文│辛光英 李穎（山東省青島市黃島區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心）

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)是動(dòng)物疫病防治工作的重要環(huán)節(jié)，不僅能檢測(cè)動(dòng)物免疫抗體水平，還能發(fā)現(xiàn)早期動(dòng)物感染病原，保證動(dòng)物產(chǎn)品衛(wèi)生質(zhì)量。但在動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)過程中，實(shí)際結(jié)果與檢測(cè)結(jié)果可能存在誤差，主要因素如下。

一、檢測(cè)人員因素

檢測(cè)人員是影響實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的重要因素。檢測(cè)人員的文化水平、專業(yè)技術(shù)水平、工作熟練程度、對(duì)待工作的態(tài)度以及分析問題、解決問題的能力，直接影響到實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度。近年來，國家級(jí)、省級(jí)、區(qū)級(jí)獸醫(yī)主管部門都非常重視檢測(cè)人員的檢測(cè)能力，每年都會(huì)組織獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行能力比對(duì)，以查找出結(jié)果偏差的原因，并及時(shí)進(jìn)行培訓(xùn)。

《質(zhì)量手冊(cè)》等相關(guān)文件規(guī)定，檢測(cè)人員需有大專以上文化程度，有從事檢測(cè)控制的相關(guān)專業(yè)知識(shí)，了解有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、計(jì)量、質(zhì)量管理及相關(guān)法律法規(guī)知識(shí)，并經(jīng)培訓(xùn)考核合格后持證上崗。例如血凝和血凝抑制試驗(yàn)，人員倍比稀釋至關(guān)重要，直接影響結(jié)果，稀釋的均勻和不均勻，效價(jià)會(huì)有所不同，配制抗原的比例也就不同，結(jié)果就會(huì)出現(xiàn)偏差。

二、檢測(cè)樣品因素

動(dòng)物檢測(cè)樣品有血清、抗凝血、組織、排泄物、分泌物等。要求血清無溶血、無膠凍以及新鮮，否則影響抗體檢測(cè)結(jié)果。采樣方法、采樣部位、采樣數(shù)量、采樣時(shí)間和樣品保存質(zhì)量直接決定檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和結(jié)論的科學(xué)性。采集的樣品要無菌且避免交叉感染，采集的樣品必須有代表性，采取的臟器組織應(yīng)為病變明顯部位。

例如檢測(cè)免疫動(dòng)物抗體水平時(shí)，多采用靜脈采血，要在免疫14天或21天以后采血；檢測(cè)禽流感、新城疫病原時(shí)，多采集咽喉、泄殖腔棉拭子或者采集新鮮糞便，要保存在濃度10%甘油的PBS溶液中；檢測(cè)非洲豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光PCR試驗(yàn)時(shí)，采集的全血需放在抗凝管中，搖勻避免凝固，如要采集組織器官，則要采集脾臟等病變明顯部位；檢測(cè)一些寄生蟲疫病時(shí)，需采集腸道或者糞便，均需冷藏保存，及時(shí)送檢。

三、檢測(cè)試劑因素

檢測(cè)樣品所用的試劑盒，因生產(chǎn)廠家、批次等不同，試劑的穩(wěn)定性、敏感性、特異性等會(huì)有所不同，并且同一廠家的不同品種或者同一廠家的不同批次質(zhì)量也會(huì)有所不同，所以檢測(cè)結(jié)果也會(huì)有所不同。實(shí)驗(yàn)室要求做好標(biāo)準(zhǔn)試劑驗(yàn)收記錄，從試劑的效價(jià)評(píng)定、生產(chǎn)廠家、運(yùn)輸條件、包裝等方面進(jìn)行驗(yàn)收，驗(yàn)收合格后方可入庫使用。這就需要檢測(cè)人員提高鑒別分析能力，選擇一些規(guī)范化、口碑好的試劑。

四、儀器設(shè)備的因素

不同試驗(yàn)所用的儀器設(shè)備不相同，儀器設(shè)備因功能、生產(chǎn)廠家、型號(hào)、技術(shù)參數(shù)等不同，檢測(cè)性能和誤差都會(huì)有差別。例如移液器有不同的量程，要根據(jù)試驗(yàn)的要求選擇量程范圍，否則不僅會(huì)損壞移液器，還會(huì)產(chǎn)生較大的誤差。冰箱分超低溫、低溫、冷藏；離心機(jī)有高速、低速、常溫、低溫。要根據(jù)試驗(yàn)要求選擇合適的儀器，否則會(huì)破壞樣品和試劑，導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果有較大差別。

一些精密儀器需要的生產(chǎn)廠家比較嚴(yán)格，有的需要進(jìn)口品牌，例如移液器一般選擇德國、芬蘭等進(jìn)口的，用起來輕便、順滑且精準(zhǔn)度比較高。

五、檢測(cè)方法的因素

不同的試驗(yàn)檢測(cè)方法和操作規(guī)范不相同。常用的檢測(cè)方法有血凝和血凝抑制試驗(yàn)、液相阻斷ELISA試驗(yàn)、熒光RT-PCR試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和病毒中和試驗(yàn)等。不同的檢測(cè)項(xiàng)目所用的檢測(cè)方式不同，而檢測(cè)用的標(biāo)準(zhǔn)和操作規(guī)程也不同，即使是相同的檢測(cè)項(xiàng)目，使用的檢測(cè)手段也有差異，所以檢測(cè)的結(jié)果和準(zhǔn)確性也存在差異。例如檢測(cè)禽流感免疫效果，要選擇血凝抑制試驗(yàn)，因?yàn)闄z測(cè)的是禽流感抗體水平；檢測(cè)是否感染禽流感病毒，要選擇禽流感病毒熒光RT-PCR，檢測(cè)的是病原。檢測(cè)口蹄疫免疫效果要選擇口蹄疫抗體液相阻斷ELISA試驗(yàn)，而口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC單抗阻斷ELISA抗體試驗(yàn)檢測(cè)的是存不存在感染抗體，最終確診是否感染口蹄疫病毒要用熒光RT-PCR試驗(yàn)。所以要選擇正確的檢測(cè)方法，以免影響結(jié)果。

六、環(huán)境因素

環(huán)境因素主要指試驗(yàn)過程中溫度、濕度和試驗(yàn)環(huán)境的清潔度等。例如血凝和血凝抑制試驗(yàn)、液相阻斷ELISA試驗(yàn)等都要求室溫，溫度過高或過低都會(huì)影響試驗(yàn)的反應(yīng)速度甚至嚴(yán)重時(shí)會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。如果試驗(yàn)環(huán)境被污染，就易出現(xiàn)一些假陽性或假陰性，所以在試驗(yàn)中要減少污染的可能性，同時(shí)防治氣溶膠的產(chǎn)生，試驗(yàn)完畢及時(shí)通風(fēng)、消毒。

綜上所述，影響動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室結(jié)果準(zhǔn)確性的因素比較多，需實(shí)驗(yàn)人員認(rèn)真閱讀每種試劑盒的說明書，對(duì)試驗(yàn)中出現(xiàn)的問題認(rèn)真分析，找出預(yù)防措施，加強(qiáng)培訓(xùn)學(xué)習(xí)，不斷提升自身的專業(yè)技能水平，以促進(jìn)畜牧業(yè)的健康發(fā)展。