李紅梅 張玉美 魯美君

（南充市疾病預(yù)防控制中心 四川南充 637000）

1 前言

二硫代氨基甲酸酯（DTCs）類農(nóng)藥是由母體化合物二硫代氨基甲酸衍生而來的有機(jī)硫類殺菌劑[1]，其代謝產(chǎn)物有致癌和致畸的作用。 氨基甲酸酯是重要的藥物及農(nóng)藥，其種類為福美類及代森類[2]。 福美類屬中等毒性殺菌劑，進(jìn)入食道和皮膚會(huì)引起中毒[3]；代森類的代謝產(chǎn)物、 降解產(chǎn)物及主要雜質(zhì)乙撐硫脲具有致癌、致畸作用[4]，因其廣譜、高效的殺菌作用，被廣泛應(yīng)用于煙草、糧食、蔬菜、水果、棉花等病蟲害防治中[5,6]。 因此，對(duì)蔬菜、水果等農(nóng)產(chǎn)品中的二硫代氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留量進(jìn)行檢測(cè)十分必要。 常見的有比色法和頂空-氣相色譜法。 比色法雖然便宜快捷，但無法實(shí)現(xiàn)較精確的定量分析，分析原因可知，部分農(nóng)產(chǎn)品（如十字花科作物）本身含有硫化物，此硫化物會(huì)干擾分析；一些顏色較深的食品在前處理過程中會(huì)把顏色帶到接收管，也會(huì)對(duì)分析造成干擾。

本文采用溶劑吸收-氣質(zhì)聯(lián)用法，將氣相色譜、質(zhì)譜二者的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合起來，不但免去了樣品萃取等步驟，還減少了有機(jī)試劑的使用，避免了樣品中非揮發(fā)組分對(duì)色譜柱的污染。 此法具有靈敏度高、使用范圍廣、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)[7]。

2 材料

2.1 儀器設(shè)備

（1）Agilent 公司生產(chǎn)的氣質(zhì)聯(lián)用儀，型號(hào)為7890B/5977B，配件為EI 離子源；（2）北京賽多利斯儀器公司生產(chǎn)的電子天平，型號(hào)為CP224S（220 g/0.1 mg），感量為0.001 g；（3）超純水機(jī)為艾科浦分子生物型超純水機(jī)，型號(hào)為AFZ-2002-U；（4）電熱恒溫水浴鍋；（5）離心機(jī)；（6）50 mL 頂空瓶；（7）密封墊。

2.2 試劑耗材

正己烷：色譜純，成都科龍化工試劑公司；載氣：氦氣（99.999%）；超純水；氯化亞錫（SnCl2）；鹽酸（HCl）。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

（1）二硫化碳（CS2）標(biāo)準(zhǔn)品：020200-04-1ML，5.0 mg/mL，上海安普實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；（2）福美雙標(biāo)準(zhǔn)品：SB05-133-2008，100 μg/mL，乙醇農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所；（3）福美雙標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取200 μL 福美雙標(biāo)準(zhǔn)于1.0 mL 進(jìn)樣瓶中，用正己烷稀釋至刻度，令使用液密度ρ=20 mg/L。

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)中間液1

吸取二硫化碳標(biāo)準(zhǔn)品1.00 mL 至100 mL 容量瓶中，用正己烷稀釋并準(zhǔn)確定容至刻度，得標(biāo)準(zhǔn)中間液1 的密度ρ1=50mg/L。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)中間液2

吸取二硫化碳標(biāo)準(zhǔn)中間液1 1.00 mL 至100 mL容量瓶中，用正己烷稀釋并準(zhǔn)確定容至刻度，得標(biāo)準(zhǔn)中間液2 密度的ρ2=0.5 mg/L。

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)系列

以二硫化碳的濃度為橫坐標(biāo)， 以二硫化碳峰面積為縱坐標(biāo)，以0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L繪制一條低濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線；0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.5 mg/L、5.0 mg/L、10 mg/L、20 mg/L 繪制一條高濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，在其結(jié)果中顯示線性相關(guān)系數(shù)r 值＞0.999，即該方法線性關(guān)系符合研究要求。

2.4 樣品溶液的制備

取蔬菜、水果等可食部分搗碎、勻漿。 稱取混勻的樣品10.0 g 至50 mL 頂空瓶中， 加入3%氯化亞錫-鹽酸（SnCl2-HCl）溶液20 mL，壓蓋密封，80℃水浴2 h（每隔15 min 振搖一次），取出冷卻到4℃，用注射器加入5 mL 正己烷，振搖萃取3 min，3 000 r/min離心3 min，取上層清液供氣相色譜/質(zhì)譜（GC/MS）分析測(cè)定。

2.5 質(zhì)量控制

準(zhǔn)確吸取1.0 mL 福美雙標(biāo)準(zhǔn)使用液至50 mL頂空瓶中，加入10 mL 純水，混勻，同樣品處理，計(jì)算其轉(zhuǎn)換率，使其轉(zhuǎn)換率為99.5%以上。

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 質(zhì)譜條件

以EI 源為離子化方式，將電子能量設(shè)定為70eV，設(shè)置質(zhì)譜掃描范圍，將其控制在35～300 amu，將串聯(lián)質(zhì)譜（MS）四級(jí)桿的溫度調(diào)整至150℃，將離子源溫度調(diào)整至230℃， 傳輸線的溫度設(shè)定為280℃，應(yīng)用質(zhì)譜檢測(cè)器同時(shí)進(jìn)行擇離子檢測(cè)及全掃描。 二硫化碳出峰與溶劑峰間存在著時(shí)間差，因此，可應(yīng)用全掃描方式進(jìn)行質(zhì)譜定性，在NIST08 檢索譜庫(kù)內(nèi)展開檢索確定量值后， 應(yīng)用離子檢測(cè)進(jìn)行質(zhì)譜定量。 化合物名稱、定量離子（m/z）及定性情況詳見表1。

表1 待測(cè)化合物的名稱、定性和定量離子

3.2 色譜條件

毛細(xì)管柱為HP-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm），柱溫：50℃保持1.9min，后運(yùn)行升至250℃，保持5 min；前進(jìn)樣口溫度:220℃，柱流量：1.0 mL/min，恒流，分流比為10∶1。

4 結(jié)果與分析

4.1 色譜柱的選用

通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)，HP-5MS 毛細(xì)血管柱和DB-624 毛細(xì)血管柱為常用的色譜柱，本文研究對(duì)比了兩種毛細(xì)管色譜柱的效果。兩種毛細(xì)管色譜柱分別為HP-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）及DB-624（30 m×0.25 mm×1.4 μm）。

（1）HP-5MS 毛細(xì)管柱。HP-5MS 毛細(xì)管色譜柱是非極性柱中的一種， 其色譜條件為：50℃保持1.9 min，后運(yùn)行升至250℃，保持5 min；前進(jìn)樣口的溫度設(shè)定為220℃，柱流量為1.0 mL/min，恒流，以10∶1 為分流比，這樣的色譜條件下出峰時(shí)間可大大縮短。

（2）DB-624 毛細(xì)管柱。DB-624 毛細(xì)管色譜柱為弱極性柱, 按《2018 年國(guó)家食品污染和有害因素風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)工作手冊(cè)》中推薦的色譜條件：柱溫40℃保持4.1 min，后運(yùn)行升至200℃，保持3 min；前進(jìn)樣口的溫度設(shè)定為220℃，其柱流量設(shè)定為1.0 mL/min，恒流，以10∶1 為分流比。

研究指出，出峰時(shí)間相比較，DB-624 出峰時(shí)間慢于HP-5MS 柱；而分離效果對(duì)比，HP-5MS 的分離效果更佳。 因此，本文選用HP-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm)作為實(shí)驗(yàn)的分離毛細(xì)管柱。

4.2 檢測(cè)方式的選擇

二硫化碳（CS2）的分離檢測(cè)可使用多種方法進(jìn)行，最常用的方法為應(yīng)用氣相色譜（配火焰光度檢測(cè)器）或者氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀[8-12]。火焰光度檢測(cè)器的缺點(diǎn)是無法給出檢測(cè)組分具有的結(jié)構(gòu)信息， 僅僅可保留時(shí)間的定性，因此，這種方法的假陽(yáng)性現(xiàn)象發(fā)生率高；而氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行監(jiān)測(cè)選擇離子，在定性信息方面的優(yōu)勢(shì)突顯，具有更佳的選擇性，因此，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用是實(shí)驗(yàn)室中最常用的分離檢測(cè)方式[13-15]。

5 結(jié)果分析

5.1 方法的檢出限和線性范圍

以0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L 繪制一條低濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.5 mg/L、5.0 mg/L、10 mg/L、20 mg/L 繪制一條高濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，在其結(jié)果中顯示線性相關(guān)系數(shù)r 值＞0.999，即該方法線性關(guān)系符合研究要求。并基于10 次標(biāo)準(zhǔn)系列進(jìn)行測(cè)試，將各組之間的濃度的標(biāo)準(zhǔn)偏差算出，并以3 倍標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算該組分的檢出限， 結(jié)果顯示檢出限可以達(dá)到0.003 mg/kg。

5.2 方法的精密度

分別選取高、中、低濃度為20.00 mg/L、0.50 mg/L、0.02 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，上機(jī)測(cè)定8 次，得出相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.23%～5.64%，表明方法的精密度良好，可用于實(shí)驗(yàn)。 結(jié)果詳見表2。

表2 方法的精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5.3 方法的準(zhǔn)確度

分別取3 份空白樣，分別加入高（20.00 mg/L）、中（0.50 mg/L）、低（0.02 mg/L）3 種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別測(cè)定其加標(biāo)回收率， 測(cè)得加標(biāo)回收率在90%以上，表明該方法的準(zhǔn)確度高，可用于實(shí)驗(yàn)。

5.4 實(shí)際樣品檢測(cè)

本次共檢測(cè)蔬菜、水果樣品20 份，只有少部分樣品有少量檢出，但均未超出國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)。大部分樣品均未檢出。

6 討論

本次研究主要基于《2018 年國(guó)家食品污染和有害因素風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)工作手冊(cè)》專項(xiàng)監(jiān)測(cè)任務(wù)，通過統(tǒng)一的采樣檢測(cè)方法和統(tǒng)一的質(zhì)控手段來保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。需要注意：（1）樣品是市售當(dāng)季樣品，具有一定的代表性，但該方法只能測(cè)定DTCs 全部轉(zhuǎn)化為CS2時(shí)所測(cè)的量，不能確定其具體種類及含量，具有一定的缺陷性，需待進(jìn)一步優(yōu)化；（2）頂空瓶一定要確保其氣密性， 以保證樣品中二硫代氨基甲酸酯類農(nóng)藥在加熱密閉的環(huán)境中與SnCl2-HCl 反應(yīng)生成的CS2無泄漏；（3）配制SnCl2-HCl 溶液時(shí)，由于氯化亞錫溶液很不穩(wěn)定， 可加少量鋅?；蝈a粒防止亞錫離子氧化，為防止其水解，可以先將氯化亞錫溶于濃鹽酸中，再慢慢稀釋到所需濃度；（4）本實(shí)驗(yàn)由于目標(biāo)峰出現(xiàn)早于溶劑峰，為了防止大量溶劑進(jìn)入質(zhì)譜，從而損壞燈絲和質(zhì)譜檢測(cè)器， 應(yīng)在目標(biāo)峰二硫化碳出完峰后立即關(guān)閉燈絲和質(zhì)譜檢測(cè)器。