鄧山鷹，劉 宇，蒙 強(qiáng)，陳月梅，張春瑩，謝 恒，鄭 沁

(四川大學(xué)華西醫(yī)院實驗醫(yī)學(xué)科，四川成都 610041)

腦脊液和胸腹水等體液在病理狀態(tài)下出現(xiàn)存積和改變，通過穿刺采集標(biāo)本，獲知其性質(zhì)和狀態(tài)，為鑒別診斷提供重要信息[1]。而腦脊液和胸腹水中白細(xì)胞計數(shù)及分類和腦脊液中紅細(xì)胞的形態(tài)信息又可以作為判斷其存積和改變的原因，為炎癥和腫瘤等的病理形態(tài)鑒別和確診提供相關(guān)的信息，并且對疾病的治療及預(yù)后也有著重要的臨床意義[2-4]。傳統(tǒng)的體液標(biāo)本手工鏡檢法，其操作費(fèi)時、繁瑣又帶有很大的主觀性和經(jīng)驗性，并且近年來隨著體液標(biāo)本量及緊急檢查的體液標(biāo)本增多，體液常規(guī)檢測逐步開始出現(xiàn)自動化檢測的模式。目前已有很多關(guān)于儀器法進(jìn)行體液細(xì)胞計數(shù)及分類計數(shù)的研究[5-9]。Sysmex XN全自動血細(xì)胞分析儀具有獨立的體液檢測模式，可用于腦脊液、胸腹水細(xì)胞的計數(shù)及分類計數(shù)。但由于體液標(biāo)本的自動化檢測結(jié)果準(zhǔn)確性受諸多因素影響，并未在臨床進(jìn)行大標(biāo)本的論證及廣泛推廣。本研究納入341例體液標(biāo)本，以手工法為參考方法，與Sysmex XN全自動血細(xì)胞分析儀體液模式檢測結(jié)果進(jìn)行比對，探討腦脊液和胸腹水標(biāo)本細(xì)胞計數(shù)和分類計數(shù)自動化的可行性。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2019年7-8月本院住院患者體液標(biāo)本341例，其中腦脊液標(biāo)本138例，胸腹水標(biāo)本203例。采集標(biāo)本均以乙二胺四乙酸二鉀抗凝，混勻后及時送檢并在2 h內(nèi)完成計數(shù)與分類計數(shù)。

1.2儀器及試劑 Sysmex XN全自動血細(xì)胞分析儀及配套試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品購自日本Sysmex公司；CX23普通光學(xué)顯微鏡購自日本Olympus公司；改良牛鮑計數(shù)板購自中國上海醫(yī)用光學(xué)儀器公司。

1.3方法

1.3.1Sysmex XN全自動血細(xì)胞分析儀(儀器法) 每日使用Sysmex配套質(zhì)控品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，各檢測參數(shù)結(jié)果均在控方可進(jìn)行標(biāo)本檢測。參照全血細(xì)胞分析儀體液模式的操作說明，將標(biāo)本充分混勻后放入儀器內(nèi)進(jìn)行檢測，分別記錄有核細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)及有核細(xì)胞分類計數(shù)(多個核細(xì)胞、單個核細(xì)胞、高熒光細(xì)胞)的百分比。

1.3.2改良牛鮑計數(shù)板(手工法) 嚴(yán)格按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》中體液細(xì)胞計數(shù)的要求進(jìn)行操作[10]，將待測標(biāo)本顛倒混勻后吸取適量在牛鮑計數(shù)板進(jìn)行充池，靜置5 min后用光學(xué)顯微鏡分別計數(shù)上、下2個計數(shù)池的中央及四角共10個大方格內(nèi)的有核細(xì)胞數(shù)和紅細(xì)胞數(shù)，并換算為每升標(biāo)本中的細(xì)胞數(shù)。有核細(xì)胞分類計數(shù)是將紅細(xì)胞用冰醋酸處理破壞后，再分別計數(shù)多個核細(xì)胞、單個核細(xì)胞及間皮細(xì)胞的百分比。所有標(biāo)本均由2名高資歷經(jīng)驗豐富的檢驗人員按標(biāo)準(zhǔn)化操作執(zhí)行，結(jié)果取平均值。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，用組內(nèi)相關(guān)系數(shù)(ICC)值進(jìn)行一致性分析，ICC>0.75為兩種方法一致性較好。檢驗水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1儀器法與手工法腦脊液標(biāo)本有核細(xì)胞、紅細(xì)胞計數(shù)及有核細(xì)胞分類計數(shù)結(jié)果比較 儀器法與手工法腦脊液標(biāo)本有核細(xì)胞計數(shù)一致性較好(ICC=0.985，P<0.05)；儀器法與手工法腦脊液標(biāo)本紅細(xì)胞計數(shù)一致性較好(ICC=0.994，P<0.05)；儀器法與手工法腦脊液標(biāo)本有核細(xì)胞分類計數(shù)中單個核細(xì)胞一致性較好(ICC=0.917，P<0.05)，多個核細(xì)胞一致性較好(ICC=0.946，P<0.05)。見圖1。

注：A表示手工法與儀器法有核細(xì)胞計數(shù)比較結(jié)果；B表示手工法與儀器法紅細(xì)胞計數(shù)比較結(jié)果；C表示手工法與儀器法單個核細(xì)胞分類計數(shù)比較結(jié)果；D表示手工法與儀器法多個核細(xì)胞分類計數(shù)比較結(jié)果。

圖1手工法與儀器法腦脊液標(biāo)本細(xì)胞計數(shù)及分類計數(shù)結(jié)果比較

2.2儀器法與手工法對胸腹水標(biāo)本有核細(xì)胞、紅細(xì)胞計數(shù)及有核細(xì)胞分類計數(shù)結(jié)果比較 儀器法與手工法對胸腹水標(biāo)本有核細(xì)胞計數(shù)一致性較好(ICC=0.960，P<0.05)；儀器法與手工法對胸腹水標(biāo)本紅細(xì)胞計數(shù)一致性較好(ICC=0.996，P<0.05)；儀器法與手工法對胸腹水標(biāo)本有核細(xì)胞分類計數(shù)中單個核細(xì)胞計數(shù)一致性較好(ICC=0.894，P<0.05)，多個核細(xì)胞計數(shù)一致性較好(ICC=0.937，P<0.05)，間皮細(xì)胞計數(shù)一致性較好(ICC=0.758，P<0.05)。對于手工法計數(shù)紅細(xì)胞<500×106/L的腦脊液和胸腹水均用體液模式和超敏分析模式進(jìn)行計數(shù)，發(fā)現(xiàn)超敏分析模式所檢測出的紅細(xì)胞數(shù)與手工法計數(shù)更接近，但由于標(biāo)本量較少未做一致性統(tǒng)計。見圖2。

注：A表示手工法與儀器法有核細(xì)胞計數(shù)比較結(jié)果；B表示手工法與儀器法紅細(xì)胞計數(shù)比較結(jié)果；C表示手工法與儀器法單個核細(xì)胞分類計數(shù)比較結(jié)果；D表示手工法與儀器法多個核細(xì)胞分類計數(shù)比較結(jié)果；E表示手工法與儀器法間皮細(xì)胞分類計數(shù)比較結(jié)果。

圖2手工法與儀器法對胸腹水標(biāo)本細(xì)胞計數(shù)及分類計數(shù)結(jié)果比較

3 討 論

Sysmex XN全自動血液分析儀融合了半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞術(shù)、鞘流液電阻抗檢測法和核酸熒光染色等先進(jìn)技術(shù)，有血液和體液檢測模式。體液檢測模式使用流式細(xì)胞術(shù)和核酸熒光染色技術(shù)對體液中有核細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)及分類計數(shù)，用鞘液電阻抗法檢測紅細(xì)胞。該儀器計數(shù)腦脊液和胸腹水中有核細(xì)胞和紅細(xì)胞重復(fù)性好，線性范圍寬，操作簡單方便，能有效避免人員之間計數(shù)差異導(dǎo)致的結(jié)果重復(fù)性低以及操作繁瑣帶來的報告時間延遲[11]。儀器法使用的標(biāo)本分析量(約200 μL)遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于手工顯微鏡鏡檢法，增加了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。并且高熒光細(xì)胞計數(shù)和百分比的值可以作為腦脊液和胸腹水腫瘤細(xì)胞的陰性排除指標(biāo)[12]。

XN全自動血液分析儀相對于XE及XT全自動血細(xì)胞分析儀計數(shù)腦脊液和胸腹水還具有以下優(yōu)勢。首先，XN系列的體液模式計數(shù)的顆粒數(shù)相較于其他機(jī)型多了3倍，大大提高了計數(shù)的準(zhǔn)確性；其次，XN系列獨有超敏分析模式[13]，該模式有核細(xì)胞計數(shù)及分類原理與體液模式相同，但計數(shù)紅細(xì)胞時采用網(wǎng)織紅細(xì)胞通道的光學(xué)法計數(shù)，紅細(xì)胞數(shù)量較少時影響因素更少計數(shù)更準(zhǔn)確。本研究對紅細(xì)胞手工法計數(shù)<500×106/L的腦脊液和胸腹水均用體液模式和超敏分析模式進(jìn)行計數(shù)，發(fā)現(xiàn)超敏分析模式所檢測出的紅細(xì)胞數(shù)與手工法計數(shù)更接近，但由于標(biāo)本量較少未做一致性統(tǒng)計。目前該儀器超敏分析模式未用于臨床應(yīng)用且費(fèi)用相對于體液模式高，所以可以根據(jù)實際情況選擇是否用該模式進(jìn)行檢測。

本研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)存在膿細(xì)胞、脂肪球及紅細(xì)胞聚集時，紅細(xì)胞的直方圖和白細(xì)胞的散點圖均會受到影響，從而影響檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。臨床檢驗工作者在使用該分析儀進(jìn)行體液檢測時，需要綜合分析儀器的各項參數(shù)，包括細(xì)胞計數(shù)、細(xì)胞分類計數(shù)和散點圖上的細(xì)胞分布異常，對于異常病理變化和異常標(biāo)本的早期認(rèn)識和恰當(dāng)處理都較為重要。當(dāng)標(biāo)本細(xì)胞水平低于或高于儀器法檢測的線性范圍，將影響檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，并且當(dāng)前一個標(biāo)本細(xì)胞數(shù)量太高時，應(yīng)注意考慮攜帶污染的可能性，評估儀器對于背景的沖洗時間是否足夠[14-15]。

值得注意的是，觀察腦脊液中紅細(xì)胞的形態(tài)有助于區(qū)分陳舊性蛛網(wǎng)膜下腔出血(皺縮紅細(xì)胞)和穿刺損傷出血(正常形態(tài)紅細(xì)胞)，而儀器只能檢測紅細(xì)胞的大小，不能提示紅細(xì)胞形態(tài)異常。雖然當(dāng)腦脊液標(biāo)本中有巨噬細(xì)胞時熒光強(qiáng)度較強(qiáng)的區(qū)域(HF-BF區(qū)域)會出現(xiàn)散點群提示，對陳舊性出血有一定的提示作用，但是腦脊液標(biāo)本檢測到紅細(xì)胞時仍推薦顯微鏡鏡檢復(fù)核觀察紅細(xì)胞形態(tài)。

4 結(jié) 論

綜上所述，Sysmex XN全自動血細(xì)胞分析儀體液檢測模式與手工法結(jié)果有較好的一致性，其操作簡單、迅速，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，重復(fù)性好，在體液細(xì)胞檢測中具有較高的臨床應(yīng)用價值。