寧和水楊酸鈉對(duì)貓聽皮層神經(jīng)元活性的影響相似，推測(cè)給藥后神經(jīng)元自發(fā)放電同步化的增加可能與耳鳴有關(guān)。

1.3.2 強(qiáng)噪聲暴露法 噪聲雖然可使毛細(xì)胞保持完整性，但會(huì)損害相應(yīng)的傳入神經(jīng)末端，并進(jìn)一步損害蝸神經(jīng)，使神經(jīng)同步放電活動(dòng)增加，傳入興奮抑制失衡，導(dǎo)致中樞神經(jīng)的重塑[20，21]；Szczepaniak[22]發(fā)現(xiàn)強(qiáng)噪聲降低GABA對(duì)下丘神經(jīng)元的影響，導(dǎo)致下丘可塑性的改變，從而引發(fā)耳鳴和聽覺過敏。

1.3.3 手術(shù)破壞法 傳入神經(jīng)阻滯可能是引發(fā)耳鳴的機(jī)制，因手術(shù)破壞耳蝸及聽神經(jīng)導(dǎo)致聽中樞重塑和后期聽神經(jīng)元活性增高，可被聽中樞解釋為耳鳴。觀察發(fā)現(xiàn)[23]，接受手術(shù)的患者中耳鳴的發(fā)生率僅為50%，若此法應(yīng)用于動(dòng)物造模，推測(cè)僅可能導(dǎo)致部分動(dòng)物耳鳴，在耳鳴與變化的代謝活性之間不能建立確切的聯(lián)系。

1.4 造模判定

動(dòng)物行為學(xué)指標(biāo)是判定耳鳴模型成功與否的重要評(píng)價(jià)方法。飲水、舔食、逃避等行為都是動(dòng)物容易習(xí)得的，訓(xùn)練動(dòng)物對(duì)聲音刺激和無聲狀態(tài)做出不同的反應(yīng)，強(qiáng)化形成條件反射后進(jìn)一步進(jìn)行耳鳴誘導(dǎo)，觀察它們無聲狀態(tài)時(shí)的行為，若動(dòng)物感受到耳鳴，則它們的行為應(yīng)該與之前有聲音刺激時(shí)相同［24］。

2 傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)耳鳴造模應(yīng)用

2.1 應(yīng)用現(xiàn)狀

作為中醫(yī)藥造模因素的病因盡可能滿足兩個(gè)條件：①病因必須是證候模型的主因；②病因所致病變既主要證候。若一味采用西醫(yī)耳鳴病理模型，受“外因論”與“局部定位論”的束縛，會(huì)出現(xiàn)臨床觀察與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不同，不能夠很好的闡明耳鳴中醫(yī)藥治療機(jī)制。

“辨證論治”是中醫(yī)精華，而辯證又是論治的前提，證型不同則治療有別，準(zhǔn)確辯證才能提高療效。隨著中醫(yī)藥研究的重點(diǎn)從病向證轉(zhuǎn)移，復(fù)方和中藥的使用主要是針對(duì)“證”，因此，建立適合中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論研究的中醫(yī)動(dòng)物模型非常重要。

2.2 肝郁脾虛證候模型探索

通過對(duì)名老中醫(yī)大宗耳鳴醫(yī)案的證型及用藥頻率分析［25，26］，發(fā)現(xiàn)不同于傳統(tǒng)腎虛耳鳴證型，當(dāng)前耳鳴肝郁脾虛證型多見，是肝失疏泄、脾失健運(yùn)所表現(xiàn)的證候。有關(guān)肝郁脾虛證動(dòng)物模型的復(fù)制有四氯化碳(CCl4)注射法［27］、高脂飼料飼喂與CCl4注射聯(lián)合造模法［28］、夾尾激怒加苦寒瀉下法［29］、限食限動(dòng)加醋酸結(jié)腸內(nèi)注射法［30］、利血平皮下注射法［31］；但上述方法均以藥物損傷致病，有駁于中醫(yī)發(fā)病學(xué)原理。

根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查，饑飽失宜、郁怒是肝郁脾虛證的主要病因，可作為動(dòng)物模型的造模因素。李艷彥等［32］用慢性束縛應(yīng)激+過度疲勞+飲食失節(jié)的復(fù)合方法，復(fù)制中醫(yī)肝郁脾虛證大鼠模型：慢性束縛使大鼠情緒受抑而近情志不遂，致肝郁；游泳活動(dòng)致疲勞，隔日喂食致饑飽失常，二者相加類同于中醫(yī)飲食勞倦，損傷大鼠脾胃。在模型評(píng)價(jià)上，采用動(dòng)物宏觀行為學(xué)指標(biāo)(癥)與生理、生化中涉及肝郁、脾虛證有關(guān)的指標(biāo)相結(jié)合，在造模不同階段進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察，全面掌握模型的生物學(xué)特點(diǎn)。觀察還發(fā)現(xiàn)，肝郁、脾虛、肝郁脾虛3個(gè)證候模型均存在一定程度的免疫功能異常，大鼠血清IL-2、IL-6及胸腺、脾臟指數(shù)均顯著降低。但同中有異：肝郁證主要涉及胸腺功能下降及免疫應(yīng)答早期細(xì)胞因子釋放不足，血清IL-1顯著降低、TNF-a顯著升高；脾虛證還涉及細(xì)胞免疫功能抑制，脾T淋巴細(xì)胞增殖率顯著降低、血清IL-I顯著升高；肝郁脾虛證不僅包括了肝郁和脾虛的免疫異常環(huán)，可能還伴有體液免疫功能抑制，血清TNF-a和IL-1均顯著升高，脾T淋巴細(xì)胞增殖率顯著降低［33］；此外，大鼠血清T3、T4、TRH、TSH均見顯著性降低［34］。

借鑒于已有經(jīng)驗(yàn)［32］，在跳臺(tái)反射基礎(chǔ)上聯(lián)合慢性束縛+過度疲勞+飲食失節(jié)復(fù)合病因造模法，制造“肝郁脾虛耳鳴證候”大鼠模型，使得“病癥”及“證”的生理及病理狀態(tài)更加符合中醫(yī)病因病機(jī)原理。

目前，耳鳴尚無客觀診斷指標(biāo)，按照上述動(dòng)物模型制作原理，通過行為學(xué)觀測(cè)能夠證明動(dòng)物確實(shí)感受到耳鳴，雖然尚有不足之處，但其作用不可替代。僅以此文總結(jié)耳鳴造模的方法，旨在加深對(duì)耳鳴的認(rèn)識(shí)，為耳鳴的發(fā)病機(jī)制和治療等相關(guān)研究提供幫助和參考。