馬 越,杜菲菲

(延安大學(xué)附屬醫(yī)院：1.內(nèi)分泌科；2.老年病科，陜西延安 716000)

甲狀腺微小癌(TMC)是病灶小于或等于1 cm的甲狀腺癌，其來源于濾泡或濾泡旁的甲狀腺細(xì)胞[1]。TMC最有效的治療方法是選擇甲狀腺切除術(shù)，然后進(jìn)行放射性碘消融和促甲狀腺激素(TSH)抑制治療，另外化學(xué)和放射療法也被利用于晚期和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移階段，經(jīng)過治療后，患者5年生存率約為98.1%[2-3]。雖然上述方法治療效果明顯，但若能以指標(biāo)水平表征TMC轉(zhuǎn)移發(fā)生過程的變化，則能更好地幫助臨床診斷和治療這種疾病。腫瘤蛋白p53和CD56均被證實在DNA損傷修復(fù)和自然殺傷細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)中起作用[4-5]。故本文擬分析TMC轉(zhuǎn)移患者體內(nèi)p53和CD56等指標(biāo)水平變化，并分析其關(guān)聯(lián)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年1月至2018年12月于本院接受治療的甲狀腺癌患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：年滿18周歲，經(jīng)同一組操作人員超聲或X線檢查和細(xì)胞活檢確診為甲狀腺癌[6]，病灶直徑小于或等于1 cm，有或無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，擬于本院進(jìn)行手術(shù)治療或有手術(shù)病理檢查樣本，自愿參與研究；排除標(biāo)準(zhǔn)：患其他惡性腫瘤，參與本研究前有相關(guān)疾病手術(shù)史，參與本研究前3個月服用相關(guān)治療藥物。將符合標(biāo)準(zhǔn)的154例患者納入研究(觀察組)，其中男41例，女113例，年齡18～76歲，平均(48.53±12.12)歲，病灶直徑0.1～1.0 cm，平均(0.61±0.25)cm，病灶數(shù)量1～8個，單灶105例，多灶49例，單葉多灶21例，雙葉多灶28例。選擇同期同年齡段于本院行手術(shù)的甲狀腺增生(TH)且非甲狀腺癌患者50例作為對照組，納入標(biāo)準(zhǔn)：行相關(guān)手術(shù)，留取甲狀腺組織樣本，年齡超過18周歲，無惡性腫瘤，自愿參與研究。其中男11例，女39例，年齡19～74歲，平均(46.41±10.58)歲。對照組和觀察組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)且在其監(jiān)督下完成。

1.2樣本收集 對于擬進(jìn)行手術(shù)患者，在手術(shù)進(jìn)行中獲取病理樣本后快速冰凍；對于已行手術(shù)并保有病理樣本的患者，直接取樣本進(jìn)行組織學(xué)檢查。另外，回顧全部患者臨床和病理資料，分析其一般資料、病灶數(shù)量、大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和樣本組織病理特征以用于多因素分析。

1.3指標(biāo)檢測 p53、CD56、CK19和PTEN均由同一組操作人員采用免疫組化實驗檢查，全部抗體均為鼠抗人單克隆抗體。其中空白對照使用1×PBS緩沖液替代一抗，其余操作不變。將手術(shù)中取得的病例組織和對照組樣品全部進(jìn)行石蠟包埋，連續(xù)切約為4 μm厚片后脫蠟進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。大致操作為消除酶活后加入一抗過夜靜置，滴加二抗后37 ℃孵育10 min，二氨基聯(lián)苯氨(DAB)顯色后，于鏡下觀察樣本染色情況。其中陽性p53為細(xì)胞核棕黃色著色，陽性CD56為細(xì)胞膜棕黃色著色，陽性CK19為細(xì)胞漿棕黃色(顆粒)著色。根據(jù)著色情況將陽性強(qiáng)度分為四級，分別是無著色(無色，計0分)、淡著色(淺黃色，計1分)、中度著色(黃色，計2分)和重著色(棕黃色，計3分)；再在同等倍鏡下單個視野內(nèi)記陽性著色細(xì)胞數(shù)目，陽性細(xì)胞數(shù)超過一半計3分，不足一半但超過四分之一計2分，不足四分之一但超過5%計1分，其余計為0分；將上述兩計分相乘得到最終陽性評估分，其中不足1分為陰性，大于1分但不足3分弱陽性，大于3分但不足6分為陽性，大于6分為強(qiáng)陽性，分別以-、+、++和+++表示[7]。

2 結(jié) 果

2.1兩組p53和CD56表達(dá)水平比較 觀察組p53陽性表達(dá)合并轉(zhuǎn)移病例64例(69.57%)，非轉(zhuǎn)移病30例(48.39%)；CD56弱陽性表達(dá)合并轉(zhuǎn)移病例4例(4.35%)，非轉(zhuǎn)移病例陽性表達(dá)19例(30.65%)，其余均為陰性表達(dá)；CK19合并轉(zhuǎn)移病例全部陽性表達(dá)，其中強(qiáng)陽性73例(79.34%)，而非轉(zhuǎn)移病例陽性表達(dá)56例(90.32%)。對照組p53弱陽性表達(dá)4例(8.00%)，其余為陰性表達(dá)；CD56陽性表達(dá)32例(64.00%)；CK19陽性表達(dá)16例(32.00%)，其余為陰性表達(dá)。對比兩組p53、CD56和CK19表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，兩組上述3個指標(biāo)表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1及圖1、2。

注：A為對照組、B為觀察組

圖1病理樣本切片HE染色(×100)

表1 兩組p53和CD56表達(dá)水平比較

注：與對照組相比，*P<0.05；與觀察組合并轉(zhuǎn)移相比，#P<0.05

注：A為p53陰性表達(dá)、B為p53陽性表達(dá)、C為CD56弱陽性表達(dá)、D為CD56陽性表達(dá)、E為CK19陰性表達(dá)、F為CK19陽性表達(dá)

圖2p53、CD56和CK19在組織中表達(dá)情況(×100)

2.2觀察組p53、CD56表達(dá)與TMC病理參數(shù)間的關(guān)系 將觀察組患者臨床資料根據(jù)年齡、性別等因素進(jìn)行細(xì)分，其后分析p53、CD56表達(dá)與各因素之間的關(guān)系，結(jié)果顯示，p53表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、組織分化程度密切相關(guān)(P<0.05)，與其他單因素?zé)o明顯關(guān)聯(lián)(P>0.05)，而CD56表達(dá)僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈明顯相關(guān)性(P<0.05)。見表2。

2.3p53和CD56診斷TMC發(fā)生和轉(zhuǎn)移的效能比較 將術(shù)前多普勒超聲和/或MRI和術(shù)后組織活檢結(jié)果作為本研究的診斷金標(biāo)準(zhǔn)，分別以p53、CD56、p53+CD56作為TMC發(fā)生和轉(zhuǎn)移的診斷指標(biāo)進(jìn)行效能分析。結(jié)果顯示,p53+CD56的診斷TMC發(fā)生具較高準(zhǔn)確率(96.57%)，p53、CD56單獨(dú)應(yīng)用時準(zhǔn)確率明顯低于聯(lián)合檢測(P<0.05)。見表3、4。

表2 觀察組p53、CD56表達(dá)與TMC病理參數(shù)間的關(guān)系(n)

表3 p53和CD56診斷TMC發(fā)生的效能比較(%)

表4 p53和CD56診斷TMC轉(zhuǎn)移的效能比較(%)

3 討 論

甲狀腺癌可分為乳頭狀癌、濾泡癌、髓樣癌、分化差的甲狀腺和未分化癌，其中乳頭狀癌最為常見，經(jīng)過治療后雖然其預(yù)后較好，但是極易發(fā)生中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[8]。比較TMC和TH病例p53和CD56表達(dá)情況后發(fā)現(xiàn)，上述兩個指標(biāo)在上述兩組病例中表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。然后又將TMC組病例分為合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和非轉(zhuǎn)移，再次對比他們之間的p53、CD56表達(dá)差異發(fā)現(xiàn)，p53在TMC合并轉(zhuǎn)移病例中69.57%陽性表達(dá)，明顯高于未轉(zhuǎn)移的48.39%；CD56在合并轉(zhuǎn)移病例中弱陽性表達(dá)4.35%，其余為陰性表達(dá)，而非轉(zhuǎn)移病例中陽性表達(dá)30.65%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；CK19在合并轉(zhuǎn)移病例中全陽性表達(dá)，而在非轉(zhuǎn)移病例中90.32%陽性表達(dá)，其表達(dá)情況分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。上述結(jié)果說明，p53和CD56在TMC合并轉(zhuǎn)移和非合并轉(zhuǎn)移病例中表達(dá)差異明顯，其可作為TMC合并轉(zhuǎn)移的特異性指標(biāo)被利用與臨床。

現(xiàn)階段研究表明，在DNA持續(xù)受損時，腫瘤蛋白p53激活DNA修復(fù)蛋白以保護(hù)其穩(wěn)定；當(dāng)DNA損傷被認(rèn)為不可修復(fù)時，p53可啟動細(xì)胞程序性死亡；p53還可以通過將細(xì)胞周期保持在DNA損傷識別的G1/S調(diào)節(jié)點(diǎn)以阻止細(xì)胞生長，這被認(rèn)為是抗癌作用的一部分[9-10]。在腫瘤組織水平，其生長需要招募新的血管以供給，而p53通過干擾抑制血管生成促進(jìn)因子的產(chǎn)生從而發(fā)揮作用[11]。因此，在TMC中p53陽性表達(dá)比例更高，與本研究結(jié)果一致。此外，p53的靶基因siva1是腫瘤轉(zhuǎn)移和上皮細(xì)胞-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的重要調(diào)控因子，故其與腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)生密切相關(guān)，也與研究者發(fā)現(xiàn)的在合并轉(zhuǎn)移和非轉(zhuǎn)移TMC病例中p53表達(dá)存在差異的結(jié)果一致[12]。在先天免疫反應(yīng)中自然殺傷細(xì)胞通過表達(dá)CD56以產(chǎn)生更多的細(xì)胞因子，諸如白細(xì)胞介素-10、干擾素γ和腫瘤壞死因子b等[13]。另外在巨噬細(xì)胞促進(jìn)自然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌過程中，CD56陽性比CD56陰性表達(dá)自然殺傷細(xì)胞其產(chǎn)生量更多，因而CD56表達(dá)與腫瘤發(fā)生和遷移密切相關(guān)，與研究者分析結(jié)果一致[14]。

目前在臨床上，常以超聲診斷TMC和TH，但因病灶較小故血液信號較弱，加之超聲下回聲稍高或等回聲，常被誤診[15]。上述研究發(fā)現(xiàn)，p53和CD56在TMC和TH病例中出現(xiàn)明顯的表達(dá)差異，因而推測這兩個參數(shù)可輔助TMC和TH的鑒別。結(jié)果顯示，p53、CD56單獨(dú)應(yīng)用時準(zhǔn)確率分別為85.78%和70.59%，兩參數(shù)聯(lián)合使用時其診斷準(zhǔn)確率為96.57%。因此，p53和CD56單獨(dú)或聯(lián)合輔助超聲或MRI等常規(guī)檢測能夠幫助準(zhǔn)確診斷與區(qū)分TMC和TH。另外，因為p53和CD56表達(dá)與TMC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，又推測其可以幫助診斷TMC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。效能比較結(jié)果顯示，p53和CD56單獨(dú)或聯(lián)合使用診斷TMC合并轉(zhuǎn)移的準(zhǔn)確率均不超過70.00%，故不建議單獨(dú)使用p53、CD56及p53+CD56檢測應(yīng)用于臨床診斷TMC轉(zhuǎn)移，而可輔助現(xiàn)有常規(guī)檢測手段，以達(dá)到更精準(zhǔn)和快速的目的。

4 結(jié) 論

綜上所述，在TMC合并轉(zhuǎn)移病例中p53多陽性表達(dá)，CD56陰性表達(dá)；在非轉(zhuǎn)移TMC中p53更趨于陰性表達(dá)，CD56陰性表達(dá)比例更低，兩者均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)，可輔助診斷TMC的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。