黃進(jìn)明

漳州片仔癀藥業(yè)股份有限公司、福建省片仔癀天然醫(yī)藥研發(fā)企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(福建漳州 363000)

片仔癀是我國傳統(tǒng)的名貴中成藥，國家一級中藥保護(hù)品種，處方組成和工藝制法受國家保護(hù)，由漳州片仔癀藥業(yè)股份有限公司獨(dú)家生產(chǎn)。處方由牛黃、麝香、三七、蛇膽等多種中藥材組成，具有清熱解毒、消腫止痛、涼血化瘀的作用[1]。近年來，片仔癀防治腫瘤領(lǐng)域取得了一定的進(jìn)展和成果，其抗腫瘤的作用及機(jī)制研究是目前一大熱點(diǎn)。相關(guān)研究表明[2-3]，片仔癀具有抗腫瘤、各種類型的病毒性肝炎、膽囊炎等多種作用。本文就片仔癀抗腫瘤的臨床應(yīng)用及其作用機(jī)制的研究進(jìn)展進(jìn)行梳理與綜述，以期為片仔癀的進(jìn)一步開發(fā)及在腫瘤治療中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 抗腫瘤作用

1.1 大腸癌 莊群川等[4]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀在體內(nèi)外能通過調(diào)控Hedgehog(Hh)信號通路抑制大腸癌細(xì)胞的增殖作用，誘導(dǎo)大腸癌細(xì)胞凋亡。片仔癀能顯著抑制人大腸癌HT-29細(xì)胞的增殖并調(diào)控與抗凋亡作用相關(guān)靶基因的表達(dá)，如Bcl-XL和Survivin等，以及顯著下調(diào)Hedgehog通路重要因子Shh、Ptch、Smo、Gli1的mRNA表達(dá)。另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)[5]，片仔癀可誘導(dǎo)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞的凋亡，其作用機(jī)制可能與通過降低人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞Pim激酶的mRNA的表達(dá)有關(guān)。Lin等[6]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀可通過內(nèi)源性的線粒體依賴途徑，抑制Bcl-2的表達(dá)、促進(jìn)Bax的表達(dá)和激活caspase3來抑制HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞的生長，誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡。魏麗慧等[7-8]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀能有效抑制HT-29、SW620細(xì)胞的增殖作用，使HT-29、SW620結(jié)腸癌細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯改變，減少HT-29、SW620結(jié)腸癌干細(xì)胞的數(shù)量。

Chen等[9]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀可通過增加大腸癌HCT-8/5-FU細(xì)胞miR-22的表達(dá)，減少c-Myc的表達(dá)，片仔癀可激活Caspase-3和Caspase-9蛋白的表達(dá)，同時調(diào)控Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá)，抑制耐藥細(xì)胞的增殖進(jìn)而發(fā)揮逆轉(zhuǎn)耐藥能力。沈阿靈等[10]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀可顯著抑制大腸癌HCT-8/5-FU細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，且顯著正性調(diào)控轉(zhuǎn)移相關(guān)miR-200a的表達(dá)，負(fù)性調(diào)控其靶基因ZEB1和ZEB2表達(dá)，正性調(diào)控ZEB1/2下游E-cadherin的表達(dá)和負(fù)性調(diào)控N-cadherin的表達(dá)，提示可能是其抑制大腸癌HCT-8/5-FU細(xì)胞轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制。Shen等[11]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀可通過抑制TGF-β途徑有效逆轉(zhuǎn)多藥耐藥性(MDR)，下調(diào)人結(jié)直腸癌HCT-8/5-FU細(xì)胞中ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2的表達(dá)，并抑制人結(jié)直腸癌HCT-8/5-FU細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。黃進(jìn)明等[12]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀可抑制HCT-8/5-FU細(xì)胞生長和藥物外排功能，通過下調(diào)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCC1的表達(dá)是其重要機(jī)制之一。蔡巧燕等[13]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀能夠劑量依賴性的逆轉(zhuǎn)HCT-8/5-FU細(xì)胞的耐藥性。逆轉(zhuǎn)耐藥性的重要途徑包括抑制耐藥腫瘤細(xì)胞的增殖，提示片仔癀發(fā)揮逆轉(zhuǎn)耐藥能力可能與其抑制5-Fu結(jié)腸癌耐性細(xì)胞的增殖有關(guān)。符彩選等[14]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀能顯著改善大腸癌移植瘤小鼠因5-FU治療引起的腸道損傷及外周血白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞減少等毒副作用。

Wan等[15]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀通過上調(diào)miR-34c-5p表達(dá)，抑制了G0/G1期和S期之間的細(xì)胞周期，降低了細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)和cMyc的表達(dá)，增加了p53的表達(dá)，進(jìn)而達(dá)到抑制人結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞活力。Chen等[16]，研究發(fā)現(xiàn)片仔癀可以通過抑制HIF-1α/VEGF-A途徑抑制缺氧誘導(dǎo)的人結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞血管生成。另一項(xiàng)研究[17]發(fā)現(xiàn)片仔癀通過調(diào)節(jié)HIF-1通路抑制缺氧誘導(dǎo)的人結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)，調(diào)節(jié)上皮-鈣黏素(E-cadherin)和神經(jīng)-鈣黏素(N-cadherin)的表達(dá)。

鄭良樸等[18]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀可顯著抑制脾臟注射法誘導(dǎo)的結(jié)腸癌細(xì)胞CT26肝轉(zhuǎn)移模型小鼠的成瘤率。Lin等[19]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀能顯著抑制小鼠結(jié)腸癌CT-26細(xì)胞的遷移和侵襲，其通過抑制結(jié)腸直腸癌的TGF-β信號傳導(dǎo)，抑制CT-26細(xì)胞EMT，上調(diào)E-cadherin的表達(dá)，下調(diào)N-cadherin的表達(dá)。

羅志毅等[20]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀對氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸鈉(AOM/DSS)誘導(dǎo)結(jié)腸炎相關(guān)性結(jié)腸癌(CAC)模型小鼠具有顯著療效，可有效降低模型小鼠疾病活動指數(shù)、降低結(jié)腸癌細(xì)胞成瘤率和具有抑制結(jié)腸縮短的作用。研究表明其作用機(jī)制可能與抑制結(jié)腸組織白細(xì)胞介素-6(IL-6)表達(dá)有關(guān)。

Shen等[21]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀能通過阻滯G1/S人結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞周期，干擾促增殖細(xì)胞CyclinD1和CDK4蛋白表達(dá)，抑制結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2的增殖作用。

Qi等[22]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀能夠有效抑制大腸癌SW480干細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞調(diào)亡和分化的作用，且通過調(diào)控Notch信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵基因Notch1及其下游靶分子Hes1在大腸癌細(xì)胞的基因和蛋白的表達(dá)水平。

1.2 骨肉瘤 學(xué)者[23-24]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀能夠誘導(dǎo)骨肉瘤MG63細(xì)胞凋亡；能夠抑制骨肉瘤MG63細(xì)胞DNA的合成，使細(xì)胞在G2期的阻滯增加；其作用機(jī)制是通過降低PI3K/Akt信號通路中關(guān)鍵蛋白PI3K、P-Akt的表達(dá)，有效抑制MG63細(xì)胞的增殖，且呈劑量依賴性。相關(guān)研究表明片仔癀可通過內(nèi)源性的線粒體途徑，激活人骨肉瘤MG63細(xì)胞的凋亡中關(guān)鍵蛋白Caspase-3、Caspase-9的表達(dá)，誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞的凋亡，同時劑量依賴性的調(diào)控Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá)[25]。另外，片仔癀對骨肉瘤MG63細(xì)胞的侵襲及遷移能力有阻抑作用[26],可有效下調(diào)骨肉瘤MG63細(xì)胞黏附分子CD44v6、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的表達(dá)水平。

張燕等[27]研究發(fā)現(xiàn)仔癀可誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞凋亡，其作用機(jī)制可能與改變腫瘤細(xì)胞線粒體通透性，降低腫瘤細(xì)胞線粒體膜電位，調(diào)節(jié)骨肉瘤U2OS細(xì)胞Bcl-2、Bax表達(dá)水平。林海英等[28]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀可誘導(dǎo)人骨肉瘤U-2OS細(xì)胞凋亡，其可能通過抑制PI3K/Akt分子信號途徑的激活，阻斷PI3K、 p85α、Akt蛋白磷酸化，促進(jìn)PARP蛋白裂解，發(fā)揮抗腫瘤作用。關(guān)君一等[29]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀具有抑制骨肉瘤U-2OS細(xì)胞侵襲及遷移能力，其作用機(jī)制可能與下調(diào)骨肉瘤U-2OS細(xì)胞MMP-9的表達(dá)有關(guān)。張燕等[30]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀可抑制骨人肉瘤U2OS細(xì)胞的增值，使U-2OS細(xì)胞周期阻滯于G2/M期，抑制人肉瘤U2OS細(xì)胞Survivin蛋白的表達(dá)。張俐等[31]研究發(fā)現(xiàn)通過檢測細(xì)胞凋亡的方法聯(lián)合應(yīng)用觀察片仔癀對人骨肉瘤細(xì)胞U-2OS凋亡的影響，結(jié)果表明片仔癀能有效抑制骨肉瘤U-2OS細(xì)胞的增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用。

另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)[32]，片仔癀能夠抑制骨肉瘤干細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長，明顯調(diào)控骨肉瘤干細(xì)胞ABCB1、ABCG2蛋白的表達(dá)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對阿霉素的敏感性，其作用機(jī)制是通過下調(diào)ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)，達(dá)到抑制移植瘤生長，進(jìn)而起到逆轉(zhuǎn)耐藥作用。陳炳藝等[33]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀可通過調(diào)控PI3K/AKT信號通路中PTEN的表達(dá)，阻斷Akt蛋白的磷酸化，促進(jìn)PARP蛋白裂解，顯著抑制MG63/ADM細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)凋亡。張燕等[34]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀與阿霉素聯(lián)用可明顯下調(diào)Bcl-2的表達(dá)，上調(diào)Bax的表達(dá)，改變Bcl-2與Bax的比例，進(jìn)而提高耐藥細(xì)胞U-2OS/ADM對ADM的敏感性，促進(jìn)U-2OS /ADM細(xì)胞凋亡。

Ren等[35]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀聯(lián)合P27基因重組腺病毒可以抑制人骨肉瘤細(xì)胞Saos-2在裸鼠體內(nèi)的生長。張俐等[36]通過構(gòu)建了裸鼠原位骨肉瘤模型，觀測骨肉瘤裸鼠成瘤率、評價荷瘤裸鼠生存質(zhì)量和毒性不良反應(yīng)、腫瘤體積和腫瘤抑制率。研究發(fā)現(xiàn)片仔癀可有效抑制腫瘤的生長，能有效提高荷瘤裸鼠的生存質(zhì)量。片仔癀聯(lián)合P27基因重組腺病毒能產(chǎn)生協(xié)同作用，較單用片仔癀治療或單用P27基因重組腺病毒治療，具有更明顯抑瘤效果與改善荷瘤裸鼠的生存情況，有效抑制人骨肉瘤MG-63細(xì)胞的生長。

1.3 卵巢癌 何凡等[37]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀可通過阻滯人卵巢癌細(xì)胞株OVCAR-3細(xì)胞于G0/G1期，抑制和阻斷S期細(xì)胞DNA的合成與復(fù)制，下調(diào)DNA修復(fù)酶-聚ADP核糖聚合酶(PARP)、絲氨酸/蘇氨酸激酶(Akt)、周期蛋白依賴性激酶6(CDK6)表達(dá)，有效的控制腫瘤細(xì)胞的生長及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。

另一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)[38]，片仔癀可通過阻斷卵巢癌OVCAR-3細(xì)胞周期從G1期向S期的進(jìn)展，調(diào)控AKT-mTOR通路活性抑制卵巢癌OVCAR-3細(xì)胞增殖。其作用機(jī)制可能與抑制OVCAR-3細(xì)胞系A(chǔ)KT、磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(p-AKT)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表達(dá)，下調(diào)CDK4和CDK6的蛋白表達(dá)有關(guān)。

1.4 舌鱗狀細(xì)胞癌 張忠提等[39]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀與多西他賽聯(lián)合應(yīng)用可阻滯舌鱗狀細(xì)胞癌Tca8113細(xì)胞于G0/G1期，抑制STAT3蛋白的磷酸化激活，下調(diào)STAT3下游靶基因Bcl-2表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。

王丹等[40]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀與多西他賽聯(lián)合應(yīng)用可阻滯舌鱗狀癌Tca8113 細(xì)胞周期G0/G1期和G2/M期，兩藥聯(lián)用可進(jìn)一步抑制腫瘤細(xì)胞周期進(jìn)程，且升高Tca8113細(xì)胞的凋亡比率，抑制舌鱗狀癌細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。張忠提等[41]通過觀察片仔癀與多西他賽聯(lián)合應(yīng)用于舌鱗狀癌Tca8113細(xì)胞，結(jié)果表明兩藥單用可抑制細(xì)胞p-STAT3和Bcl-2的表達(dá)，兩藥聯(lián)用可使細(xì)胞p-STAT3和Bcl-2的表達(dá)水平進(jìn)一步下降，提示片仔癀與多西他賽聯(lián)用可通過調(diào)控STAT3通路抑制舌鱗狀癌Tca8113細(xì)胞的增殖。

1.5 肝癌 Qi等[42]研究發(fā)現(xiàn)，片仔癀可顯著抑制BEL-7402肝癌細(xì)胞的增值，誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，其作用機(jī)制可能與下調(diào)促增殖基因cyclin D1和CDK4的蛋白表達(dá)，抑制抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá)，上調(diào)了腫瘤抑制因子miR-16的表達(dá)有關(guān)。

此外，郭珮蕾等[43]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀能顯著抑制體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞(肝癌細(xì)胞SMMC-7721、宮頸癌細(xì)胞HeLa、胃癌細(xì)胞SGC-7901) 的增殖，提示片仔癀抗腫瘤的途徑可能與其細(xì)胞毒作用有關(guān)；抗腫瘤的增殖作用可能與其抑制雞胚尿囊膜血管生成有關(guān)。馮健愉等[44]研究發(fā)現(xiàn)片仔癀能顯著抑制體外對人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞(HLEC)的淋巴管新生作用，其作用機(jī)制可能與下調(diào)腫瘤淋巴血管新生相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1) 和基質(zhì)溶解酶MMP-3/10、血管內(nèi)皮生長因子C(VEGFC)及其受體VEGFR-3等蛋白表達(dá)有關(guān)。

2 抗腫瘤臨床用藥

2.1 肝癌 一項(xiàng)采用隨機(jī)、雙盲、安慰劑平行對照的多中心臨床試驗(yàn)，選擇初治診斷為原發(fā)性肝癌且符合介入治療適應(yīng)證，CT結(jié)果顯示瘤體>2 cm以上，不愿手術(shù)或不能手術(shù)的患者，經(jīng)中醫(yī)辨證符合毒熱瘀結(jié)型的肝癌患者，共納入對照組(安慰劑+介入化療治療)和試驗(yàn)組(片仔癀膠囊+介入化療治療)各120例，統(tǒng)一介入化療治療方案，片仔癀3次/d，每次2粒，4周為一療程，共用2個療程。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，片仔癀對癌癥化療患者有顯著的增效減毒作用，其可顯著改善肝癌介入治療患者食少、納呆、口干咽燥的中醫(yī)癥候、提高患者生活質(zhì)量，提高介入化療治療的總有效率，縮小實(shí)體瘤面積，使患者止痛藥的服用量減少；顯著減輕因化療引起的不良反應(yīng)包括白細(xì)胞減少、轉(zhuǎn)氨酶升高、惡心嘔吐等反應(yīng)[45]。

另一項(xiàng)采用隨機(jī)雙盲安慰劑對照的臨床試驗(yàn)，選擇符合原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)，不宜或不愿接受一期手術(shù)切除，無肝動脈化療栓塞術(shù)(TACE)禁忌證，符合中醫(yī)辨證毒熱瘀結(jié)證(或濕熱熱毒證)患者，共納入對照組(TACE+安慰劑)20例，治療組(TACE+片仔癀)20例，片仔癀膠囊每次2粒，3次/d，4周為一療程，共用2個療程。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明片仔癀可顯著增強(qiáng)肝癌患者機(jī)體免疫能力，提高自然殺傷(NK) 細(xì)胞、CD4、CD4 /CD8比值水平，提示片仔癀對TACE引起的細(xì)胞免疫抑制有一定的保護(hù)作用[46]。

另外，徐益語等[47]根據(jù)中醫(yī)辨證施治原則觀察42例以片仔癀治療為主的中晚期肝癌患者，研究發(fā)現(xiàn)仔癀在控制病情發(fā)展緩解癥狀方面，有一定的積極作用。

2.2 大腸癌 一項(xiàng)采用隨機(jī)對照的臨床試驗(yàn)，納入68例不能手術(shù)、非根治性術(shù)后(姑息性切除、探查術(shù)后)患者，中醫(yī)辨證均為毒熱瘀結(jié)型。按就診時間順序隨機(jī)分為對照組XELOX方案(奧沙利鉑+卡培他濱)34例和治療組(XELOX方案+片仔癀)34例，分別給予相應(yīng)治療。觀察兩組患者近期臨床療效、生活質(zhì)量及化療后產(chǎn)生的不良反應(yīng)。研究結(jié)果表明毒熱瘀結(jié)型晚期結(jié)腸癌患者經(jīng)片仔癀聯(lián)用XELOX方案化療后，生存質(zhì)量明顯提高、因化療后所產(chǎn)生的不良反應(yīng)顯著減少及延緩患者病情發(fā)展進(jìn)度，值得在臨床進(jìn)一步推廣應(yīng)用[48]。

另一項(xiàng)采用隨機(jī)對照的臨床試驗(yàn)，選擇不能手術(shù)、非根治性術(shù)后(姑息性切除、探查術(shù)后)，中醫(yī)辨證均為毒熱瘀結(jié)型，按就診時間順序隨機(jī)分為對照組FOLX方案(奧沙利鉑、5-FU、亞葉酸鈣)23例和治療組(片仔癀+FOLX方案)24例，分別給予相應(yīng)治療，評價兩組近期療效、生存質(zhì)量、不良反應(yīng)等。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)片仔癀聯(lián)合化療藥物近期臨床有效率為66.67%，單用化療藥物近期臨床有效率為52.17%；且發(fā)現(xiàn)片仔癀能夠改善毒熱瘀結(jié)型晚期結(jié)腸癌患者生活質(zhì)量，降低化療不良反應(yīng)，顯著下降患者的病情發(fā)展進(jìn)度[49]。

此外，顧兆雄[50]通過對25例晚期大腸癌患者經(jīng)片仔癀治療后的療效觀察，結(jié)果表明片仔癀用于治療大腸癌具有一定的療效。

2.3 食管癌 一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)[51]，通過觀察1例84歲男性晚期食管癌患者，應(yīng)用片仔癀聯(lián)合靜脈滴注中藥抗腫瘤藥物，片仔癀(每丸3 g，3次/d，每次吃1/6丸)，并給予營養(yǎng)支持療法，4周后停用中藥抗腫瘤藥物，繼續(xù)服用片仔癀及營養(yǎng)支持療法。患者在治療期間病情一直比較穩(wěn)定，白細(xì)胞、血紅蛋白均在正常范圍，未出現(xiàn)明顯下降，肝腎功能正常。該患者服用片仔癀期間時，未出現(xiàn)腹腔積液、黃疸、淺表淋巴結(jié)腫大，且未出現(xiàn)晚期食管癌患者常表現(xiàn)出的胸痛或背部疼痛等癥狀，患者治療3個月后出院?？梢娖旭ピ谥委熛到y(tǒng)的腫瘤中有一定的積極作用。

3 小結(jié)與展望

片仔癀抗腫瘤作用可應(yīng)用于大腸癌、骨肉瘤、卵巢癌、舌鱗狀細(xì)胞癌、食管癌和肝癌等，其作用機(jī)制包括通過抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)其凋亡；通過減少腫瘤新生血管的生成，從而抑制其生長、浸潤和轉(zhuǎn)移；通過抑制腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲能力，影響腫瘤轉(zhuǎn)移形成；通過有效逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥，抑制腫瘤耐藥細(xì)胞增值、降低遷移和侵襲能力；通過抑制腫瘤干細(xì)胞的增殖作用，減緩腫瘤的發(fā)展。

但由于片仔癀成分復(fù)雜屬于中藥復(fù)方制劑，治療機(jī)制具有“多靶點(diǎn)、多途徑”的特點(diǎn)，因此需要明確片仔癀抗腫瘤的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用片仔癀提供更多的理論支撐。