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過敏性哮喘中醫(yī)證候模型研究進(jìn)展及評(píng)價(jià)

2019-09-04 09:25付曉覃驪蘭鐘海森唐周一豆趙媛媛
關(guān)鍵詞:中醫(yī)綜述

付曉 覃驪蘭 鐘海森 唐周一豆 趙媛媛

摘要:本文通過查閱近年來(lái)國(guó)內(nèi)外過敏性哮喘中醫(yī)證候模型相關(guān)研究文獻(xiàn),對(duì)陰虛證、氣虛證、寒證、熱證哮喘中醫(yī)模型造模方法及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行歸納,認(rèn)為中醫(yī)理論指導(dǎo)下的動(dòng)物證候模型基本符合中醫(yī)辨治特點(diǎn),可為研究與應(yīng)用提供參考。但其致病因素、病因病機(jī)與發(fā)病轉(zhuǎn)歸等與臨床實(shí)際仍存在差異,需進(jìn)一步探索。

關(guān)鍵詞:過敏性哮喘;中醫(yī);證候模型;綜述

中圖分類號(hào):R256.12??? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A??? 文章編號(hào):1005-5304(2019)08-0133-04

DOI:10.3969/j.issn.1005-5304.2019.08.029????? 開放科學(xué)(資源服務(wù))標(biāo)識(shí)碼(OSID):

Abstract: By reviewing the relevant research literature about TCM syndrome models of allergic asthma in recent years, this article summarized the TCM modeling methods and evaluation criteria of yin deficiency syndrome, qi deficiency syndrome, cold syndrome and heat syndrome asthma, argued that the animal syndrome models under the guidance of TCM theory basically conformed to the characteristics of TCM differentiation and treatment, and could provide references for research and application. However, pathogenic factors, etiology and pathogenesis, and onset and development of allergic asthma are still different from clinical practice and need further exploration.

Keywords: allergic asthma; TCM; syndrome models; review

過敏性哮喘是一種氣道慢性炎癥性疾病,發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,與多達(dá)100種以上的遺傳位點(diǎn)和復(fù)雜環(huán)境因素有關(guān)[1],為多種細(xì)胞(如嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、B細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞)和細(xì)胞組分參與的氣道炎癥反應(yīng)[2]。過敏性哮喘可歸屬中醫(yī)學(xué)“哮證”范疇,以發(fā)作時(shí)喉中哮鳴有聲、呼吸困難,甚則喘息不得平臥等為主要表現(xiàn),然哮必兼喘,故將“喘病”與“哮證”合并為哮喘,認(rèn)為其發(fā)作與六邪侵襲、痰阻氣道、肺失宣發(fā)、脾失水運(yùn)、腎氣化失司有關(guān)。筆者通過查閱近年來(lái)國(guó)內(nèi)外過敏性哮喘中醫(yī)證候模型相關(guān)研究文獻(xiàn),結(jié)合現(xiàn)代藥理研究,對(duì)近年中醫(yī)模型造模方法及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行歸納,為研究與應(yīng)用提供參考。

1? 模型動(dòng)物選擇

用于建立過敏哮喘模型的動(dòng)物以嚙齒類動(dòng)物居多,如豚鼠,129Sv、A/J、BALB/c和C57BL/6小鼠,BN、Wistar和SD大鼠,此外還有犬、羊及其他動(dòng)物,豚鼠是最早開展模型的動(dòng)物選擇,但由于個(gè)體反應(yīng)差異大,給藥后經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)無(wú)哮喘反應(yīng)或發(fā)生急性過敏性休克的情況,犬、羊等大型動(dòng)物一般用于蛔蟲卵抗原的自然致敏,但品系選擇困難,難保純正,且研究費(fèi)用高操作困難,故目前實(shí)驗(yàn)選擇上逐漸被小鼠或大鼠所替代[3]。不同小鼠和大鼠各自不同品系對(duì)不同的反應(yīng)源趨于敏感。小鼠品系中,129Sv小鼠對(duì)卵清白蛋白(OVA)及呼吸道合胞病毒反應(yīng)性更強(qiáng),A/J小鼠對(duì)抗原注射的免疫應(yīng)答良好,BALB/c小鼠易產(chǎn)生針對(duì)OVA和花粉的氣道高反應(yīng)性,C57BL/6小鼠容易誘發(fā)免疫耐受性,對(duì)塵螨和豚草抗原反應(yīng)性較強(qiáng)[4]。大鼠品系中,BN大鼠模型在特異性抗體的產(chǎn)生及誘發(fā)哮喘癥狀上具有明顯優(yōu)勢(shì)[5],SD大鼠和Wistar大鼠的遺傳背景相似,為國(guó)內(nèi)研究常用模型,SD大鼠對(duì)疾病的抵抗力優(yōu)于Wistar大鼠,尤其在呼吸道疾病方面。但相同條件復(fù)制哮喘模型成功率Wistar大鼠優(yōu)于SD大鼠[6]。因此,建立過敏性哮喘中醫(yī)證候模型可根據(jù)辨證分型選擇所需模型,合理選擇模型動(dòng)物品系。

2? 中醫(yī)模型建立與評(píng)價(jià)

2.1? 陰虛證模型

陰虛證指陰液不足或虧損而無(wú)法制陽(yáng)導(dǎo)致虛熱內(nèi)生的一種證候。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,陰虛者多有心煩意亂、焦躁不安、毛發(fā)無(wú)光澤、大便干結(jié)、小便發(fā)黃、口干咽燥癥狀。甲狀腺激素過多導(dǎo)致的發(fā)病雖然病情初起多實(shí),但病久則虛,伴心跳過快、情緒容易激動(dòng)、皮膚粗糙、食欲亢進(jìn)、體質(zhì)量減輕等癥狀,與陰虛證癥狀相似,故實(shí)驗(yàn)研究常用甲狀腺素片灌胃造模法[7]、甲狀腺素注射造模法[8]、甲狀腺素聯(lián)合利血平造模法[9]等。雖也有學(xué)者用糖皮質(zhì)激素造模,但造模后動(dòng)物的行為學(xué)表現(xiàn)與中醫(yī)陰虛證不甚相符,故不常用。

2.1.1? 造模與給藥

王志旺等[10-11]選擇BALB/c小鼠,采用OVA致敏、灌胃甲狀腺素復(fù)制陰虛型哮喘模型。第1日、第8日在腹腔及背部皮下注射致敏液(抗原:OVA,佐劑:氫氧化鋁生理鹽水混懸液),第15日起將小鼠置于霧化系統(tǒng)中加入OVA激發(fā)液使小鼠吸入20 min,隔日1次,連續(xù)28 d。第29日起予甲狀腺片藥液灌胃,每日1次,連續(xù)14 d。楊婧等[12]選擇SD大鼠,采用卵清蛋白致敏、地塞米松干預(yù)復(fù)制陰虛哮喘模型。第1、7日在腹腔、兩側(cè)后足跖、腹股溝、腰、背、頸部注射不同劑量致敏液(抗原:OVA,佐劑:氫氧化鋁溶液),第14日起將大鼠置于霧化箱中霧化吸入15 min,每日1次,連續(xù)21 d。在此基礎(chǔ)上每日注射大劑量地塞米松,同時(shí)每周2次予OVA生理鹽水溶液霧化吸入,連續(xù)2周,至第48日。

2.1.2? 評(píng)價(jià)指標(biāo)

結(jié)合中醫(yī)臨床陰虛患者癥狀指標(biāo),陰虛模型動(dòng)物有多飲多食、小便發(fā)黃、大便干燥、體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢、形體毛發(fā)粗糙等癥狀。采用病理學(xué)水平檢測(cè)cAMP、cGMP及其平衡方面,評(píng)價(jià)機(jī)體機(jī)能虛性亢奮狀態(tài);激發(fā)哮喘癥狀的行為學(xué)反應(yīng),觀察有無(wú)腹式呼吸、抓耳撓腮的動(dòng)作及皮膚出現(xiàn)紫紺;哮喘病理學(xué)檢測(cè)對(duì)肺組織進(jìn)行稱濕重、干重及二者比值可判斷肺臟是否處于精血津液不足的虛損狀態(tài)[11],HE染色觀察肺組織炎癥浸潤(rùn)程度,ELISA檢測(cè)肺泡灌洗液中不同種類白細(xì)胞介素及其對(duì)應(yīng)水平等[13]。

2.2? 氣虛證模型

哮證的產(chǎn)生一方面因宿痰伏肺,痰阻氣道,氣道攣急,肺失肅降,肺氣上逆導(dǎo)致痰鳴氣喘,一方面因脾氣不足無(wú)法運(yùn)化水濕,津液凝聚成痰伏藏于肺內(nèi)。然腎為人體先天之本,哮證日久不愈,久則傷腎,腎氣損傷,病情加重。因此實(shí)驗(yàn)研究氣虛證模型時(shí)應(yīng)考慮肺、脾、腎多臟器對(duì)哮喘的影響,從不同的辨證角度進(jìn)行動(dòng)物造模。

2.2.1? 造模與給藥

劉瑩等[14]選擇Wistar大鼠,根據(jù)“恐則氣下,勞則氣耗”的中醫(yī)理論采用OVA致敏及外部刺激方法復(fù)制腎氣虛哮喘模型。第1、8日腹腔注射OVA致敏液,與此同時(shí),從第1日起連續(xù)于上午同一時(shí)間將大鼠放置在安靜房間內(nèi)放送有貓叫聲的錄音進(jìn)行驚恐刺激,每次10 min,同時(shí)用梅花針叩擊大鼠模擬貓抓拿攻擊大鼠的情景,下午在尾根部纏繞質(zhì)量約為10%體質(zhì)量的保險(xiǎn)絲,放入水槽中游泳,以力竭為度(大鼠鼻尖沒入水面10 s),每日1次,共14 d。第15日起將大鼠置于霧化缸內(nèi),以O(shè)VA超聲霧化吸入30 min誘導(dǎo)哮喘,每日1次,直至處死。孫麗平等[15]選擇KM小鼠,采用灌胃大黃煎劑后OVA致敏方法復(fù)制脾氣虛哮喘模型。第1日起予大黃煎劑灌胃,每日1次,連續(xù)7 d。脾氣虛造模3周后起腹腔注射OVA致敏液,致敏后第15日將小鼠置于霧化缸,以O(shè)VA溶液霧化激發(fā)哮喘,每次30 min,每日1次,連續(xù)11 d。李澤庚等[16]選擇豚鼠,對(duì)哮喘模型加以改良復(fù)制肺氣虛哮喘模型。在第1、10、20日腹腔注射OVA及0.9%氯化鈉注射液,第30日起將豚鼠放置于霧化箱,使其吸入OVA,持續(xù)10 d,所有豚鼠保持自然通風(fēng)通氣15 min,每日2次。

2.2.2? 評(píng)價(jià)指標(biāo)

腎氣虛、脾氣虛、肺氣虛哮喘共有檢測(cè)指標(biāo)為動(dòng)物哮喘激發(fā)時(shí)的行為學(xué)反應(yīng)(躁動(dòng)不安、腹式呼吸、紫紺、蜷臥不動(dòng))、ELISA檢測(cè)肺泡灌洗液中不同IL及對(duì)應(yīng)水平,細(xì)胞Th1、Th2、Th1/Th2比例水平。結(jié)合中醫(yī)證候,腎氣虛哮喘模型中還應(yīng)檢測(cè)血清四碘甲狀腺原氨酸、血清皮質(zhì)醇、睪酮水平,反映機(jī)體哮喘發(fā)病和腎氣虛情況[17],脾氣虛哮喘動(dòng)物模型通過摘取脾臟、胸腺稱取器官質(zhì)量,測(cè)定脾淋巴細(xì)胞增殖功能作為檢測(cè)指標(biāo)[18];肺氣虛哮喘模型可檢測(cè)肺功能(呼氣容積、吸氣阻力、呼氣阻力、肺順應(yīng)性)及氧飽和度作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。

2.3? 熱證模型

熱證多指熱邪侵襲、陽(yáng)氣旺盛或陽(yáng)盛陰虛所致機(jī)能活動(dòng)亢進(jìn)所表現(xiàn)的證候,“陽(yáng)勝則熱”,臨床熱證患者多見身熱煩躁、面目紅赤、唇紅而干、咽燥口渴、喜冷飲、大便秘結(jié)、小便短赤且黃等癥狀。然“熱極濕動(dòng)”,尤其我國(guó)南方地區(qū)或長(zhǎng)夏時(shí)間,“長(zhǎng)夏濕令,暑必挾濕”。熱邪夾雜濕邪,演變成濕熱哮喘。熱證模型的建立主要通過灌胃熱性藥物或食肥甘厚膩之物。

2.3.1? 造模與給藥

方向明等[19]選擇SD大鼠,采用OVA腹腔注射聯(lián)合細(xì)菌脂多糖滴鼻復(fù)制熱證哮喘模型。第1、8日腹腔注射OVA致敏液,雙側(cè)鼻孔鼻滴血清脂肪酶稀釋液,第15日起置于霧化箱以O(shè)VA霧化誘喘,每次30 min,每日1次,連續(xù)7 d。盧立偉等[20-21]選擇SD大鼠,采用多因素干預(yù)造模方法建立濕熱證哮喘大鼠模型。每日上午和夜間予高脂飼料灌胃,2 mL/只,連續(xù)14 d。第7、14日予10%OVA氫氧化鋁生理鹽水混懸液腹腔注射致敏,1 mL/只。第12日進(jìn)行大腸桿菌灌胃,每只2 mL,12 h后再加強(qiáng)灌服大腸桿菌,每只1 mL。第13日起將大鼠置于溫度(33±2)℃、相對(duì)濕度(95±3)%的濕熱環(huán)境,共3 d,每日8 h。第16日起將大鼠置于霧化箱,OVA生理鹽水溶液霧化誘導(dǎo)哮喘,每日1次,每次30 min,連續(xù)7 d。

2.3.2? 評(píng)價(jià)指標(biāo)

熱哮證行為學(xué)反應(yīng)有發(fā)熱、煩躁、口渴等癥狀,研究表明,熱哮證主要病機(jī)是中性粒細(xì)胞(PMN)局部募集浸潤(rùn),病理學(xué)檢查以白細(xì)胞計(jì)數(shù)、PMN檢測(cè)為評(píng)價(jià)指標(biāo)。濕熱證可通過觀察動(dòng)物行為評(píng)價(jià),如蜷臥、不思飲食、小便發(fā)黃、大便黏滯較軟甚則出現(xiàn)溏泄,可見肛周污穢、紅腫,肛溫升高,現(xiàn)代研究表明濕熱因素明顯影響Th1/Th2、Treg/Th17、IL-6等細(xì)胞因子,在多種炎性疾病中起重要作用[22]。

2.4? 寒證模型

寒有內(nèi)寒和外寒之分,外寒主要是陰邪(多為寒邪)侵襲機(jī)體發(fā)生的病變,內(nèi)寒主要由于機(jī)體陽(yáng)氣不足,陰陽(yáng)失衡使陰寒偏盛,陽(yáng)氣相對(duì)衰弱,機(jī)能減退,又使外寒有機(jī)可乘,侵入肌表,寒證患者多有惡寒發(fā)熱、四肢不溫、喜熱飲、腹瀉等癥狀。實(shí)驗(yàn)研究中采用服用寒涼藥物[23]、外界環(huán)境刺激復(fù)制寒證模型,但服用寒涼藥物針對(duì)的是脾胃寒證模型的建立,哮喘的產(chǎn)生主要由肺的宣降失常所致,檢測(cè)指標(biāo)的部位主要選擇肺,故一般哮喘模型中不常用[24]。

2.4.1? 造模與給藥

余建瑋等[25]采用OVA致敏并冷風(fēng)誘發(fā)哮喘復(fù)制寒證哮喘模型。第1、8日腹腔內(nèi)注射抗原液1 mL,2周后激發(fā)哮喘,大鼠置于自制半密閉鼠籠,霧化吸入1%OVA生理鹽水40 min,每日1次,連續(xù)4 d。中醫(yī)模型Ⅰ組在致敏后第4日予冷風(fēng)(氣溫為0 ℃±4 ℃)吹襲連續(xù)14 d,中醫(yī)模型Ⅱ組誘喘后予腹腔注射地塞米松以平喘,平喘后第7日開始予冷風(fēng)吹襲誘喘,連續(xù)10 d,中醫(yī)模型Ⅲ組誘喘后予腹腔注射地塞米松以平喘,平喘后第14日開始予冷風(fēng)吹襲誘喘,連續(xù)10 d。張慶祥等[26]選擇Wister大鼠,采用OVA致敏結(jié)合形寒飲冷與勞倦刺激相結(jié)合的方法復(fù)制大鼠哮喘病寒飲蘊(yùn)肺證病證結(jié)合模型。腹腔注射抗原液1 mL使大鼠致敏,2周后將其置于霧化器霧化吸入5%OVA生理鹽水40 min誘發(fā)哮喘,每日1次,連續(xù)8 d。造模期間,予飲冰水、食寒性食物,并每日讓大鼠在(0±2)℃冰水中游泳30 min。激發(fā)期間,將大鼠置于(0±4)℃室外環(huán)境(12 h/d),進(jìn)行“飲冷”“形寒”“勞倦”的外部刺激。

2.4.2? 評(píng)價(jià)指標(biāo)

外部環(huán)境刺激下的哮喘寒證模型評(píng)價(jià)主要通過行為學(xué)觀察,因機(jī)體外感于寒,內(nèi)傷于陽(yáng),造成肺陽(yáng)虛衰,宣降失常,寒飲內(nèi)停于肺,在哮喘大鼠腹式呼吸、紫紺、抓耳撓腮的基礎(chǔ)上還伴隨喉鳴、咳嗽、憋喘、喜熱飲、四肢不暖、蜷臥懶動(dòng),嚴(yán)重者出現(xiàn)唇鼻青紫的情況,指標(biāo)監(jiān)測(cè)中觀察肺泡灌洗液中有白色泡沫痰,白細(xì)胞計(jì)數(shù)增多,嗜酸性粒細(xì)胞百分比升高[26]。

3? 小結(jié)

綜上,OVA是目前哮喘模型中使用最廣泛的致敏原,分為致敏和激發(fā)兩個(gè)主要步驟,基本方法是腹腔或皮下注射OVA致敏后進(jìn)行OVA生理鹽水溶液霧化激發(fā),造模時(shí)間根據(jù)造模的類型及程度2~4周不等。

過敏性哮喘模型選擇動(dòng)物以大鼠居多,其次是小鼠、豚鼠,均采用相同哮喘評(píng)價(jià)指標(biāo)。行為學(xué)方面,體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢且毛發(fā)粗糙無(wú)光,霧化激發(fā)時(shí)出現(xiàn)呼吸急促、張口喘息、腹式呼吸、紫紺及行動(dòng)遲緩等癥狀,并隨著霧化次數(shù)的增加情況逐漸加重;藥理學(xué)方面,對(duì)于臟器的觀察一般選擇肺臟,哮喘是由急性發(fā)生轉(zhuǎn)向慢性反復(fù)發(fā)作,氣道一直處于損傷再修補(bǔ)的過程,存在大量的炎性細(xì)胞,炎癥介質(zhì)浸潤(rùn)并繼發(fā)氣道重塑[27-28],肺組織HE染色可見支氣管周圍有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、炎性細(xì)胞和滲出物增多等[29],血中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量增多[30]、血總IgE對(duì)哮喘的發(fā)作起重要作用[31],外周血嗜酸粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)與分類值增高,血清總IgE水平也顯著升高[32]。

筆者認(rèn)為,中醫(yī)動(dòng)物模型建立仍存在一些問題:①中醫(yī)實(shí)驗(yàn)是在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下辨證論治,而疾病不同時(shí)期的證表現(xiàn)出的癥狀不盡相同,過敏性哮喘為慢性病,病程較長(zhǎng),發(fā)病初期、中期、末期癥狀不同,但造模過程的給藥和給藥量在病情發(fā)生期前后一致,無(wú)法做到同病異治;②中醫(yī)“藏象學(xué)說(shuō)”可反映各臟腑生理功能、病理變化及其相互關(guān)系:臟與臟間的生克乘侮,六腑以傳化物為生理特點(diǎn),臟與腑的陰陽(yáng)表里關(guān)系,一臟發(fā)生病理變化則牽一發(fā)而動(dòng)全身,過敏性哮喘的病臟不僅在肺,脾胃、腎、肝、大腸均會(huì)累及,指標(biāo)檢測(cè)不能僅關(guān)注單一臟腑;③疾病發(fā)生或因單因素初起,隨疾病的發(fā)展,單因素會(huì)轉(zhuǎn)變成體內(nèi)外的多因素,但目前造模方式仍然以單因素為主;④中醫(yī)四診合參感知疾病的發(fā)展,但用于動(dòng)物模型只能做到觀形態(tài)、看神色、聽聲音、嗅氣味,無(wú)法做到四診與指標(biāo)相結(jié)合;⑤實(shí)驗(yàn)常用的嚙齒目、靈長(zhǎng)目、食肉目等與人類均有差異,動(dòng)物模型無(wú)法完全按照人類哮喘的發(fā)作機(jī)理進(jìn)行研究,微觀指標(biāo)監(jiān)測(cè)也因?yàn)椴町愋远霈F(xiàn)結(jié)果偏差。綜上,過敏性哮喘的中醫(yī)證候模型研究尚處于起步階段,其致病因素、病因病機(jī)與發(fā)病轉(zhuǎn)歸等與臨床實(shí)際仍存在差異,需進(jìn)一步探索。

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(收稿日期:2018-08-07)

(修回日期:2019-06-04;編輯:向宇雁)

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