王 晶，劉艷玲，劉 倩，張玉靜，左江華，劉春娜，柴立超△

(邢臺市人民醫(yī)院：1.腎內(nèi)科；2.檢驗科；3.核醫(yī)學(xué)科，河北邢臺 054001)

據(jù)報道中國慢性腎臟病患病率逐年增長，慢性腎臟病起病隱匿、進展較快、預(yù)后差、引發(fā)因素尚不明確，早期預(yù)防、診斷尤為重要[1]。血清β2微球蛋白(β2-MG)主要參與淋巴細胞表面識別等過程，是機體白細胞抗原分子組成部分，β2-MG是1個具有一定殺傷細胞能力的β輕鏈[3-4]。microRNA(miRNA)既屬于單鏈RNA，又屬于非編碼的單螺旋RNA分子，與轉(zhuǎn)錄后基因表達調(diào)控有關(guān)，目前已知的miRNA分子已經(jīng)超過2萬種，與多種人類惡性腫瘤的發(fā)生及發(fā)展有關(guān)。有動物實驗結(jié)果提示，β2-MG-miRNA高表達與小鼠慢性和亞慢性肝中毒有關(guān)[2]，已經(jīng)可以作為肝臟臟器系數(shù)的評估指標(biāo)開始使用，對于反映體內(nèi)蓄積毒性具有重要意義；而蓄積毒性又是多種慢性病及惡性腫瘤等發(fā)生的病理學(xué)基礎(chǔ)之一，因此，備受相關(guān)領(lǐng)域臨床和科研工作者重視。本研究擬針對β2-MG-miRNA的表達情況進行分析，并討論其可能對慢性腎臟病發(fā)生的影響，通過臨床流行病的研究設(shè)計方案加以驗證。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2016年10月至2018年6月本院慢性腎臟病患者143例作為試驗組，研究對象均來自于本院腎內(nèi)科收治的慢性腎臟病病例，隨訪時間設(shè)定為48個月。慢性腎臟病的判定標(biāo)準(zhǔn)為：(1)腎小球濾過率的下降；(2)腎臟損傷標(biāo)志物陽性(包括血或尿成分的異常)；(3)影像學(xué)檢測提示異常。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合研究納入要求且自愿加入研究的受試對象；(2)開展本研究的臨床醫(yī)院均按照統(tǒng)一診斷標(biāo)準(zhǔn)確診的患者，全部受試對象均于本院接受相關(guān)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)1年內(nèi)參與過類似研究；(2)患有精神衛(wèi)生疾病、心理障礙、近端腎小管損害、免疫病、惡性腫瘤、排斥反應(yīng)、艾滋病及攝入硝苯地平(心痛定)、慶大霉素、妥布霉素等藥物結(jié)果陽性者；(3)各種原因不能配合研究始終的受試對象。同期選擇本院體檢健康者143例作為對照組。基線資料匹配結(jié)果顯示兩組患者的基本資料差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，具有可比性。

1.2方法 受試者采樣前12 h低蛋白飲食，每位受試者取10 mL靜脈血樣本及5 mL尿液樣本，3 000 r/min離心后取上清，等量分裝2份。采用酶聯(lián)免疫吸附測定雙抗夾心法檢測受試者的尿β2-MG水平，結(jié)果以mg/L表示。研究采用實時熒光定量PCR法檢測miRNA的表達水平，送至中國武漢優(yōu)爾生生物有限公司進行miRNA表達測定。評估腎功能，包括血尿素氮、血肌酐、血尿素、血尿酸、尿肌酐、尿蛋白及內(nèi)生肌酐清除率。

2 結(jié) 果

2.1兩組尿β2-MG及其miRNA表達水平比較 結(jié)果顯示試驗組與對照組尿β2-MG及其miRNA表達水平比較均差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組尿β2-MG及其miRNA表達水平比較

2.2慢性腎臟病患者尿β2-MG及其miRNA表達水平與腎功能各項指標(biāo)的關(guān)系 研究中依據(jù)慢性腎臟病患者入組時的基線尿β2-MG及其miRNA表達豐度中位數(shù)對慢性腎臟病患者進行分組(其中β2-MG及其miRNA表達豐度等于中位數(shù)按照偶數(shù)樣本總數(shù)的分組原則等額分組)，兩組樣本數(shù)分別為71例和72例。結(jié)果顯示，慢性腎臟病患者高尿β2-MG組中血肌酐、血尿酸、尿肌酐、尿蛋白及內(nèi)生肌酐清除率與低尿β2-MG組表達水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；慢性腎臟病患者高尿β2-MG-miRNA組中血尿素氮、血肌酐、血尿酸、尿蛋白及內(nèi)生肌酐清除率與低尿β2-MG-miRNA組表達水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。慢性腎臟病患者尿β2-MG-miRNA表達水平與腎功能各項指標(biāo)均呈正相關(guān)(P<0.05)。表2～4。

表2 慢性腎臟病患者尿β2-MG表達水平與腎功能各項指標(biāo)的關(guān)系

表3 慢性腎臟病患者尿β2-MG-miRNA表達水平與腎功能各項指標(biāo)的關(guān)系

表4 慢性腎臟病患者尿β2-MG-miRNA表達水平與腎功能各項指標(biāo)的相關(guān)性分析(r)

注：*P<0.05。

2.3慢性腎臟病患者病程與尿β2-MG及其miRNA表達水平的相關(guān)性 此處采用采用Pearson相關(guān)計算慢性腎臟病患者病程與尿β2--MG及其miRNA表達水平的等級相關(guān)系數(shù)r，結(jié)果顯示，慢性腎臟病患者的尿β2-MG及其miRNA表達水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(r=0.350，P<0.05)，而患者病程與尿β2-MG及其miRNA表達水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

表5 慢性腎臟病患者病程與尿β2-MG及其miRNA表達水平的相關(guān)性(r)

注：*P<0.05。

2.4慢性腎臟病患者病程與尿β2-MG及其miRNA表達水平的診斷效能分析 慢性腎臟病患者尿β2-MG表達水平的診斷的靈敏度為87.32%，特異度為81.94%，準(zhǔn)確度為84.62%，均高于尿β2-MG-miRNA表達水平的診斷的靈敏度為81.69%，特異度為72.22%，準(zhǔn)確度為76.92%，見表6。

表6 慢性腎臟病患者尿β2-MG及β2-MG-miRNA表達水平的診斷靈敏度、特異度和準(zhǔn)確度(%)

3 討 論

本研究發(fā)現(xiàn)，相對于對照組而言，慢性腎臟病患者的尿β2-MG及其miRNA表達水平均相對較高。真核細胞生物大多數(shù)有核細胞均能合成β2-MG，合成后即可附著于細胞表面；且正常情況下機體每日合成的β2-MG處于恒定狀態(tài)，分泌于人體的各種體液中。在人體出現(xiàn)生理機能或病理學(xué)結(jié)果出現(xiàn)異常情況時，血液、尿液、腦脊液中的β2-MG表達水平也可能發(fā)生變化，其miRNA表達水平也會相應(yīng)改變，因此，尿β2-MG及其miRNA表達水平變化對于診斷和評估多種疾病具有重要意義。有研究發(fā)現(xiàn)，尿β2-MG在慢性腎臟病患者升高的機制可能與腎損傷及排泄功能的下降有關(guān)，且尿β2-MG與尿素、肌酐等直接反應(yīng)腎功能的指標(biāo)關(guān)系密切[5-7]。有文獻報道顯示，β2-MG-miRNA與慢性腎臟病存在一定關(guān)聯(lián)，與miRNA介導(dǎo)的腎毒性物質(zhì)蓄積作用有關(guān)，相關(guān)信號通路包含多個細胞信號通路下游關(guān)鍵的靶基因，從細胞生物學(xué)角度上來說β2-MG-miRNA是一種潛在的與慢性腎臟病發(fā)生有關(guān)的上游信使類因子[8-10]，而具體的作用機制仍有待考證。

另外本研究也發(fā)現(xiàn)，尿β2-MG及其miRNA表達水平不僅與慢性腎臟病的發(fā)生存在關(guān)聯(lián)，同時也和腎功能相關(guān)的諸多指標(biāo)間存在關(guān)聯(lián)，具體表現(xiàn)為慢性腎臟病患者高尿β2-MG組中血肌酐、血尿酸、尿肌酐、尿蛋白的表達水平及內(nèi)生肌酐清除率異常的人數(shù)比例顯著高于低尿β2-MG組，慢性腎臟病患者高尿β2-MG-miRNA組中血尿素氮、血肌酐、血尿酸、尿蛋白的表達水平及內(nèi)生肌酐清除率異常的人數(shù)比例顯著高于低尿β2-MG-miRNA組。在一定程度上解釋了β2-MG及其miRNA表達確實在慢性腎臟病發(fā)生中發(fā)揮了一定作用，可能為信號通路的潛在關(guān)鍵因子之一，一方面其對下游事件的發(fā)生起到控制開關(guān)作用，另一方面也可能同時進行了直接調(diào)控，并且在病情進展階段還有可能存在對信號通路的靶標(biāo)起到一定的反作用，以產(chǎn)生反饋效應(yīng)，故可見尿β2-MG及其miRNA的血清表達在病情不同階段有所不同?；谏鲜靓?-MG及其miRNA的表達特征對于臨床指導(dǎo)慢性腎病診療方案具有科學(xué)價值。