劉蘭椿，何慶勇，陳恒文，傅夢(mèng)薇，周思遠(yuǎn)，王 階＊＊

（1. 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院 北京 100053；2. 北京中醫(yī)藥大學(xué)研究生院 北京 100029）

冠心病血瘀證的現(xiàn)代研究認(rèn)為，血瘀證是血液及其循環(huán)系統(tǒng)形態(tài)與功能異常的綜合體現(xiàn)，主要與微循環(huán)異常、炎癥反應(yīng)和血管內(nèi)皮損傷等有關(guān)。采用蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)技術(shù)可探索冠心病血瘀證狀態(tài)下蛋白質(zhì)的特異時(shí)空表達(dá)，而蛋白質(zhì)的本質(zhì)是基因的相互作用，信使RNA（messenger RNA，mRNA）則是連接基因和蛋白質(zhì)的樞紐?；蚪M學(xué)（Genomics）是闡明整個(gè)基因組的結(jié)構(gòu)、功能以及相互作用的科學(xué)，包括以全基因組測(cè)序?yàn)槟繕?biāo)的結(jié)構(gòu)基因組學(xué)、以基因功能鑒定為目標(biāo)的功能基因組學(xué)、比較已知基因組結(jié)構(gòu)的比較基因組學(xué)。運(yùn)用基因組學(xué)技術(shù)可篩選在冠心病血瘀證中扮演重要角色的基因，作為區(qū)分冠心病血瘀證患者和健康者的生物標(biāo)志物，其介導(dǎo)的生物過程能在一定程度上調(diào)控血瘀證的發(fā)生發(fā)展。基因組學(xué)技術(shù)也為冠心病血瘀證中藥復(fù)方的多靶點(diǎn)調(diào)控提供了依據(jù)，通過藥物靶基因的變化趨勢(shì)可驗(yàn)證冠心病血瘀證治療的效果，更為新藥研發(fā)提供了理論基礎(chǔ)。然而通過對(duì)既往單個(gè)文獻(xiàn)的整理發(fā)現(xiàn)，冠心病血瘀證基因組學(xué)研究的樣本量較少，多項(xiàng)研究指標(biāo)尚缺乏系統(tǒng)性，故這項(xiàng)系統(tǒng)評(píng)價(jià)的目的是：梳理冠心病血瘀證基因組學(xué)的研究進(jìn)展；總結(jié)歸納冠心病血瘀證基因組學(xué)研究的思路方法。

1 資料與方法

1.1 文獻(xiàn)納入與排除

1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn)

該研究的納入標(biāo)準(zhǔn)如下：①受試者同時(shí)符合冠心病和血瘀證診斷標(biāo)準(zhǔn)；②主要結(jié)局指標(biāo)涵蓋基因多態(tài)性位點(diǎn)、差異基因表達(dá)水平、基因甲基化修飾情況。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)

該研究的排除標(biāo)準(zhǔn)如下：①綜述或述評(píng)；②動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；③重復(fù)文獻(xiàn)；④血瘀證合并其他證候或未采取基因組學(xué)技術(shù)。

1.2 文獻(xiàn)檢索

2003年人類基因組計(jì)劃的完成標(biāo)志著醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)和基因組學(xué)進(jìn)入后基因時(shí)代。計(jì)算機(jī)檢索Medline、Cochrane Central Register of Controlled Trials、中國(guó)知網(wǎng)、萬方數(shù)據(jù)庫從2003年1月-2020年1月之間的文獻(xiàn)。在搜索策略中，本研究選擇以下術(shù)語做為主題詞（包括標(biāo)題、摘要、關(guān)鍵詞）：“冠心病”“血瘀證”“基因”“胸痹”“活血化瘀”“Coronary Artery Disease”“Coronary Heart Disease”“Blood Stasis”“Promote Blood Circulation”“Genomics”等（附錄）。

1.3 信息篩選與提取

2 名研究人員（劉蘭椿和傅夢(mèng)薇）獨(dú)立搜索數(shù)據(jù)庫篩選所有檢索記錄的標(biāo)題和摘要，以排除不相關(guān)的研究，通過閱讀全文評(píng)估剩余的研究，任何分歧都是通過協(xié)商一致或通過仲裁者（周思遠(yuǎn)）來解決的。隨后研究人員對(duì)納入的文獻(xiàn)進(jìn)行信息提取，內(nèi)容包括文獻(xiàn)的作者、發(fā)表年份、介導(dǎo)的生物過程、差異基因片段、差異基因表達(dá)的方向、分組資料、基因組學(xué)檢測(cè)技術(shù)分類等。

2 冠心病血瘀證基因組學(xué)研究類型

初步檢索出335 篇相關(guān)文獻(xiàn)，其中包括中國(guó)知網(wǎng)的187 篇、萬網(wǎng)數(shù)據(jù)庫的106 篇、Medline 數(shù)據(jù)庫的12篇、Cochrane Central Register of Controlled Trials 數(shù)據(jù)庫的30篇，利用文獻(xiàn)管理軟件Noteexpress 剔除了重復(fù)的96 篇研究，去重后剩余文獻(xiàn)239 篇。對(duì)剩余文獻(xiàn)閱讀文題和摘要初篩刪除133 篇內(nèi)容不符、主題無關(guān)的文獻(xiàn)，剩余106 篇文獻(xiàn)進(jìn)行閱讀全文復(fù)篩。全文復(fù)篩后排除了72 篇文獻(xiàn)，其中7 篇綜述或述評(píng)、8 篇?jiǎng)游飳?shí)驗(yàn)、32 篇臨床資料重復(fù)、25 篇為血瘀證合并其他證候或未采取基因組學(xué)技術(shù)。清理數(shù)據(jù)后，最終納入定性分析的文獻(xiàn)數(shù)為34篇（表1）。按照研究的類型大致可分為基因多態(tài)性、差異基因的表達(dá)、基因的甲基化修飾3個(gè)方面。

表1 納入研究一般情況特征表

續(xù)表1

2.1 基因多態(tài)性

納入的文獻(xiàn)中共有22 篇由單個(gè)核苷酸位置上存在轉(zhuǎn)換等變異引起的基因多態(tài)性研究[1,4-10,12-16,18,20-21,26,28-32]。主要研究技術(shù)有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、聚合酶鏈-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（Polymerase chain restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）、飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)（Time-of-flight mass spectrometry，TOF-MS）、等位基因特異性探針（如Taqman探針）以及高通量、靈敏度好、特異性高的基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)（Matrixassisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）等方法，加之運(yùn)用相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)分析（Haplotype relative risk，HHRR）和傳遞不平衡（Transmission disequilibrium test，TDT）追溯父母組與病例組的遺傳關(guān)系。研究涵蓋血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（Angiotensin converting enzyme，ACE）基因DD 型、內(nèi)皮型一氧化氮合酶（Endothelial nitric oxide synthase，eNOS）基因G894T 變異、細(xì)胞色素P2C19（CytochromeP 2C19，CYP2C19*2）基因多態(tài)性、血管性血友病因子（Von willebrand factor，vWF）基因M-M-型、凝血因子Ⅶ（Coagulation factor Ⅶ，F(xiàn)Ⅶ）基因M1/M1 型、血漿纖維蛋白原Bβ（FibrinogenBβ，F(xiàn)gBβ）基因C/T 多態(tài)性、載脂蛋白E（Apolipoprotein E，ApoE）基因E3/E4 多態(tài)性、ATP 結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1（ATP-binding cassette transporter A1，ABCA1）基 因R219K 多 態(tài) 性、白 細(xì) 胞 介 素-8（Interleukin-8，IL-8）基因A/T 多態(tài)性、亞甲基四氫葉酸 還 原 酶（Methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）基因C677T 多態(tài)性、基質(zhì)金屬蛋白酶-3（Matrix metalloproteinase-3，MMP-3）基因5A/5A 多態(tài)性等，以上基因的多態(tài)性均與冠心病血瘀證具有相關(guān)性。

2.2 差異基因的表達(dá)

共有8 篇分析差異基因表達(dá)信息的研究[2-3,11,17,22-25]，主要采用mRNA 差異顯示，cDNA 微陣列，實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR 對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行定量分析，或用Affymetrix 基因芯片進(jìn)行雜交測(cè)序等技術(shù)研究細(xì)胞編碼基因的調(diào)控規(guī)律，以闡明生物體在特定生理或病理狀態(tài)下表達(dá)的所有種類的mRNA 及其功能。已有多個(gè)研究發(fā)現(xiàn)冠心病血瘀證患者的基因表達(dá)程度與健康對(duì)照組存在一定程度的差異，從得到的差異基因表達(dá)的功能可以看出，它們從不同途徑導(dǎo)致和參與了冠心病血瘀證內(nèi)皮損傷、細(xì)胞凋亡、血小板聚集、血液高凝態(tài)、脂代謝、膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)、炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)、血管平滑肌增殖過程。

2.3 基因的甲基化修飾

結(jié)合血瘀證病理機(jī)制以及參考基因啟動(dòng)子CpG島的注釋情況，選擇性檢測(cè)甲基化水平是目前血證DNA 甲基化的主要研究方法，DNA 的甲基化修飾屬于表觀基因組學(xué)范疇，指通過DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methylation transferase，DNMT）的作用，在5′-CpG-3′的第5個(gè)碳原子上合成甲基。目前多采用重亞硫酸鹽測(cè)序方法（Bisufite sequence PCR，BSP）、甲基化特異性PCR（MS-PCR）技術(shù)或Infinium Human Methylation450 BeadArray 高通量芯片等技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，最終根據(jù)CpGs 的甲基化或非甲基化DNA 狀態(tài)，確立發(fā)生甲基化DNA 的分子以及與基因轉(zhuǎn)錄的作用。對(duì)于冠心病血瘀證這一冠心病中最重要的證型，甲基化起到了重要的作用[19,25,27,33-34]，包括影響血管平滑肌增殖的Kruppel 樣 因 子5（Kruppel-like factor 5，KLF5）、LRP12、ER-α和AGTRAP 基因甲基化水平，影響脂代謝水平的DES、CTNNB1、ZEB2 基因甲基化水平，影響血小板聚集的Gp6 基因甲基化，影響炎癥反應(yīng)的IL-6基因-1118 bp至-826 bp的CpG位點(diǎn)甲基化等。

3 涉及的生物學(xué)功能

3.1 血管內(nèi)皮損傷

多項(xiàng)圍繞血管內(nèi)皮損傷的研究均與ACE 基因多態(tài)性有關(guān)[1,4-7,10,12]，ACE 基因DD 型為早發(fā)冠心?。行浴?5，女性≤65）血瘀證發(fā)病的易感基因[7]，與遺傳因素?zé)o關(guān)[5]，可能通過調(diào)控人體血管內(nèi)皮功能而影響冠心?。–oronary heart disease，CHD）臨床表現(xiàn)的形成，導(dǎo)致血管緊張素Ⅱ（AgⅡ）、內(nèi)皮素/一氧化氮（ET/NO）水平上升[1,4]，且其表達(dá)顯著高于非冠心病血瘀證的患者，這提示了此基因型可能為冠心病血瘀證的特異基因，而并非只與血瘀證證候有關(guān)[4]。DD 型患者存在多支冠脈病變的概率較大，病情較為嚴(yán)重[6]，植入支架數(shù)更多[12]，除此之外，ACE 的外顯子17 基因片段rs4343（G2350A）多態(tài)性也可能是早發(fā)冠心病的危險(xiǎn)因素之一[10]。eNOS 于血管內(nèi)產(chǎn)生一氧化氮及協(xié)助調(diào)節(jié)血管功能，有研究運(yùn)用TOF-MS技術(shù)發(fā)現(xiàn)eNOS基因G894T型是早發(fā)冠心病發(fā)病的危險(xiǎn)因素之一[8]，這與李建軍[6]運(yùn)用PCR 得出的結(jié)論相矛盾，可能與基因組技術(shù)的不同有關(guān)。香丹注射液能調(diào)節(jié)eNOS 和內(nèi)皮素ET-1的mRNA表達(dá)，從而改善冠心病血瘀證患者血管內(nèi)皮功能[2]。復(fù)方丹參滴丸可通過使細(xì)胞凋亡相關(guān)基因BCLF1 mRNA、Bax mRNA 表達(dá)顯著減弱，抑制血管內(nèi)皮反應(yīng)引起的損傷，對(duì)冠心病血瘀證發(fā)揮治療保護(hù)作用[11]。另有研究表明，作用于血管內(nèi)皮、引起內(nèi)皮損傷 的SLAMF1、CABARA1、ZNF350 基 因[3]及FGF2 基因[24]在冠心病血瘀證組顯著表達(dá)。雖然研究表明MEF2A 基因是冠心病的致病基因[35]，研究發(fā)現(xiàn)其多態(tài)性并不是冠心病血瘀證型的易感基因位點(diǎn)，但受限于納入研究的數(shù)量，尚不能得出肯定結(jié)論[9]。

3.2 血液流變學(xué)改變

冠心病血瘀證血液流變學(xué)的改變?cè)诨驅(qū)用婢畜w現(xiàn)[13-21]，研究發(fā)現(xiàn)冠心病血瘀證與凝血因子Ⅶ（FⅦc）M1/M1 基因型具有相關(guān)性[13]，M1/M2 多態(tài)性也與冠心病血瘀證存在關(guān)聯(lián)，但與疾病基因座不存在連鎖，不是遺傳易患基因[16]。Taqman 探針檢測(cè)發(fā)現(xiàn)血小板膜糖蛋白GPⅡb-Ⅲa 多態(tài)性不是冠心病血瘀證的敏感指標(biāo)，但冠心病血瘀證組的GPⅡb-Ⅲa 活性水平存在顯著性差異，所以并不排除編碼血小板膜糖蛋白的基因中存在其他可能影響其活性表達(dá)的多態(tài)位點(diǎn)[14]。在臨床療效方面，給予含有至少一個(gè)GPⅡb 突變型基因C 的冠心病血瘀證患者血府逐瘀口服液后，發(fā)現(xiàn)比AA 型患者在紅細(xì)胞變形指數(shù)、血瘀證計(jì)分有明顯差異，血液流變學(xué)方面療效更好，但由于納入患者例數(shù)較少，結(jié)論仍需檢驗(yàn)[15]。從預(yù)后而言，PCI 術(shù)后重度血瘀證患者更易出現(xiàn)CYP2C19*2 基因（GA+AA）突變[18]，隨后更有研究統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)GA基因型其支架內(nèi)血栓形成、心肌梗死等不良反應(yīng)的出現(xiàn)較AA型多[21]。另有研究表明血管性血友病因子vWF 基因M-M-基因多態(tài)性可促進(jìn)血小板黏附形成血栓，纖維蛋白原Bβ鏈FgBβ基因啟動(dòng)區(qū)多態(tài)性可升高Fg 而使血液處于血栓前高凝狀態(tài)，影響血管壁的切流速度，加速冠心病血瘀證的血栓形成[20]。GP6 基因在焦磷酸測(cè)序的實(shí)驗(yàn)中顯示其甲基化水平顯著升高，尤其在早發(fā)冠心病血瘀證患者的外周血液當(dāng)中，提示其甲基化狀態(tài)可能和早發(fā)冠心病血瘀證的發(fā)生具有相關(guān)性[19]。有研究者根據(jù)瓜蔞薤白半夏湯治療前后血液黏度的結(jié)果，設(shè)計(jì)制備了“病證結(jié)合”“以藥測(cè)證”芯片，在兩張芯片中篩選出了共同差異表達(dá)的血液流變學(xué)的4個(gè)相關(guān)基因[17]。

3.3 炎癥反應(yīng)與免疫調(diào)節(jié)

白細(xì)胞介素是一種重要的炎性細(xì)胞趨化因子，其多態(tài)性在冠心病中發(fā)揮重要角色[36]，IL-8 基因-251 區(qū)的AT 基因型被認(rèn)為可增加家族聚集性冠心病血瘀證的易感性[26]。白細(xì)胞介素基因的甲基化程度也影響著冠心病血瘀證的形成，已有研究表明血瘀證患者IL-6轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)前-1118 bp 至-826 bp 序列中7 個(gè)位點(diǎn)CpG 位點(diǎn)甲基化程度高于非血瘀證組，但差異尚不明顯[27]。另有多個(gè)研究均表明IL-8 或IL-6 基因的差異表達(dá)水平均在冠心病血瘀證組上調(diào)，進(jìn)而介導(dǎo)炎癥反應(yīng)[22,24-25]。除炎癥反應(yīng)外，免疫調(diào)節(jié)在冠心病血瘀證患者中差異表達(dá)，有研究通過基因芯片分析冠心病血瘀證患者的外周血白細(xì)胞，得到48 個(gè)差異基因，富集了10條通路，其中有5個(gè)涉及炎癥和免疫反應(yīng)，說明了免疫反應(yīng)介導(dǎo)血瘀證的發(fā)生發(fā)展的比例和顯著性優(yōu)勢(shì)[22]。另有研究發(fā)現(xiàn)，免疫相關(guān)蛋白激酶Cβ1（PKCβ1）、免疫球蛋白IgG 結(jié)晶片段受體ⅢA（FcγRⅢA）的mRNA 表達(dá)在冠心病血瘀證患者中也均有顯著差異[23]。

3.4 血管平滑肌增殖

有研究運(yùn)用焦硫酸測(cè)序技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)α雌激素受體（Estrogen Receptor-α，ER-α）、AGTRAP 基因啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化狀態(tài)與冠心病血瘀證血管平滑肌增殖密切相關(guān)[19]，可能通過調(diào)節(jié)血管平滑?。╒ascular smooth muscle cells，VSMC）的增殖影響動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展，同理運(yùn)用MS-PCR 發(fā)現(xiàn)冠心病血瘀證患者的KLF5、低密度脂蛋白相關(guān)蛋白12（Low density lipoproteinrelated protein12，LRP12）基因啟動(dòng)子的甲基化水平較健康人低[25]。MMP-3-1171 區(qū)的5A/6A 基因型及5A 等位基因可使血管平滑肌細(xì)胞凋亡進(jìn)而影響動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和穩(wěn)定，從一定角度揭示了增加血瘀證發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的原因[29]。5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）作為血同型半胱氨酸Hcy 代謝途徑中的一種關(guān)鍵酶[37]，其活性降低可引起Hcy 水平升高，刺激血管平滑肌細(xì)胞增生，最終導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化，增加冠心病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。研究發(fā)現(xiàn)MTHFR 基因C677T 多態(tài)性與胸痹心血瘀阻證和血Hcy 水平均有相關(guān)性，可導(dǎo)致MTHFR 活性降低，且CC 基因型更傾向于在心血瘀阻證中表達(dá)[30]。G 蛋白β3 亞單位基因（GNB3）介導(dǎo)許多刺激血管增生效應(yīng)，細(xì)胞外血管活性多肽、生長(zhǎng)因子均通過激活血管平滑肌細(xì)胞膜上的G 蛋白，控制血管平滑肌細(xì)胞的舒縮、合成、分泌、分化、遷移和增生等功能。研究表明，GNB3基因825T等位基因攜帶不僅是誘發(fā)冠心病血瘀證的因素之一，而且可能提示預(yù)后不良，體現(xiàn)為加減血府逐瘀湯對(duì)GNB3基因825T等位基因攜帶人群療效較差[28]。

3.5 血脂水平

許多基因可通過影響血脂水平進(jìn)而與冠心病相關(guān)。載脂蛋白E（ApoE）有E2、E3、E4 三種主要的異構(gòu)體，分別受ε2、ε3、ε4 三個(gè)等位基因編碼，研究發(fā)現(xiàn)ApoE 的E3/E4 基因型和ε4 等位基因與冠心病血瘀證有相關(guān)性，且可影響血脂水平[31]。ATP 結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子ABCA1 在膽固醇從周圍細(xì)胞流出和HDL 生成的起始步驟中起著重要的作用，被認(rèn)為是HDL-C代謝的限速因子，李杰等利用MALDI-TOF-MS 技術(shù)發(fā)現(xiàn)ABCA1基因219位點(diǎn)的R219K多態(tài)性在早發(fā)冠心病和健康人群差異有顯著性[32]。補(bǔ)體系統(tǒng)C3、基質(zhì)金屬蛋白MMP-9 基因的表達(dá)也可通過影響血脂與家系冠心病血瘀證斑塊形成相關(guān)[24]。另有研究運(yùn)用高通量芯片技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)DES、CTNNB1、ZEB2 基因的甲基化修飾可能是冠心病血瘀證的易感危險(xiǎn)因素，且具有上述基因甲基化的患者血脂水平較高，加減養(yǎng)心通脈方對(duì)冠心病血瘀證DES、CTNNB1、ZEB2 三個(gè)易感基因甲基化的修飾及對(duì)血脂水平均有調(diào)控作用[33-34]。

4 討論

4.1 冠心病血瘀證基因組學(xué)的研究思路

根據(jù)納入文獻(xiàn)的一般情況特征，可總結(jié)冠心病血瘀證基因組學(xué)的研究思路包括：臨床選擇一定數(shù)量的冠心病血瘀證患者作為試驗(yàn)組并設(shè)置合理的對(duì)照組，隨后根據(jù)基因多態(tài)性、差異基因表達(dá)、基因甲基化修飾3 個(gè)基因組學(xué)研究類型的不同，運(yùn)用PCR 技術(shù)、TOF-MS技術(shù)、Taqman探針、Affymetrix 基因芯片、重亞硫酸鹽純化等基因組學(xué)檢測(cè)方法，進(jìn)行冠心病血瘀證相關(guān)基因的篩查和驗(yàn)證，尋找差異基因片段并進(jìn)行生物信息學(xué)分析，研究基因組結(jié)構(gòu)及基因之間相互作用，探討其與冠心病血瘀證病理改變的相關(guān)性（圖1）。在上述研究思路的基礎(chǔ)上運(yùn)用活血化瘀中藥進(jìn)行干預(yù)治療，可明晰方藥對(duì)冠心病血瘀證發(fā)揮治療保護(hù)作用的基因組學(xué)機(jī)制，辨析方藥對(duì)何種基因型的冠心病血瘀證患者療效較好。

4.2 冠心病血瘀證生物學(xué)功能及調(diào)控基因總結(jié)

冠心病血瘀證是血液及其循環(huán)系統(tǒng)形態(tài)與功能異常的綜合體現(xiàn)，主要與血管內(nèi)皮損傷、微循環(huán)異常和炎癥反應(yīng)等有關(guān)。其中血管內(nèi)皮損傷主要與ACE、eNOS 以及ET-1、BCLF1、Bax、SLAMF1 凋亡類基因的表達(dá)有關(guān)；血液流變學(xué)改變與FⅦc、FgBβ凝血類基因的表達(dá)，GPⅡb-Ⅲa、CYP2C19*2、vWF 血小板相關(guān)基因的表達(dá)，GP6 基因的甲基化狀態(tài)有關(guān)；IL-8 基因多態(tài)性、IL-6 甲基化程度在冠心病血瘀證患者的炎癥反應(yīng)中也均有顯著差異，PKCβ1、FcγRⅢA的mRNA 表達(dá)均介導(dǎo)了冠心病血瘀證的免疫反應(yīng)；ER-α、AGTRAP、KLF5、LRP12 甲基化狀態(tài)，MMP-3、MTHFR、GNB3 基因多態(tài)性均可調(diào)節(jié)血管平滑?。╒SMC）的增殖影響冠心病血瘀證動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展；ApoE、ABCA1 多態(tài)性，補(bǔ)體C3、MMP-9 基因的表達(dá)，DES、CTNNB1、ZEB2基因的甲基化修飾均對(duì)冠心病血瘀證患者的血脂水平有特異性調(diào)控作用。

4.3 不足與展望

圖1 冠心病血瘀證基因組學(xué)的研究思路

冠心病血瘀證在基因多態(tài)性、差異基因表達(dá)、基因甲基化修飾方面均有較多研究，本系統(tǒng)綜述歸納了冠心病血瘀證研究所涉及的基因組學(xué)技術(shù)、生物學(xué)過程及相應(yīng)的代表基因。追溯原始文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，使用基因芯片測(cè)序的樣本量普遍較少，其準(zhǔn)確性仍需檢驗(yàn)，雖然研究中納入患者的基礎(chǔ)條件不完全相同，但基線大致相平，具有可比性。展望未來，考慮到冠心病血瘀證的病理學(xué)表現(xiàn)并不是單個(gè)基因錯(cuò)誤表達(dá)的結(jié)果，而是由多基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)紊亂導(dǎo)致的生物學(xué)功能改變，一個(gè)基因的上調(diào)或下調(diào)會(huì)影響上下游基因的表達(dá)狀態(tài)，因此要求我們對(duì)已有文獻(xiàn)支撐的多個(gè)基因進(jìn)行綜合性的、網(wǎng)絡(luò)性的“聯(lián)合基因型分析”工作?？蓪?duì)文獻(xiàn)中的相關(guān)基因運(yùn)用CYTOSCAPE 進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，MCODE進(jìn)行模塊劃分后再對(duì)重要模塊進(jìn)行功能與通路分析[38]。例如兩個(gè)基因是各自模塊的重要組成基因，同時(shí)又聯(lián)系于其他模塊，并與外部模塊的通路、基因或功能相關(guān)聯(lián)，該研究方法既體現(xiàn)了冠心病血瘀證基因的整體特點(diǎn)，又關(guān)注了基因網(wǎng)絡(luò)的局部差異，探索冠心病血瘀證不同亞型的特異基因或成為未來冠心病血瘀證基因組學(xué)深入研究的方向，可為冠心病“病證結(jié)合”的預(yù)防與治療提供新的思路。

附錄

知網(wǎng)：SU =（‘冠心病’+‘胸痹’）*（‘血瘀證’+‘活血化瘀’）*（‘基因’+‘多態(tài)性’）187

萬方：題名或關(guān)鍵詞:(冠心病+胸痹)*題名或關(guān)鍵詞:（血瘀證+活血化瘀）*題名或關(guān)鍵詞:（基因+多態(tài)性）106

Medline: 12

Cochrane Central Register of Controlled Trials: 30

續(xù)表