郭簡寧 李 萍 趙京霞 底婷婷 張 璐 王 燕

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院，北京市中醫(yī)研究所，銀屑病中醫(yī)臨床基礎(chǔ)研究北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100010)

銀屑病是一種慢性復(fù)發(fā)性炎癥性皮膚疾病，其發(fā)病機(jī)制尚不明確。研究表明，銀屑病也是一種身心疾病，對(duì)136例銀屑病患者和146例體檢健康者的臨床研究結(jié)果顯示：銀屑病患者焦慮情緒發(fā)生率為89.7%，遠(yuǎn)高于正常對(duì)照組焦慮情緒發(fā)生率28.8 %[1]。銀屑病患者所伴發(fā)的焦慮與抑郁等癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，甚至導(dǎo)致疾病遷延不愈或惡化[2,3]。研究發(fā)現(xiàn)，焦慮、抑郁狀態(tài)可引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)遞質(zhì)分泌增加，進(jìn)而導(dǎo)致皮膚神經(jīng)纖維在皮損局部分泌更多的神經(jīng)遞質(zhì)，通過神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)，放大局部皮損的炎癥反應(yīng)[4]。臨床和基礎(chǔ)研究均表明，抗焦慮抑郁、干預(yù)神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)銀屑病的治療具有一定的療效[5-7]。

綠原酸(Chlorogenic acid)，是一種苯丙素類化合物，它廣泛存在于忍冬科忍冬屬、菊科蒿屬植物中，提取物來源于中藥杜仲、金銀花、白茅根等，這些中藥均為治療銀屑病的常用中藥[8]。綠原酸具有廣泛的藥理作用，除抗氧化、抗菌、抗病毒、抗炎等作用外[9]，其腸道代謝產(chǎn)物有一定抗焦慮抑郁作用[10,11]，然而目前尚未見綠原酸治療銀屑病研究的相關(guān)報(bào)道。綜合以上研究基礎(chǔ)，我們推測綠原酸治療銀屑病的可能機(jī)制，是否與抗焦慮抑郁、調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)相關(guān)，因此本研究通過咪喹莫特誘導(dǎo)建立銀屑病樣小鼠模型，從改善皮損炎癥、調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)SP表達(dá)、緩解焦慮的角度，探究綠原酸治療銀屑病的作用及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 45只雄性BALB/c小鼠，體質(zhì)量18～20 g，6～8周齡，由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，動(dòng)物許可證編號(hào)SCXK(京)2014-0013。

1.1.2試劑與藥物 綠原酸購自美國Sigma-Aldrich公司，甲氨蝶呤片購自上海信誼藥廠有限公司，5%咪喹莫特乳膏為四川明欣藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，DAB顯色液、山羊血清工作液和3%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))H2O2去氧離子水均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，增殖細(xì)胞核抗原PCNA抗體購自美國Abcam公司，Substance P和NK1R單克隆抗體購自美國Affinity公司，Tubulin鼠單抗購自中國北京冠星宇科技有限公司，BCA蛋白定量試劑盒購自美國Thermo Fisher Scientific公司。

1.1.3儀器與設(shè)備 高速冷凍離心機(jī)(Centrifuge 5415D)由德國Eppendorf公司提供；脫水機(jī)(ASP6025)、包埋機(jī)(EG1150)、石蠟切片機(jī)(RM2255)、烤片機(jī)(HI1220)、HE半自動(dòng)染色儀(AU-TOSTAINER XL)均由德國Leica公司提供。曠場、高架迷宮由上海欣軟信息科技有限公司提供，視頻分析系統(tǒng)軟件為Supermaze。

1.2方法

1.2.1動(dòng)物造模、分組、給藥 參考 van der Fits 等[12]小鼠銀屑病樣模型制備方法造模。實(shí)驗(yàn)前戊巴比妥鈉(80 mg/kg)腹腔注射麻醉小鼠，背部備皮，面積約2 cm×3 cm，備皮后單籠飼養(yǎng)。依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法，將小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、甲氨蝶呤組、綠原酸高、低劑量組，每組9只。各組造模小鼠灌胃治療2 h后，每日1次，連續(xù)6 d，第7天取材。具體造模及給藥方法如下：①空白對(duì)照組小鼠給予0.9% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))氯化鈉注射液0.2 ml；背部涂抹凡士林乳膏。②模型組小鼠給予0.9% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))氯化鈉注射液0.2 ml；背部涂抹5%咪喹莫特乳膏62.5 mg。③甲氨喋呤組小鼠給予1 mg/kg甲氨蝶呤片溶液0.2 ml；造模同模型組。④綠原酸高劑量組小鼠給予等量100 mg/kg藥液，低劑量組給予等量50 mg/kg藥液；造模同模型組。

1.2.2檢測指標(biāo)及方法

1.2.2.1小鼠銀屑病樣皮損面積和疾病嚴(yán)重程度評(píng)分(PASI評(píng)分) 每日對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠皮損進(jìn)行拍照，根據(jù)PASI評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，鱗屑、浸潤和紅斑按0～4分評(píng)價(jià)：0分=無；1分=輕微；2分=中度；3分=重度；4分=極嚴(yán)重。每日記錄統(tǒng)計(jì)分析各組小鼠鱗屑、浸潤和紅斑分值，將三者分值相加計(jì)算總分，繪制PASI評(píng)分趨勢圖，動(dòng)態(tài)觀察小鼠皮損的變化情況。

1.2.2.2測量小鼠皮損表皮厚度 造模第7天取材，取一部分小鼠背部皮膚固定于福爾馬林中，脫水、包埋后制備5 μm石蠟切片。用蘇木精-伊紅(Hematoxylin-eosin，HE)染色，通過光學(xué)顯微鏡觀察各組小鼠皮膚形態(tài)學(xué)變化，每個(gè)標(biāo)本選5張不同切片進(jìn)行拍攝，采用ZEN軟件測量表皮厚度。

1.2.2.3免疫組化法檢測小鼠表皮層PCNA表達(dá)和真皮層CD3陽性T淋巴細(xì)胞浸潤情況 制備5 μm石蠟切片，免疫組織化學(xué)法(Immunohistoche-mistry，IHC)檢測PNCA、CD3的表達(dá)。在400倍鏡下，每例標(biāo)本隨機(jī)選取5個(gè)視野并拍照，運(yùn)用IPP 6.0圖像分析軟件記錄陽性細(xì)胞數(shù)量。

1.2.2.4曠場實(shí)驗(yàn) 造模第5天進(jìn)行曠場實(shí)驗(yàn)。該儀器由50 cm×50 cm×50 cm的隔板箱組成，曠場上方安裝攝像頭，連接電腦，利用Supermaze軟件將曠場劃分25宮格，具體分為中央?yún)^(qū)和四邊區(qū)兩個(gè)測量區(qū)域。實(shí)驗(yàn)前，提前將待測小鼠放入臨時(shí)籠盒適應(yīng)，減少小鼠緊張；實(shí)驗(yàn)開始將小鼠放置于曠場中央?yún)^(qū)，記錄5 min內(nèi)小鼠的活動(dòng)情況，包括中央?yún)^(qū)運(yùn)動(dòng)路程、中央?yún)^(qū)停留時(shí)間和中央?yún)^(qū)進(jìn)入頻率。在每只小鼠測量間隙，用75%酒精清潔曠場內(nèi)尿液、糞便，防止其他小鼠留下的氣味影響實(shí)驗(yàn)。

1.2.2.5高架十字迷宮 造模第6天進(jìn)行高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)。該儀器由兩條開放臂(50 cm長×10 cm 寬)、兩條閉合臂(50 cm長×10 cm寬×40 cm高)及中央?yún)^(qū)(10 cm長×10 cm寬)組成，開臂與閉臂相互垂直“十”字交叉。高架十字迷宮上方安裝攝像頭，連接電腦，利用Supermaze軟件將實(shí)驗(yàn)區(qū)域劃分為中央?yún)^(qū)、開臂和閉臂區(qū)域；具體操作同礦場實(shí)驗(yàn)，將小鼠放入中央?yún)^(qū)且面對(duì)開臂，記錄5 min內(nèi)小鼠的活動(dòng)情況，包括進(jìn)入開臂次數(shù)(Open arm entry，OE)，開臂時(shí)間(Open arm time，OT)，閉臂次數(shù)(Close arm entry，CE)，閉臂時(shí)間(Close arm time，CT)；根據(jù)上述指標(biāo)分別計(jì)算出：進(jìn)入開臂次數(shù)比例(OE%):OE/(OE+CE)×100%，開臂停留時(shí)間比例(OT%):OT/(OT+CT)×100%。

1.2.2.6Western blot法檢測皮損組織中SP、NK-1R蛋白表達(dá) 各組小鼠皮損組織加入含蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液，電動(dòng)勻漿機(jī)勻漿后，冰上裂解20 min，12 000 r/min 4℃離心5 min，分裝保存上清液。BCA法進(jìn)行蛋白定量。蛋白樣品電泳后濕轉(zhuǎn)膜，5%脫脂牛奶封閉，室溫輕搖60 min，加入一抗，4℃過夜。洗膜后二抗孵育1 h，再次洗膜，膠片曝光，顯影、定影。曝光后的膠片直接掃描，軟件Image J讀取條帶的IOD值。

2 結(jié)果

2.1綠原酸對(duì)咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠皮損的影響 每日觀察各組小鼠皮損變化，空白對(duì)照組小鼠皮膚始終白嫩，無鱗屑、紅斑和浸潤皮損；模型組小鼠從第2天開始，皮膚出現(xiàn)輕微紅斑和浸潤，其背部皮損，隨造模時(shí)間的推移不斷加重，第7天皮損最嚴(yán)重，皮損干燥，鱗屑肥厚，表皮紅腫，浸潤明顯；甲氨喋呤組和綠原酸各劑量組與模型組同期相比，鱗屑、紅斑和浸潤減輕，其中甲氨喋呤組與綠原酸低劑量組小鼠皮損改善最為明顯，見圖1。

每日評(píng)價(jià)記錄PASI評(píng)分，繪制趨勢圖，空白對(duì)照組小鼠背部皮膚正常無明顯改變，其鱗屑、紅斑、浸潤和總分分值始終為0；其余各組小鼠造模第2天出現(xiàn)輕微皮損，其鱗屑、浸潤、紅斑和總分分值，隨造模時(shí)間推移，不同程度的升高，于第7天達(dá)到峰值；模型組小鼠與空白對(duì)照組相比，其鱗屑、浸潤、紅斑和總分分值顯著升高(P<0.001)；甲氨喋呤組和綠原酸低劑量組與模型組相比，鱗屑、浸潤、紅斑和總分分值顯著降低(P<0.05)；綠原酸高劑量組與模型組相比，可降低浸潤分值(P<0.05)，見圖2。

2.2綠原酸對(duì)咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠皮損組織形態(tài)及表皮厚度的影響 HE染色結(jié)果顯示，空白對(duì)照組小鼠皮膚表皮層薄，細(xì)胞浸潤少；模型組小鼠與空白對(duì)照組相比，表皮層明顯增厚，角化不全及角化過度較多、炎性細(xì)胞浸潤嚴(yán)重，角質(zhì)層可見大量Munro微膿腫；甲氨喋呤組和綠原酸各劑量組小鼠與模型組相比，表皮層均變薄，角化不全和角化過度減少，炎性細(xì)胞浸潤及Munro微膿腫減輕，見圖3。

經(jīng)測量分析發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠與空白對(duì)照組相比，表皮層厚度顯著增厚(P<0.001)；甲氨喋呤組和綠原酸各劑量組表皮厚度均顯著低于模型組(P<0.001)，其中綠原酸高劑量組表皮厚度低于甲氨喋呤組(P<0.05)，見圖4。

2.3綠原酸對(duì)銀屑病樣小鼠皮損組織中PCNA和CD3+T淋巴細(xì)胞表達(dá)的影響 PCNA為增殖細(xì)胞核抗原，可反映銀屑病角質(zhì)細(xì)胞增殖狀態(tài)[13]。免疫組化法可觀察到皮損組織中PCNA陽性細(xì)胞被染成棕色?？瞻讓?duì)照組小鼠皮膚組織PCNA表達(dá)于基底層，呈線性分布；模型組小鼠廣泛表達(dá)于表皮層，其陽性細(xì)胞數(shù)量較空白對(duì)照組明顯增多(P<0.001)；甲氨喋呤組和綠原酸各劑量組PCNA陽性細(xì)胞數(shù)量均較模型組顯著減少(P<0.001)，見圖5及表1。

我們可在小鼠皮損真皮層中觀察到CD3陽性T淋巴細(xì)胞浸潤情況，CD3陽性T細(xì)胞呈棕色點(diǎn)?？瞻讓?duì)照組小鼠真皮層CD3陽性細(xì)胞數(shù)量少， 模型組與空白對(duì)照組相比，小鼠皮損組織中CD3陽性細(xì)胞數(shù)量顯著增多(P<0.001)，甲氨喋呤組和綠原酸各劑量組與模型組相比，CD3陽性細(xì)胞數(shù)量顯著減少(P<0.001),見圖6及表1。

圖1 各組小鼠第7天時(shí)皮損表現(xiàn)Fig.1 Skin lesions of mice in each group on the 7th day

圖2 各組小鼠皮損PASI評(píng)分趨勢圖Fig.2 PASI scores of mice skin lesions in each groupNote:Compared with control group,###.P<0.001;compared with model group,*.P<0.05,**.P<0.01,***.P<0.001.

圖3 各組小鼠皮膚組織形態(tài)學(xué)觀察(HE染色，×400)Fig.3 Histomorphology observation of mice skin tissue in each group(HE staining,×400)

2.4礦場實(shí)驗(yàn) 礦場實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，中央?yún)^(qū)路程：模型組小鼠與空白對(duì)照組相比， 其中央?yún)^(qū)路程顯著減少(P<0.05)、綠原酸各劑量組與模型組相比，中央?yún)^(qū)路程有一定升高趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；中央?yún)^(qū)時(shí)間：模型組小鼠與空白對(duì)照組相比，中央?yún)^(qū)時(shí)間顯著減少(P<0.05)，綠原酸各劑量組與模型組相比，中央?yún)^(qū)時(shí)間有升高趨勢，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；進(jìn)入中央?yún)^(qū)頻率：模型組小鼠與空白對(duì)照組相比，進(jìn)入中央?yún)^(qū)頻率減少，但兩組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，綠原酸各劑量組小鼠與模型組相比,進(jìn)入中央?yún)^(qū)頻率有升高趨勢，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見圖7。

圖4 各組小鼠皮損組織表皮厚度比較Fig.4 Epidermal thickness of mice skin lesionsNote:Compared with control group,###.P<0.001;compared with model group,***.P<0.001;compared with MTX group，△.P<0.05.

圖5 各組小鼠皮損組織中PCNA表達(dá)(×400)Fig.5 Expression of PCNA in mice skin lesions(×400)

圖6 各組小鼠皮損組織中CD3陽性T淋巴細(xì)胞表達(dá)(×400)Fig.6 Expression of CD3 positive T lymphocytes in mice skin lesions(×400)

2.5高架十字迷宮實(shí)驗(yàn) 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，空白對(duì)照組小鼠與模型組相比，OT%有一定升高趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，綠原酸各劑量組與模型組相比，結(jié)果同空白組(P>0.05)，見圖8。

2.6綠原酸對(duì)咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠皮損中SP、NK1R蛋白表達(dá)的影響 與空白對(duì)照組相比，模型組小鼠皮損中NK1R蛋白表達(dá)量有增高的趨勢；甲氨喋呤組、綠原酸各劑量組與模型組相比，NK1R蛋白表達(dá)量均有降低趨勢，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。模型組小鼠皮損SP蛋白表達(dá)顯著高于空白對(duì)照組(P< 0.001)，與模型組相比，綠原酸低劑量組可降低皮損SP的表達(dá)(P<0.05)，見圖9。

GroupsNumber of PCNA Number of CD3 positive cellsControl group31.22±3.298.143±0.96Model group90.89±2.531)33.86±1.641)MTX group58.33±2.712)20.57±1.342)CAL group59.44±6.782)20.08±0.962)CAH group47.56±4.132)18.75±1.232)

Note:Compared with control group,1)P<0.001;compared with model group,2)P<0.001.

圖7 各組小鼠行為活動(dòng)評(píng)分比較Fig.7 Behavioral activity scores of mice in each groupNote:Compared with control group,#.P<0.05.

2.7皮損中SP、NK1R蛋白表達(dá)與CD3陽性T淋巴細(xì)胞浸潤情況的相關(guān)性分析 SP和NK1R等計(jì)量資料均呈正態(tài)分布，采用雙變量相關(guān)分析統(tǒng)計(jì)SP、NK1R蛋白相對(duì)表達(dá)量與CD3陽性T淋巴細(xì)胞數(shù)量的相關(guān)性，皮損SP、NK1R蛋白相對(duì)表達(dá)量與CD3陽性T淋巴細(xì)胞數(shù)量皆呈正相關(guān)，即SP和NK1R神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)量越高，CD3陽性T淋巴細(xì)胞數(shù)量越多，小鼠背部皮損炎癥浸潤越嚴(yán)重，見圖10。

圖8 各組小鼠OE%和OT%比較分析Fig.8 Analysis of OE% and OT% in each group of miceNote:OE% is the proportion of times to enter the open arm,and OT% is the proportion of time to stay in the open arm.

圖9 各組小鼠皮損組織中NK1R、SP蛋白相對(duì)表達(dá)Fig.9 Relative expressions of NK1R and SP proteins in mice skin lesions of each groupNote:Compared with control group,###.P<0.001;compared with model group,*.P<0.05.

圖10 皮損中SP、NK1R蛋白相對(duì)表達(dá)量與CD3陽性T淋巴細(xì)胞數(shù)量關(guān)系Fig.10 Relationship between relative expression of SP and NK1R proteins in skin lesions and number of CD3 positive T lymphocytes

3 討論

銀屑病是一種身心免疫性疾病[14]，其病理過程有多種免疫細(xì)胞參與，在外源性因素與內(nèi)源性因素的作用下，免疫細(xì)胞被激活，釋放多種炎性細(xì)胞因子，導(dǎo)致皮損局部產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，并刺激角質(zhì)形成細(xì)胞異常增殖分化[15]。精神壓力屬于銀屑病發(fā)病的外源性因素之一，焦慮抑郁等消極情緒既是銀屑病發(fā)病的起因，也是使癥狀加重的不利因素；這些消極情緒的發(fā)生會(huì)使機(jī)體神經(jīng)元過度分泌神經(jīng)遞質(zhì)，導(dǎo)致神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)控的免疫細(xì)胞過度活化產(chǎn)生細(xì)胞因子，加重皮損炎癥反應(yīng)，使疾病遷延不愈或惡化[16]。Ward等[17]發(fā)現(xiàn)，在切除KC-Tie2轉(zhuǎn)基因銀屑病小鼠神經(jīng)后，銀屑病小鼠局部免疫細(xì)胞數(shù)量減少、表皮厚度降低、皮膚炎癥減輕；注射SP激活劑，銀屑病皮損和炎癥反應(yīng)加重；注射SP拮抗劑，皮損和炎癥反應(yīng)都得到改善，由此可見，干預(yù)神經(jīng)遞質(zhì)SP可作為治療銀屑病的靶點(diǎn)之一。

本研究采用咪喹莫特涂抹小鼠背部皮膚造模，隨著造模時(shí)間推移，模型組小鼠背部皮膚干燥，出現(xiàn)白色鱗屑、紅斑和浸潤等癥狀，并隨時(shí)間推移不斷加重；HE染色發(fā)現(xiàn)其皮損表皮厚度顯著增加，并存在大量角化不全和角化過度；免疫組化實(shí)驗(yàn)中PCNA是顯示角質(zhì)形成細(xì)胞增殖狀態(tài)的標(biāo)志物，CD3可顯示皮損T淋巴細(xì)胞炎癥浸潤程度，模型組小鼠皮損角質(zhì)形成細(xì)胞異常增殖，真皮存在T淋巴細(xì)胞炎癥浸潤，符合臨床銀屑病患者的皮損表現(xiàn)和病理。

使用綠原酸干預(yù)咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣模型小鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)綠原酸可緩解銀屑病樣小鼠鱗屑、紅斑和浸潤情況，減少角化不全和過度角化，降低表皮厚度，緩解表皮層角質(zhì)形成細(xì)胞過度增殖及皮損局部炎癥反應(yīng)。為了進(jìn)一步探究其作用靶點(diǎn)，我們觀察綠原酸對(duì)銀屑病樣模型小鼠焦慮行為學(xué)及神經(jīng)遞質(zhì)的影響。

綠原酸對(duì)銀屑病樣模型小鼠焦慮行為學(xué)的影響：曠場實(shí)驗(yàn)和高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)是評(píng)價(jià)小鼠焦慮狀態(tài)的經(jīng)典行為學(xué)實(shí)驗(yàn)[18,19]，我們在曠場實(shí)驗(yàn)中觀察到空白對(duì)照組小鼠進(jìn)入中央?yún)^(qū)路程、中央?yún)^(qū)時(shí)間、中央?yún)^(qū)頻率均顯著高于模型組，而高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，空白對(duì)照組OT%較模型組有一定升高趨勢，而OE%趨勢不明顯，我們猜測可能與樣本量大小有關(guān)，以上結(jié)果提示咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠可能存在焦慮癥狀，與劉正榮[7]的研究結(jié)果一致。與模型組相比，綠原酸可提高小鼠中央?yún)^(qū)路程、中央?yún)^(qū)時(shí)間、中央?yún)^(qū)頻率、OE%和OT%，在一定程度上可以改善小鼠的焦慮程度。

綠原酸對(duì)銀屑病樣模型小鼠神經(jīng)遞質(zhì)SP/NK1R的影響。臨床中銀屑病患者伴隨焦慮癥和抑郁癥共病的發(fā)生率較高，這些患者皮損中SP的表達(dá)顯著高于對(duì)照組[2,20]，NK1R是SP結(jié)合免疫細(xì)胞并產(chǎn)生信號(hào)傳遞作用的關(guān)鍵受體，連接神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)的關(guān)鍵靶點(diǎn)[21]，SP及其受體NK1R在焦慮抑郁疾病中起重要的調(diào)節(jié)作用[22]，并且共同參與銀屑病神經(jīng)免疫炎癥的病理過程[23]。本研究發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠皮損組織中NK1R與SP蛋白的表達(dá)量均高于空白對(duì)照組，而綠原酸治療組小鼠皮損組織NK1R與SP蛋白的表達(dá)較模型組明顯減少。推測綠原酸可能通過降低SP及其受體NK1R的表達(dá)，緩解小鼠焦慮程度。神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)介導(dǎo)銀屑病的始終[24,25]，進(jìn)一步對(duì)焦慮相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)量與小鼠皮損組織炎癥程度進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)NK1R、SP的相對(duì)蛋白表達(dá)量與CD3陽性T淋巴細(xì)胞數(shù)量呈正相關(guān)，即焦慮相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)量越高，銀屑病樣小鼠焦慮程度增加，局部皮損組織炎癥反應(yīng)越嚴(yán)重。綜上提示綠原酸可能通過降低皮損組織中NK1R與SP的表達(dá)，緩解小鼠焦慮程度，降低炎癥反應(yīng)，從而改善小鼠銀屑病樣皮損。