趙 南，羅忠亮，韋 和，胡琦蘭，吳貴輝

(1.貴州百靈企業(yè)集團(tuán)制藥股份有限公司學(xué)術(shù)研發(fā)部，貴州 安順 561000； 2.貴陽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州 貴陽 550002)

金感膠囊是貴州百靈企業(yè)集團(tuán)制藥股份有限公司在苗族驗(yàn)方的基礎(chǔ)上，運(yùn)用現(xiàn)代先進(jìn)制藥技術(shù)，精致加工而成的苗族藥，原國家中藥二類新藥。該藥有清熱解毒、疏風(fēng)解表的作用，用于普通感冒、流行性感冒及外感風(fēng)熱癥。金感膠囊屬于中西藥復(fù)方制劑，其主要成分為金銀花、穿心蓮、板藍(lán)根、蒲公英、對(duì)乙酰氨基酚、鹽酸金剛烷胺和馬來酸氯苯那敏。金感膠囊成分復(fù)雜多樣，馬來酸氯苯那敏為其成分之一，處方中中藥成分對(duì)其含量測定的影響較大。因此，有必要建立馬來酸氯苯那敏成分測定質(zhì)量評(píng)價(jià)系統(tǒng)，對(duì)其質(zhì)量從整體到局部進(jìn)行全面控制[1-3]。只有建立了客觀科學(xué)的評(píng)價(jià)系統(tǒng)，才能比較不同批次金感膠囊質(zhì)量的差異，為產(chǎn)品的優(yōu)質(zhì)優(yōu)價(jià)提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Agilent technologies 1200 series型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；G13150 DAD檢測器；KQ-250DB型數(shù)據(jù)超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 藥品與試劑

馬來酸氯苯那敏對(duì)照品(中國藥品生物制品檢驗(yàn)所，批號(hào)：100047-200606，供含量測定)；甲醇為色譜純；水為娃哈哈純凈水：金感膠囊(貴州百靈企業(yè)集團(tuán)制藥股份有限公司，批號(hào)：20170207-20170216)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為依利特Sinochom ODS-BP(4.6 mm×250 mm，5 μm，柱號(hào)E2514127)；流動(dòng)相為甲醇-含1%三乙胺和0.005 mol/L庚烷磺酸鈉的0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)(V∶V=60∶40)；流速為0.8 ml/min；柱溫為25 ℃；檢測波長為262 nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液：精密稱取馬來酸氯苯那敏對(duì)照品(105 ℃干燥3 h)適量，加流動(dòng)相制備成含馬來酸氯苯那敏40 μg的溶液1 ml，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液：取本品10粒，取內(nèi)容物，研細(xì)。取細(xì)粉0.9 g(約相當(dāng)于馬來酸氯苯那敏2 mg)，精密稱定，置于50 ml容量瓶中，加甲醇15 ml，超聲處理(功率300 W，頻率40 kHz)10 min，加三氯甲烷30 ml，再超聲處理5 min，放冷，加三氯甲烷稀釋置刻度，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25 ml，蒸干，殘?jiān)?%氫氧化鈉10 ml使溶解，置于分液漏斗中，蒸發(fā)皿用10 ml水洗滌，洗液并入分液漏斗中，加40%氫氧化鈉8 ml，用石油醚(30～60 ℃)振搖提取4次，每次40 ml，合并提取液，加10%鹽酸乙醇溶液4 ml，置于水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，移至25 ml容量瓶中，用流動(dòng)相洗滌蒸發(fā)皿，洗液并入容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[4-7]。

2.2.3 陰性溶液：精密稱取缺少馬來酸氯苯那敏的陰性樣品0.9 g，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗(yàn)：分別取馬來酸氯苯那敏對(duì)照品溶液、供試品溶液、空白溶液及陰性溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1?？梢?，馬來酸氯苯那敏的保留時(shí)間約為9.2 min，陰性溶液在此處無峰，即本研究條件下馬來酸氯苯那敏與其他組分分離完全，分離度遠(yuǎn)>1.5，理論塔板數(shù)計(jì)算>10 000，因不同色譜柱分離能力的差異，故理論塔板數(shù)以馬來酸氯苯那敏峰計(jì)，應(yīng)不低于4 000[8-9]。

A.對(duì)照組溶液；B.供試品溶液；C.陰性溶液A. control solution; B. test solution; C. negative solution圖1 高效液相色譜圖Fig 1 High performance liquid chromatography

2.3.2 線性關(guān)系考察：取對(duì)照品20 mg，精密稱定，置于50 ml容量瓶中，以流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。得到質(zhì)量濃度(c)=429.2 μg/ml。精密量取5 ml，稀釋至50 ml容量瓶中，得到c=42.92 μg/ml的對(duì)照品溶液。進(jìn)樣量依次為5、10、15、20、25及30 μl，注入高效液相色譜儀，以262 nm為檢測波長，測定峰面積。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程：Area=834.168 074×Amt+0.600 402 8(Area：峰面積；Amt：進(jìn)樣量)，r=0.999 99。表明馬來酸氯苯那敏在0～1.287 6 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，且標(biāo)準(zhǔn)曲線通過原點(diǎn)。

2.3.3 精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液(42.92 μg/ml)10 μl，注入高效液相色譜儀，測定峰面積，連續(xù)6次。結(jié)果顯示，馬來酸氯苯那敏峰面積的RSD為0.269%，表明該方法的精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密稱取供試品溶液(批號(hào)：20170207)，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液1份，在0、2、4、6、8、10、12及24 h內(nèi)注入高效液相色譜儀10 μl，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，馬來酸氯苯那敏峰面積的RSD為0.51%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取供試品溶液(批號(hào)：20170207)，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，分別注入高效液相色譜儀10 μl，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，標(biāo)示量百分含量的平均值為99.21%，RSD=1.74%<2%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn)：精密稱取供試品溶液(批號(hào)：20170207)9份，按80%、100%和120% 3個(gè)不同濃度，精密加入馬來酸氯苯那敏對(duì)照品適量，揮干溶劑，按“2.2.2”項(xiàng)下方法處理樣品，分別進(jìn)樣10 μl，記錄色譜圖，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果顯示，平均加樣回收率為98.76%，RSD為1.22%，見表1。

表1 馬來酸氯苯那敏的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 1 Results of sample recovery test for chlorphenamine maleate

表2 十批金感膠囊中馬來酸氯苯那敏的含量測定結(jié)果Tab 2 Results of content determination of chlorpheniramine maleate in 10 batches of Jingan capsules

3 討論

本試驗(yàn)考察了甲醇-水、甲醇-0.1%甲酸水、乙腈-水、甲醇-含1%三乙胺和0.005 mol/L庚烷磺酸鈉的0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)及乙腈-0.1%甲酸水等流動(dòng)相體系[10-13]。結(jié)果表明，甲醇-含1%三乙胺和0.005 mol/L庚烷磺酸鈉的0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)作為流動(dòng)相時(shí)峰形較好。

而采用甲醇超聲的前處理方法，雜峰超載[14]。故在前處理方法上，由于馬來酸氯苯那敏含量極少，選擇層層除雜的方式[15-16]，除去非目標(biāo)中藥成分及其他含量高的化學(xué)藥成分的干擾，良好地測定了馬來酸氯苯那敏的含量。本研究為金感膠囊生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制均一性和全面性提供了一定的科學(xué)依據(jù)，為金感膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升奠定了一定的基礎(chǔ)。