周其達(dá)，范健，秦琳，華鍵，韓楊，查蕾蕾，周衛(wèi)，周玉潔

失眠是最常見的睡眠障礙類型，失眠者在成年人中占10%～15%，其中大部分為慢性失眠［1］，日本、加拿大的失眠患病率分別為21%、18%，在歐洲，失眠的患病率為6%～12%［2］，2006 年中國內(nèi)地成年人中有失眠癥狀者高達(dá)57%［3］。失眠是導(dǎo)致心血管疾病，尤其是高血壓、心肌梗死和慢性心力衰竭的重要危險(xiǎn)因素［4-7］；也是2 型糖尿病的危險(xiǎn)因素之一［8］，并且和癡呆呈正相關(guān)［9］；此外，失眠患者患抑郁癥的可能性增加，提高了自殺風(fēng)險(xiǎn)，還增加了惡性意外事故的發(fā)生率［10］，因此失眠是嚴(yán)重危害人類健康的一種疾病。

失眠的治療指南均推薦心理和行為治療為首選方法，最常用的認(rèn)知行為治療（CBT-I）是慢性失眠的一線治療，其療效優(yōu)于藥物療法；而對于無法使用CBT-I或者無效的慢性失眠患者，催眠藥物仍廣泛運(yùn)用于慢性失眠的治療［1，11-13］?！吨袊扇耸咴\斷與治療指南（2017 版）》［10］推薦短中效苯二氮 類受體激動(dòng)劑（BZRAs）、褪黑素受體激動(dòng)劑、具有鎮(zhèn)靜作用的抗抑郁藥及食欲素受體拮抗劑等用于失眠的治療。國家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）批準(zhǔn)非苯二氮 類受體激動(dòng)劑（NBZDs）包括佐匹克隆、右佐匹克隆、唑吡坦和扎來普隆等速釋制劑用于失眠的治療［13］。失眠分為入睡困難、睡眠維持障礙和早醒等，分別占失眠的21%、32%和21%［14］，治療失眠的每一種藥物，對不同類型的失眠均采用睡前同一劑量服用，未能實(shí)施精準(zhǔn)治療。目前針對早醒性失眠，尚缺乏利用遲滯釋藥系統(tǒng)降低催眠藥物的劑量，延遲至夜間早醒發(fā)生前定時(shí)快速釋藥的方式來阻斷早醒的治療研究。因此，本課題組以臨床上常用的催眠藥物——佐匹克隆為模型藥，制備常規(guī)劑量1/2 的低劑量佐匹克隆延遲控釋片，觀察其和常規(guī)劑量佐匹克隆對實(shí)驗(yàn)大鼠睡眠行為的影響，為早醒性失眠的治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用清潔級(jí)雄性SD 大鼠，體質(zhì)量204～236 g，購于揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物中心（生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK 蘇2017-0007），飼養(yǎng)條件為溫度（18±2）℃，相對濕度（55±5）%，禁食不禁水12 h 后開始實(shí)驗(yàn)。

1.2 方法

1.2.1 研究時(shí)間與相關(guān)定義 本研究時(shí)間為2016 年10月—2018 年1 月。在我國臨床前藥理學(xué)研究中，規(guī)定用能否延長或縮短苯巴比妥鈉翻正反射的丟失時(shí)間來反映睡眠效應(yīng)［15］。大鼠的戊巴比妥鈉閾劑量為40～50 mg/kg，經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)，本研究采用50 mg/kg 的劑量行腹腔注射，將大鼠翻轉(zhuǎn)后1 min 不能恢復(fù)原狀，并重復(fù)3 次，判為翻正反射消失；大鼠翻正后1 min 內(nèi)能恢復(fù)原狀，并重復(fù)3 次，判為翻正反射恢復(fù)。大鼠經(jīng)腹腔注射戊巴比妥鈉至翻正反射消失的時(shí)間為睡眠潛伏期，翻正反射消失至恢復(fù)的時(shí)間為睡眠時(shí)間［16］。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)1 研究佐匹克隆不同劑量及給藥時(shí)間對大鼠的催眠作用及有效時(shí)間，為佐匹克隆延遲控釋片的制備奠定基礎(chǔ)。成人佐匹克隆的推薦劑量為7.5 mg，大鼠常用劑量為人體的40 倍，本研究以人體40 倍劑量（5.0 mg/kg）開展實(shí)驗(yàn)。40 只雄性SD 大鼠隨機(jī)分為對照1 組、低劑量（2.5 mg/kg 佐匹克?。┙M、高劑量（5.0 mg/kg佐匹克?。?0 min 組、高劑量60 min 組，每組10 只大鼠。對照1 組以50 mg/kg 戊巴比妥鈉腹腔注射；低劑量組根據(jù)早醒性失眠的特點(diǎn)，以50 mg/kg 戊巴比妥鈉腹腔注射，待翻正反射消失后30 min，以2.5 mg/kg 佐匹克隆溶液灌胃，模擬睡眠中低劑量佐匹克隆給藥；高劑量30 min組、高劑量60 min 組以5.0 mg/kg 佐匹克隆溶液灌胃后30、60 min，分別以50 mg/kg 戊巴比妥鈉腹腔注射，模擬睡前30、60 min 服用佐匹克隆。觀察并記錄各組大鼠的體質(zhì)量、睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間。

1.2.3 佐匹克隆延遲控釋片的制備

1.2.3.1 片芯的制備 將佐匹克隆與羧甲基淀粉鈉、乳糖按等量遞加法混合均勻，加入5%聚維酮K30（PVPK30）制軟材，30 目篩制粒后60 ℃烘干，25 目篩整粒，加入硬脂酸鎂混勻后壓片（φ=2.0 mm）。

1.2.3.2 佐匹克隆延遲控釋片的制備 將山崳酸甘油酯、乳糖混合均勻后，5%PVPK30 制軟材，25 目篩制粒，55 ℃烘干，20 目篩整粒，加入硬脂酸鎂混勻后得到包衣顆粒。先將半量的包衣顆粒加入沖模底部，將片芯置于中央位置，再加入剩余半量的包衣顆粒，壓片即得佐匹克隆延遲控釋片（φ=4.8 mm），每片含佐匹克隆 0.5 mg，達(dá)到服藥4 h 后釋放佐匹克隆的技術(shù)要求，體外釋藥試驗(yàn)顯示4 h 后開始崩解釋藥，15 min 內(nèi)完成釋藥。佐匹克隆延遲控釋片體外釋放曲線見圖1。該延遲控釋片由于阻滯包衣的存在，藥物不立即釋放而是經(jīng)一定時(shí)間后水分到達(dá)片芯，含高效崩解劑的片芯吸水到一定程度后膨脹力顯著增大導(dǎo)致包衣破裂，片芯暴露快速釋藥，呈現(xiàn)的是經(jīng)一定時(shí)滯后的“爆破式”釋藥行為。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)2 60 只雄性SD 大鼠，隨機(jī)分為對照2 組、佐匹克隆延遲控釋片組（2.5 mg/kg 佐匹克隆）和佐匹克隆溶液組（5.0 mg/kg 佐匹克?。?，每組20 只大鼠。對照2 組以50 mg/kg 戊巴比妥鈉腹腔注射；佐匹克隆延遲控釋片組依據(jù)制備的延遲控釋片的藥理特性，在采用自制開口器確認(rèn)佐匹克隆延遲控釋片喂藥成功后3.5 h，以50 mg/kg 戊巴比妥鈉腹腔注射，確保大鼠入睡后藥物釋放；佐匹克隆溶液組以5.0 mg/kg 佐匹克隆溶液灌胃60 min 后，以50 mg/kg 戊巴比妥鈉腹腔注射。觀察并記錄各組大鼠的體質(zhì)量、睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 23.0 軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計(jì)量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q 檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)1 對照1 組及低、高劑量組大鼠體質(zhì)量、睡眠潛伏期比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；各組睡眠時(shí)間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其中低劑量組與高劑量30 min、60 min 組大鼠睡眠時(shí)間長于對照1 組，高劑量30 min 組大鼠睡眠時(shí)間短于低劑量組，高劑量60 min 組大鼠睡眠時(shí)間長于高劑量30 min 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表1）。

2.2 實(shí)驗(yàn)2 對照2 組、佐匹克隆延遲控釋片組及佐匹克隆溶液組大鼠睡眠潛伏期比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組體質(zhì)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中佐匹克隆溶液組體質(zhì)量大于對照2 組、佐匹克隆延遲控釋片組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。各組睡眠時(shí)間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中佐匹克隆延遲控釋片組、佐匹克隆溶液組大鼠睡眠時(shí)間長于對照2 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表2）。

圖1 佐匹克隆延遲控釋片體外釋放曲線圖Figure 1 The curve of in vitro release of zopiclone delayed controlled release tablets

表1 實(shí)驗(yàn)1 各組大鼠體質(zhì)量、睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間比較n=10）Table 1 Comparison of baby mass，sleep latency and sleep duration of rats in each group derived from experiment 1

表1 實(shí)驗(yàn)1 各組大鼠體質(zhì)量、睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間比較n=10）Table 1 Comparison of baby mass，sleep latency and sleep duration of rats in each group derived from experiment 1

注：與對照1 組比較，aP＜0.05；與低劑量組比較，bP＜0.05；與高劑量組30 min 比較，cP＜0.05

組別 體質(zhì)量（g）睡眠潛伏期（min）睡眠時(shí)間（min）對照1 組 218.2±7.1 5.6±1.7 126.3±18.6低劑量組 221.6±6.1 6.9±1.9 175.3±18.1a高劑量30 min 組 217.8±9.2 7.2±3.0 151.8±19.2ab高劑量60 min 組 214.0±7.3 6.0±1.6 181.5±15.6ac F 值 1.723 1.259 19.651 P 值 0.180 0.303 ＜0.010

3 討論

慢性失眠的治療中，藥物干預(yù)也是重要的一環(huán)，目前常用的鎮(zhèn)靜催眠類藥物主要是傳統(tǒng)的BZRAs 及新型NBZDs，但BZRAs 會(huì)增加老年患者跌倒、機(jī)動(dòng)車事故風(fēng)險(xiǎn)和認(rèn)知功能障礙，因而美國老年學(xué)會(huì)Beers 標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)為應(yīng)避免采用此類藥物治療老年患者的失眠［14］。同時(shí)，這些藥物的長期應(yīng)用，大多會(huì)產(chǎn)生依賴性或藥物不良反應(yīng)，這與用藥劑量、用藥頻率、時(shí)程、用藥者個(gè)體特征及使用劑量高、t1/2短的藥物相關(guān)［17-19］，為了規(guī)避此類風(fēng)險(xiǎn)，國外學(xué)者提出并嘗試了使用最低有效劑量藥物來輔助睡眠［12］。

表2 實(shí)驗(yàn)2 各組大鼠體質(zhì)量、睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間比較（，n=20）Table 2 Comparison of sleep latency and sleep duration of rats in each group derived from experiment 2

表2 實(shí)驗(yàn)2 各組大鼠體質(zhì)量、睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間比較（，n=20）Table 2 Comparison of sleep latency and sleep duration of rats in each group derived from experiment 2

注：與對照2 組比較，aP＜0.05；與佐匹克隆延遲控釋片組比較，bP＜0.05

組別 體質(zhì)量（g）睡眠潛伏期（min）睡眠時(shí)間（min）對照2 組 215.9±9.5 4.8±2.0 130.2±25.6佐匹克隆延遲控釋片組 211.8±2.3 3.2±1.5 188.3±25.0a佐匹克隆溶液組 222.2±4.4ab 3.3±1.7 194.0±28.1a F 值 36.060 5.284 30.400 P 值 ＜0.001 0.071 ＜0.001

目前臨床使用的催眠類藥物中，尚存在一定的局限性：對不同失眠類型的時(shí)間針對性不強(qiáng)，入睡困難、睡眠維持障礙和早醒對藥物的時(shí)間要求有所不同，而臨床實(shí)踐中，針對不同類型的失眠，均采用睡前服藥；劑量針對性不強(qiáng)，采用同一劑量治療不同類型失眠，導(dǎo)致體內(nèi)藥物有效濃度在一定時(shí)間內(nèi)未發(fā)揮其效能、藥物濃度峰值與治療的目標(biāo)時(shí)間未達(dá)成一致，降低了藥物效能；為了達(dá)到治療效果而使用與實(shí)際需要不匹配的藥物劑量，導(dǎo)致藥物不良反應(yīng)和依賴性產(chǎn)生的可能性增加，這些因素均與當(dāng)前精準(zhǔn)醫(yī)療的要求存在差距。

佐匹克隆屬新型短效NBZDs，常用劑量7.5 mg，睡前服用，具有不良反應(yīng)較少、易獲得、價(jià)格較低的優(yōu)點(diǎn)。臨床中早醒性失眠患者中90%的患者并不存在入睡困難，早期不需要藥物輔助，其早醒多發(fā)生在睡眠4.0 ～4.5 h 之后。本研究依據(jù)早醒性失眠的特征，設(shè)計(jì)用佐匹克隆常用劑量的一半劑量，在早醒發(fā)生前釋藥，起到阻斷早醒、維持睡眠的作用，與早醒性失眠患者的睡眠要求同步，達(dá)到精準(zhǔn)治療、減少藥物依賴和其他不良反應(yīng)的目的。

本研究采用戊巴比妥延長實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)1 中，探索了不同給藥時(shí)機(jī)、給藥劑量對大鼠睡眠時(shí)間的影響，揭示睡前高劑量60 min 組較高劑量30 min 組顯著延長大鼠的睡眠時(shí)間；5.0 mg/kg 佐匹克隆睡前60 min 灌胃和2.5 mg/kg 佐匹克隆入睡30 min 后灌胃，兩組大鼠睡眠時(shí)間無顯著差異，驗(yàn)證了睡前服藥與睡眠中低劑量給藥療效一致的實(shí)驗(yàn)設(shè)想；在此基礎(chǔ)上，以2.5 mg/kg 劑量制成每片0.5 mg 佐匹克隆的延遲控釋片，使喂藥后4 h 釋藥。實(shí)驗(yàn)2 中，用基于實(shí)驗(yàn)1 結(jié)果制備的低劑量佐匹克隆延遲控釋片喂食實(shí)驗(yàn)大鼠，使之在大鼠入睡后釋放佐匹克隆，與5.0 mg/kg 佐匹克隆溶液睡前60 min 灌胃組和對照2 組比較，佐匹克隆延遲控釋片組、佐匹克隆溶液組均能顯著延長大鼠的睡眠時(shí)間，而兩組間延長睡眠時(shí)間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，可以通過改進(jìn)制作工藝，制備低劑量佐匹克隆延遲控釋片使之在大鼠睡眠中延遲釋藥，起到阻斷早醒、維持睡眠的作用，以低劑量取得與高劑量睡前使用同等延長大鼠睡眠時(shí)間的效果，顯現(xiàn)了通過低劑量佐匹克隆延遲控釋片有效針對成人早醒性失眠治療的前景。

作者貢獻(xiàn)：周其達(dá)進(jìn)行了文章的構(gòu)思與設(shè)計(jì)，對文章整體負(fù)責(zé)；周其達(dá)、范健、秦琳、周衛(wèi)、周玉潔負(fù)責(zé)研究的可行性分析及實(shí)施；韓楊負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)收集整理；華鍵進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理；周其達(dá)、周衛(wèi)撰寫論文；周玉潔負(fù)責(zé)制劑部分論文的修訂，查蕾蕾進(jìn)行論文的修訂。

本文無利益沖突。