王佳茵，李 波，吉尚雷，*

（1.遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，遼寧 營口 115009；2.盤錦市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展中心，遼寧 盤錦 124000）

豬圓環(huán)病毒病是由豬圓環(huán)病毒引起豬的一種免疫抑制疾病，表現(xiàn)為豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）和皮炎腎病綜合征（PDNS），引起母豬繁殖障礙[1]。圓環(huán)病毒會(huì)破壞機(jī)體的免疫系統(tǒng)，出現(xiàn)嚴(yán)重的消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)癥狀，病豬腹瀉、呼吸困難、逐漸消瘦，因免疫抑制而導(dǎo)致疫苗接種失敗進(jìn)而繼發(fā)細(xì)菌感染。鏈球菌是一種有35種血清型能夠引起人畜共患的致病菌，如果豬圓環(huán)病毒病繼發(fā)感染鏈球菌，將給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失，影響?zhàn)B豬業(yè)的健康發(fā)展[2]。

1 發(fā)病情況

遼寧地區(qū)某中等規(guī)模豬場，7～8日齡仔豬有咳嗽癥狀，斷奶仔豬逐漸消瘦。母豬有咳嗽病史，但已好轉(zhuǎn)，受胎率100%，產(chǎn)仔率較好，保育發(fā)病10%。免疫情況：14日齡免疫豬繁殖與呼吸綜合征疫苗，21日齡免疫豬瘟疫苗，25日齡免疫豬偽狂犬病疫苗，30日齡免疫豬圓環(huán)病疫苗。2019年4月到遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院遼寧動(dòng)物健康養(yǎng)殖研究中心就診。

2 臨床癥狀

保育豬會(huì)出精神沉郁、食欲下降、體溫升高、呼吸困難。一般雙側(cè)震顫，睡眠時(shí)癥狀緩解，部分嚴(yán)重者會(huì)引起死亡，母豬無明顯癥狀。

3 剖檢及病理變化

剖檢送檢50 d左右病死豬2頭，肺組織呈彌漫性間質(zhì)性肺炎，肺腫脹、變硬，肺邊緣出現(xiàn)彌漫性出血，腹股溝淋巴結(jié)腫大，眼瞼水腫。剖檢可見淋巴結(jié)腫大，觀察到腸系膜淋巴結(jié)水腫，見圖1。

圖1 剖檢病變

4 診斷

4.1 臨床診斷

通過對(duì)豬場生產(chǎn)情況、免疫程序、發(fā)病情況、臨床癥狀和剖檢變化的分析，初步判斷該豬場感染圓環(huán)病毒并激發(fā)感染沙門氏菌。

4.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.2.1 病原檢測(cè)

無菌采取患病仔豬病變明顯的淋巴結(jié)，腎、肺，扁桃體和脾等組織進(jìn)行低溫研磨，將上述病料采用OMEGA試劑盒提取總DNA，根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫已經(jīng)發(fā)表的圓環(huán)病毒基因保守序列設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增。將獲得樣品按照電壓120 v、100mA條件電泳30min。

在紫外燈下觀察電泳結(jié)果，結(jié)果顯示樣品在750 bp位置處有明顯條帶，與圓環(huán)病毒陽性對(duì)照孔位置一致（見圖2），所以初步判定為圓環(huán)Ⅱ型病毒陽性，說明發(fā)病豬體內(nèi)存在圓環(huán)病毒。

圖2 豬圓環(huán)病毒PCR檢測(cè)結(jié)果

4.2.2 鏈球菌分離培養(yǎng)

無菌操作采取未被污染的病料組織，在麥康凱瓊脂、普通營養(yǎng)瓊脂、血瓊脂和HE瓊脂平板上進(jìn)行劃線分離，在37℃恒溫培培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h[3]。培養(yǎng)后在血瓊脂培養(yǎng)基可見大量溶血環(huán)的菌落。涂片染色鏡檢可見球形或卵圓形，多數(shù)呈鏈狀排列的革蘭氏陽性菌，初步判定為鏈球菌，見圖3。

圖3 細(xì)菌分離培養(yǎng)

4.2.3 藥物敏感試驗(yàn)

用30種標(biāo)準(zhǔn)抗生素對(duì)分離的鏈球菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，按照抑菌圈直徑＜10 mm為耐藥，抑菌圈直徑10～15 mm為中度敏感，抑菌圈＞15 mm為高度敏感。結(jié)果顯示該菌株對(duì)頭孢他啶、頭孢曲松鈉和哌拉西林高度敏感，對(duì)青霉素、阿莫西林、紅霉素、慶大霉素和土霉素等6種抗生素產(chǎn)生耐藥性。

5 結(jié)論

綜上所述，本案例根據(jù)臨床癥狀、剖檢變化和實(shí)驗(yàn)室診斷，可以診斷為豬圓環(huán)病毒與鏈球菌并發(fā)感染。

6 小結(jié)

目前，圓環(huán)病毒病尚無特效的治療藥物，通常采取綜合治療方法[3]。且往往容易繼發(fā)鏈球菌等細(xì)菌性疾病加重病情，因此，預(yù)防是關(guān)鍵，做好免疫接種，健康豬要接種PCV2滅活疫苗，要定期進(jìn)行抗體水平監(jiān)測(cè)，保證免疫效果[4]。針對(duì)本次疫情，建議發(fā)病嚴(yán)重的仔豬要進(jìn)行撲殺焚燒深埋處理，切斷傳染源，防止疫情繼續(xù)傳播。治療可采用黃芪多糖注射液和豬白細(xì)胞干擾素進(jìn)行肌注，連續(xù)注射3 d。鏈球菌能夠引起多種動(dòng)物感染發(fā)病，尤其是II型鏈球菌毒性最強(qiáng)，自然界分布廣泛。研究表明[5]，鏈球菌感染成年豬發(fā)病后出現(xiàn)典型的臨床癥狀不明顯，造成的危害較小，新生仔豬和斷奶仔豬感染后危害最大，發(fā)病率和死亡率最高。發(fā)病豬主要常見癥狀為敗血癥、腦膜炎和淋巴結(jié)腫脹，該病對(duì)我國生豬養(yǎng)殖業(yè)危害十分嚴(yán)重。鏈球菌屬于革蘭氏陽性菌，在藥理學(xué)上，β-內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類和喹諾酮類等藥物具有明顯的殺菌作用，但藥敏試驗(yàn)顯示，青霉素、阿莫西林、紅霉素、慶大霉素和土霉素等6種抗生素分離的鏈球菌無殺菌作用。調(diào)查豬場發(fā)現(xiàn)，該豬場在生產(chǎn)中主要使用青霉素、四環(huán)素類藥物進(jìn)行疾病的治療和預(yù)防，造成耐藥菌株的產(chǎn)生。建議豬場使用頭孢曲松鈉和哌拉西林交替用藥進(jìn)行鏈球菌的治療。在今后的生產(chǎn)中，要合理使用抗生素，采取多種抗生素聯(lián)合使用的措施，避免單一抗生素重復(fù)使用催生耐藥菌株。豬場按照上述方案治療后疫情得到控制，整群狀態(tài)轉(zhuǎn)好。