王琿

摘要：隨著科技水平的不斷提高，越來(lái)越多的人開始重視真菌檢驗(yàn)方面的相關(guān)技術(shù)。現(xiàn)階段，相關(guān)人員主要使用三種方式對(duì)單一的真菌進(jìn)行檢測(cè)：薄層層析法以及高效液相色譜法還有酶聯(lián)免疫吸附法等。這篇文章主要對(duì)真菌的檢測(cè)進(jìn)行了仔細(xì)的討論，簡(jiǎn)單的講述了一下近些年專業(yè)人士在這方面的新技術(shù)以及新動(dòng)態(tài)。對(duì)有關(guān)真菌毒素方面的檢測(cè)指明了方向，為食品安全行業(yè)提供了參考性依據(jù)。

關(guān)鍵詞：真菌毒素;快速檢測(cè);多組分檢測(cè)

前言：

真菌毒素屬于真菌的代謝性產(chǎn)物，嚴(yán)格意義上來(lái)說(shuō)與真菌的生長(zhǎng)發(fā)育都沒(méi)有太大關(guān)系。多數(shù)人認(rèn)為所有的代謝性產(chǎn)物都有毒，這個(gè)觀點(diǎn)是不正確的。真菌屬于一個(gè)異類，即可以一對(duì)多，也可以多對(duì)一。用通俗的話來(lái)講就是同一種真菌可以產(chǎn)生很多種的毒素，但是也有可能很多種真菌只產(chǎn)生一種毒素。每一個(gè)硬幣都有兩面，有很多真菌的毒素危害很大，比如說(shuō)：黃曲霉毒素以及伏馬毒素還有麥角類的生物堿。據(jù)實(shí)驗(yàn)證明，在天然形成的物質(zhì)中黃曲霉毒素的致癌性是最強(qiáng)的。在農(nóng)產(chǎn)品中最容易被污染的毒素也是黃曲霉毒素。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，全世界每一年受黃曲霉毒素污染的谷物有25%。這些谷物雖然不會(huì)直接流入我們的餐桌，但是這些谷物會(huì)被作為飼料喂養(yǎng)動(dòng)物，間接性的流入我們的餐桌，使我們有致癌的危險(xiǎn)。為此，我們需要對(duì)真菌的毒素進(jìn)行測(cè)驗(yàn)，保證我們的健康。

1真菌毒素常規(guī)檢測(cè)技術(shù)

隨著科技不斷的發(fā)展，有關(guān)真菌毒素方面的檢驗(yàn)方法越來(lái)越多，主要包括以下三點(diǎn)：薄層層析法以及高效液相色譜法還有酶聯(lián)免疫吸附法、培養(yǎng)檢查法等，這些檢查方式主要針對(duì)單一真菌。

1.1薄層層析法

薄層層析法這種方式早在1960年的時(shí)候就已經(jīng)發(fā)展起來(lái)了，它屬于一種平面的色譜技術(shù)。薄層層析法主要用于分辨不一樣的樣品，這種方式是通過(guò)有機(jī)的溶劑將真菌中的毒素進(jìn)行提取，經(jīng)過(guò)精準(zhǔn)的溶劑純化之后將真菌進(jìn)行層析以及分離。部分真菌的毒性與普通的真菌不同，它具有熒光的特殊性質(zhì)，需要先與標(biāo)準(zhǔn)的物質(zhì)進(jìn)行定量后才能進(jìn)行下一步操作。我國(guó)將薄層層析法這種方法作為實(shí)驗(yàn)中的第一方法的原因有很多，舉例說(shuō)明：薄層層析法以經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，對(duì)有關(guān)人員的操作水平低等特點(diǎn)廣受喜愛(ài)。薄層層析法具有非常高的精準(zhǔn)度還有分離的效率，兩者隨著掃描儀的發(fā)展進(jìn)一步提高。所以，在很多的歐美國(guó)家薄層層析法這種檢驗(yàn)方法都是檢驗(yàn)熒光毒物的主要方法。

1.2酶聯(lián)免疫吸附法

檢驗(yàn)單一真菌還可以使用酶聯(lián)免疫吸附法。到目前為止，酶聯(lián)的免疫吸附這種方法已經(jīng)發(fā)展到比較成熟的階段。酶聯(lián)免疫吸附法這種方式屬于以免疫酶為基礎(chǔ)的創(chuàng)新型檢驗(yàn)技術(shù)。這種檢驗(yàn)方法有很多的優(yōu)點(diǎn)：首先，酶聯(lián)免疫吸附法較其他的檢驗(yàn)方法來(lái)說(shuō)靈敏、對(duì)于工作人員來(lái)說(shuō)操作簡(jiǎn)單易上手。在實(shí)驗(yàn)中使用酶聯(lián)免疫吸附法之前，只需要將樣品進(jìn)行小限度的凈化、就可以得到大量的處理樣品。除此之外，酶聯(lián)免疫吸附法還具有很高的特異性，只可以進(jìn)行單一的檢測(cè)。所以，使用酶聯(lián)免疫吸附法時(shí)可以在一定程度上提高物質(zhì)回收率、增強(qiáng)其敏感度，最大限度的減少實(shí)驗(yàn)中的干擾因素。使實(shí)驗(yàn)中的分析程序可以盡可能的簡(jiǎn)化，進(jìn)一步降低成本。我們相信，如果解決的上述問(wèn)題，酶聯(lián)免疫吸附這種方法一定會(huì)再上一個(gè)臺(tái)階。有關(guān)人員根據(jù)國(guó)家的標(biāo)準(zhǔn)將酶聯(lián)免疫吸附法作為實(shí)驗(yàn)中的第二方法。這種方法在很多國(guó)家已經(jīng)廣泛的運(yùn)用，有關(guān)人員可以使用這項(xiàng)技術(shù)對(duì)糧油等食品進(jìn)行專業(yè)的真菌毒素測(cè)驗(yàn)，保證我們的飲食健康。

1.3高效液相色譜法

有關(guān)人員在分析真菌毒素的過(guò)程中，經(jīng)常使用高效液相色譜法。高效液相色譜法不僅僅可以對(duì)于有關(guān)的毒素進(jìn)行定性，還可以在此基礎(chǔ)上對(duì)其進(jìn)行定量還有確證從測(cè)定真菌的毒素。在高效液相色譜法中，反相液相色譜是應(yīng)用最廣泛的。鑒于每一種真菌的性質(zhì)都不相同，實(shí)驗(yàn)中還會(huì)有溫度以及濕度等很多的干擾因素對(duì)其進(jìn)行制約。所以，我們?cè)趯?duì)其進(jìn)行分析時(shí)需要根據(jù)實(shí)際情況綜合性的考慮，充分分析流動(dòng)相以及色譜柱還有柱溫檢測(cè)器等條件，從而找到最合適的配比。對(duì)于一些自身發(fā)光的毒素我們可以直接進(jìn)行HPLC分析，自身不帶有熒光的毒素我們需要對(duì)其進(jìn)行柱前以及柱后的衍生還有改變真菌流動(dòng)用來(lái)增加真菌的熒光信號(hào)，方便檢測(cè)。

到目前為止，我國(guó)已經(jīng)建立了有關(guān)黃曲霉毒素以及赭曲霉毒素還有伏馬毒素等真菌毒素的免疫親和標(biāo)準(zhǔn)還有凈化標(biāo)準(zhǔn)。上述兩種測(cè)定方式都屬于國(guó)際上比較常用的方式。隨著科技的不斷發(fā)展，在這些測(cè)定方式的基礎(chǔ)上對(duì)其進(jìn)行了一定的改進(jìn)。舉例說(shuō)明：高效的薄層色譜固定相更改為改性硅膠還有纖維素。他們具有更細(xì)以及更均勻的優(yōu)點(diǎn)。改變吸附劑的疏水以及親水性質(zhì)?？梢猿醪綄?shí)現(xiàn)色譜的正相與反相分離，從而進(jìn)一步的提高選擇性。這種方式還可以與其他的檢驗(yàn)方式聯(lián)合使用，使化合物測(cè)定的更加準(zhǔn)確。舉例說(shuō)明：薄層色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等方式。對(duì)于單孢化合物的測(cè)量來(lái)說(shuō)，可以使用氣相色譜法。會(huì)用這種可以輕易的將羥基作為基礎(chǔ)進(jìn)行衍生，從而一定程度上增加其揮發(fā)性以及靈敏度。

1.4培養(yǎng)檢查法

大培養(yǎng)還有小培養(yǎng)都屬于培養(yǎng)檢查的方法。舉例說(shuō)明：專業(yè)人員在對(duì)血液以及骨髓還有胸腹水等無(wú)菌部位的體液進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)選用大培養(yǎng)的方法。在對(duì)痰以及膿液還有組織等部位進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)選用小培養(yǎng)的方法。據(jù)報(bào)道，法國(guó)某專家在對(duì)念珠菌進(jìn)行顯色培養(yǎng)時(shí)，與普通的沙保弱培養(yǎng)基進(jìn)行仔細(xì)的對(duì)比發(fā)現(xiàn)，他們分離酵母的真菌陽(yáng)性是相同的，抑菌性比起其他真菌來(lái)說(shuō)，它對(duì)細(xì)菌的抑制效果更強(qiáng)，檢驗(yàn)的時(shí)間更短，可以準(zhǔn)確檢驗(yàn)出其中是否存在混合感染。我們?cè)趯?duì)其進(jìn)行鑒定的時(shí)候，也會(huì)面臨很多問(wèn)題，舉例說(shuō)明：臨床工作人員與實(shí)驗(yàn)室的工作人員不能進(jìn)行及時(shí)的共同交流，不能夠準(zhǔn)確的將結(jié)果做出正確的判斷。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，有很多的程序不合理，缺乏統(tǒng)一性，沒(méi)有任何的標(biāo)準(zhǔn)化可言。少數(shù)的工作人員不能夠正視形態(tài)學(xué)的重要性，僅僅追求表面技術(shù)，不能根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行觀察。如果上述的問(wèn)題不能夠進(jìn)行一步改善，會(huì)在一定程度上影響臨床研究。

2真菌毒素快速篩選檢測(cè)技術(shù)

為了我們的生命健康以及食品安全。有關(guān)方面的檢測(cè)技術(shù)需要更加的實(shí)行“四省政策”即準(zhǔn)確以及省時(shí)省力還有省成本。這些問(wèn)題不僅僅是政府的有關(guān)管理部門以及生產(chǎn)食品的企業(yè)所要求的，更是有關(guān)銷售甚至國(guó)家安全監(jiān)管部門所制約的。由此見(jiàn)得，我國(guó)應(yīng)該建立一個(gè)簡(jiǎn)單方便，成本低，效果顯著的檢驗(yàn)方式。在最近幾年，對(duì)于真菌毒素的檢測(cè)方式在兩個(gè)方面有重大進(jìn)展。其一是有關(guān)免疫膠體方面的金層析技術(shù)，其二是有關(guān)近紅外方面的無(wú)損傷檢測(cè)技術(shù)。

2.1免疫膠體金層析技術(shù)

早在1980年的時(shí)候膠體金就已經(jīng)被研究人員進(jìn)行有關(guān)免疫學(xué)方面的檢測(cè)了，這種技術(shù)是以膠體金最示蹤標(biāo)記物進(jìn)行特異性的抗原抗體反應(yīng)。在1990年的時(shí)候，有關(guān)免疫膠體方面的金層被用于單克隆的抗體技術(shù)以及膠體金方面的免疫層析技術(shù)還有新材料方面的技術(shù)。近些年來(lái)，隨著科技的不斷發(fā)展，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)在臨床中被廣泛的使用。醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)是將部分特異性的抗原抗體固定在醋酸的纖維素膜上。使用膠體金化學(xué)試劑可以將其牢牢的吸附于結(jié)合墊。將試品以同樣的方式加到樣品墊上，通過(guò)其自身的毛細(xì)作用向前移動(dòng)。使結(jié)合墊上面標(biāo)記的膠體金化學(xué)試劑溶解，與之作用。移動(dòng)到抗原抗體固定的區(qū)域，使待測(cè)物與金標(biāo)的復(fù)合物特異性的結(jié)合，截留并聚集到相關(guān)的檢測(cè)帶上，使實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可以很清晰的觀察到。

2.2近紅外檢測(cè)技術(shù)

在真菌毒性的檢驗(yàn)過(guò)程中近紅外技術(shù)也很常見(jiàn)。近紅外是一種波長(zhǎng)為700到2500納米之間的電磁波。紅外線的光譜以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)廣受喜愛(ài)。它可以快速的對(duì)其進(jìn)行分析，具有高效率、低成本、使用方便的特點(diǎn)。在很過(guò)歐美國(guó)家，紅外線技術(shù)也被列入到標(biāo)準(zhǔn)方式中。

結(jié)束語(yǔ)

隨著科技的不斷發(fā)展，有關(guān)專業(yè)人士對(duì)真菌毒素的測(cè)評(píng)工作研究的更加深入，致力于探討速度快、成本低、高效率的檢測(cè)技術(shù)。薄層層析法以經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，對(duì)有關(guān)人員的操作水平低等特點(diǎn)廣受喜愛(ài)。酶聯(lián)免疫吸附法較其他的檢驗(yàn)方法來(lái)說(shuō)靈敏、對(duì)于工作人員來(lái)說(shuō)操作簡(jiǎn)單易上手。高效液相色譜法可以初步實(shí)現(xiàn)色譜的正相與反相分離，從而進(jìn)一步的提高選擇性，與其他的檢驗(yàn)方式聯(lián)合使用時(shí)可以使化合物測(cè)定的更加準(zhǔn)確。免疫膠體金層析技術(shù)還有近紅外檢測(cè)技術(shù)比起常規(guī)的方法更加的簡(jiǎn)單方便，成本更加低廉，效果更加顯著。我們相信通過(guò)有關(guān)人員的不斷努力，檢測(cè)技術(shù)可以走上一個(gè)新的臺(tái)階，開啟檢測(cè)技術(shù)的新紀(jì)元。

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