付雅捷 蔣宇強(qiáng) 芮冰如 孫雯

屈光不正是眼科常見疾病，而近視是其中最常見也是近年來備受關(guān)注的類型。據(jù)調(diào)查，2010年全球范圍內(nèi)的近視人群約19.5億人，其中高度近視約2.77億人。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查預(yù)測(cè)，2050年全球近視人群將達(dá)到47.58億人，占全球總?cè)丝诘?9.8%，其中高度近視約9.38億人[1]。我國(guó)已成為世界上近視發(fā)生率最高的國(guó)家之一，尤其是兒童青少年的近視發(fā)生率呈現(xiàn)持續(xù)增長(zhǎng)的態(tài)勢(shì)。角膜接觸鏡（隱形眼鏡）以其方便、舒適、美觀、視野大、影像真實(shí)等諸多優(yōu)點(diǎn)被愈來愈多的患者尤其年輕人所喜愛，使用數(shù)量逐年增加。近來研究也證實(shí),長(zhǎng)期配戴角膜塑形鏡（orthokeratology，OK鏡）能夠有效降低近視患者屈光度數(shù)、控制青少年近視增長(zhǎng)[2]，成為一種安全、有效的矯正視力和控制近視進(jìn)展的方法[3]。隨之而來的因隱形眼鏡致眼部感染甚至失明等病例屢有報(bào)道[4-5]。因此角膜接觸鏡的清洗、護(hù)理、消毒問題亟待關(guān)注。

角膜接觸鏡的清潔消毒及護(hù)理目前多采用化學(xué)方法：即隱形眼鏡護(hù)理液反復(fù)沖洗、浸泡或除蛋白酶清潔鏡片，加之采用手反復(fù)揉搓，這些均易造成角膜接觸鏡的磨損、擦傷、破裂等。針對(duì)現(xiàn)狀，本團(tuán)隊(duì)歷時(shí)2年研發(fā)了一款基于物理方法的角膜接觸鏡清洗消毒護(hù)理儀，以水為清洗媒介利用物理的方法對(duì)角膜接觸鏡進(jìn)行清洗消毒殺菌，將角膜接觸鏡的深層清潔和消毒殺菌技術(shù)用單片機(jī)程序相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化控制。本文采用生物指示物載體定性殺滅試驗(yàn)對(duì)研發(fā)儀器進(jìn)行清洗效果檢驗(yàn)，同時(shí)與標(biāo)準(zhǔn)清洗及氣囊式3D角膜接觸鏡清洗儀清洗進(jìn)行對(duì)比，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 材料 載體：硬性透氣性角膜接觸鏡（rigid gas permeable contact lens，RGP）和 OK 鏡；清洗液：博視頓新潔硬性角膜接觸鏡護(hù)理液[博士倫（上海）貿(mào)易有限公司]、蒸餾水；細(xì)菌：金黃色葡萄球菌ATCC25923、銅綠假單胞菌ATCC27853、肺炎鏈球菌ATCC49619、表皮葡萄球菌；真菌：白色念珠菌ATCC14053、鐮刀菌；除表皮葡萄球菌、鐮刀菌為本實(shí)驗(yàn)室檢出的臨床菌株外（來自本院角膜刮片分泌物），其余均為本實(shí)驗(yàn)室保存的標(biāo)準(zhǔn)菌株。培養(yǎng)基：普通營(yíng)養(yǎng)肉湯（杭州天和微生物試劑有限公司)、哥倫比亞血瓊脂平板（法國(guó)生物梅利埃生物技術(shù)有限公司）、沙保氏培養(yǎng)基（鄭州博賽生物技術(shù)股份有限公司）。還包括LS裂隙燈顯微鏡檢查儀（重慶上邦醫(yī)療）拍照系統(tǒng)、無菌試管、無菌平皿、無菌眼鏡盒、鑷子、生物安全柜、恒溫培養(yǎng)箱等器材。

1.2 方法 本試驗(yàn)采用的是生物指示物載體定性殺滅試驗(yàn)，以金黃色葡萄球菌為例，試驗(yàn)流程如下。

1.2.1 無菌載體準(zhǔn)備 用溫和中性肥皂洗手，或戴干凈塑膠手套；把鏡片放在干凈的鏡盒內(nèi)并注入新鮮的護(hù)理液，戴鏡前鏡片需浸泡過夜（＞6h）；浸泡后，把鏡片從鏡盒拿出，放在手掌心并滴上4滴護(hù)理液[商品名：博視頓新潔硬性角膜接觸鏡護(hù)理液，博士倫（上海）貿(mào)易有限公司]于鏡上，小心搓擦鏡片兩面20s；用純凈水沖洗鏡片5s；統(tǒng)一放置于清潔鏡盒中，用紫外燈滅菌30min。無菌載體處理完畢。

1.2.2 分組清洗 將滅菌后的鏡片按照以下分組方法分為6組，每組重復(fù)6個(gè)鏡片。將金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物（18～24h）用無菌生理鹽水調(diào)整濁度至0.5Mcf（麥?zhǔn)蠞岫龋?，相?dāng)于108cfu/ml的菌懸液。滴染菌懸液10μl于已滅菌的鏡片上，靜置干燥后備用。陰性對(duì)照組：不做任何處理；陽性對(duì)照組：滴染菌懸液，不做清洗；氣囊式3D角膜接觸鏡清洗儀護(hù)理液清洗組（簡(jiǎn)稱對(duì)照儀器護(hù)理液清洗組）：安置鏡片，放入護(hù)理液，電源，開啟，按氣囊式3D角膜接觸鏡清洗儀（杭州視亨光電有限公司生產(chǎn)）標(biāo)準(zhǔn)流程清洗鏡片后，取出鏡片；氣囊式3D角膜接觸鏡清洗儀水媒介清洗組（以下簡(jiǎn)稱對(duì)照儀器水媒介清洗組）：安置鏡片，放入純凈水，電源，開啟，按氣囊式3D角膜接觸鏡清洗儀標(biāo)準(zhǔn)流程清洗鏡片后，取出鏡片；標(biāo)準(zhǔn)清洗組：用溫和中性肥皂洗手，將鏡片從鏡盒拿出，放在手掌心并滴上4滴護(hù)理液于鏡上，小心搓擦鏡片兩面20s，用護(hù)理液沖洗鏡片5s。研發(fā)的新型角膜接觸鏡清洗消毒護(hù)理儀清洗組（簡(jiǎn)稱研發(fā)儀器清洗組）：將制備好的鏡片正確安放在鏡片放置處，加入100ml的蒸餾水，合上蓋子后接通電源，按下清洗開關(guān)即可。經(jīng)3min清洗后，水由儀器下方排水管排出，機(jī)器自行啟動(dòng)內(nèi)部功率為12W的紫外燈照射3min，整體工作時(shí)間為6min，結(jié)束后取出鏡片。

1.2.3 微生物培養(yǎng) 分組清洗結(jié)束后將角膜接觸鏡置于2ml普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中，于35℃±1℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24h，觀察肉湯渾濁情況。同時(shí)取10μl肉湯接種在哥倫比亞血瓊脂平板上觀察生長(zhǎng)菌落是否為接種菌。按上述流程分別進(jìn)行金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、銅綠假單胞菌、肺炎鏈球菌、白色念珠菌的試驗(yàn)。記錄結(jié)果并拍照。鐮刀菌試驗(yàn)流程為將滅菌處理后的鏡片與鐮刀菌新鮮培養(yǎng)物接觸作用一定時(shí)間后認(rèn)為污染成功，根據(jù)上述分組情況分別處理每組鏡片，清洗結(jié)束后用鏡片直接涂抹于沙保氏培養(yǎng)基上，于35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24h觀察結(jié)果。

1.2.4 清洗合格率計(jì)算 按照上述分組情況進(jìn)行分組清洗，每個(gè)清洗組分別用6種微生物作為生物指示物進(jìn)行清洗，每種微生物重復(fù)6個(gè)鏡片，共進(jìn)行36次清洗。通過外觀觀察（有無清洗液殘留）、肉湯培養(yǎng)（觀察肉湯是否渾濁，除鐮刀菌外）和平板培養(yǎng)（是否為接種菌）等標(biāo)準(zhǔn)來衡量不同清洗方法的效果，肉湯培養(yǎng)和平板培養(yǎng)均無菌生長(zhǎng)為合格，計(jì)算合格率。合格率為合格的清洗例數(shù)占總清洗例數(shù)的比值，參照平板培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行計(jì)算。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料以百分率表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同清洗方法清洗效果的比較 見表1-2。

表1 不同清洗方法對(duì)RGP清洗效果的比較

表2 不同清洗方法對(duì)OK鏡清洗效果的比較

表1、2中，對(duì)照儀器護(hù)理液清洗組對(duì)RGP的清洗效果中36例經(jīng)平板培養(yǎng)有菌生長(zhǎng)31例，且生長(zhǎng)菌為接種菌，其中細(xì)菌25例，鐮刀菌6例；對(duì)照儀器水媒介清洗組36例經(jīng)平板培養(yǎng)有細(xì)菌生長(zhǎng)36例，且生長(zhǎng)菌為接種菌，其中細(xì)菌30例，鐮刀菌6例；標(biāo)準(zhǔn)清洗組中36例平板培養(yǎng)中鐮刀菌培養(yǎng)陽性6例。對(duì)照儀器護(hù)理液清洗組對(duì)OK鏡的清洗效果中36例經(jīng)平板培養(yǎng)有細(xì)菌生長(zhǎng)36例，且生長(zhǎng)菌為接種菌，其中細(xì)菌30例，鐮刀菌6例；對(duì)照儀器水媒介清洗組36例經(jīng)平板培養(yǎng)有細(xì)菌生長(zhǎng)36例，且生長(zhǎng)菌為接種菌，其中細(xì)菌30例，鐮刀菌6例；標(biāo)準(zhǔn)清洗組中36例平板培養(yǎng)中陽性8例，其中金黃色葡萄球菌，銅綠假單胞菌1例，鐮刀菌6例。上述結(jié)果可見研發(fā)儀器清洗組的清洗效果明顯優(yōu)于對(duì)照儀器組（RGP 組 χ2=54.43，P＜0.01；OK 鏡組 χ2=72.00，P＜0.01）。研發(fā)儀器清洗組的清洗效果也要好于標(biāo)準(zhǔn)清洗組（RGP組 χ2=6.54，P＜0.05；OK 鏡組 χ2=9.00，P＜0.01）。對(duì)照儀器護(hù)理液清洗組對(duì)RGP的清洗效果優(yōu)于對(duì)照儀器水媒介清洗組（χ2=5.37，P＜0.05），兩組對(duì) OK 鏡的清洗效果無差異。

2.2 清洗效果

2.2.1 研發(fā)儀器清洗前后角膜接觸鏡外觀 研發(fā)儀器清洗角膜接觸鏡后鏡片無磨損、無洗液殘留。

2.2.2 代表性菌株清洗效果 見圖1-2（插頁）。

由圖1-2可見，無論是細(xì)菌還是真菌，研發(fā)儀器清洗組的培養(yǎng)結(jié)果均為無菌生長(zhǎng)，清洗效果明顯優(yōu)于對(duì)照儀器組。對(duì)照儀器護(hù)理液清洗組對(duì)角膜接觸鏡的清洗效果要優(yōu)于對(duì)照儀器水媒介清洗組的清洗效果。

3 討論

國(guó)家衛(wèi)生健康委會(huì)同教育部、財(cái)政部開展的2018年全國(guó)兒童青少年近視調(diào)查工作結(jié)果顯示：2018年全國(guó)兒童青少年總體近視率為53.6%。其中，小學(xué)生為36.0%，初中生為71.6%，高中生為81.0%；低年齡段近視問題比較突出，在小學(xué)和初中階段，近視率隨著年級(jí)的升高快速增長(zhǎng)；而高三學(xué)生高度近視，在近視總數(shù)中占比達(dá)到21.9%。角膜接觸鏡是一種非手術(shù)可逆性的屈光矯正方法，近年來角膜塑形鏡在延緩青少年近視方面取得了廣泛的關(guān)注認(rèn)可，青少年佩戴量逐年增多，因其佩戴在角膜表面，對(duì)鏡片的清潔度有較高的要求，特別是角膜塑形鏡表面特有的矯正近視的基弧、定位弧、反轉(zhuǎn)弧等形成的間隙又極易沉著蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等，手工清洗極難清除[6-7]。能否將角膜接觸鏡清洗干凈徹底尤為重要，清潔不徹底，殘留在角膜接觸鏡上的清洗液、蛋白及微生物可能導(dǎo)致眼部感染甚至失明，同時(shí)也會(huì)減低角膜鏡的透光率，顯著降低矯正效果，影響使用者的正常使用。鏡片清洗不干凈或清洗鏡片使用的清洗劑殘留過多可能會(huì)引起中毒性結(jié)膜炎、過敏反應(yīng)或感染性角膜炎等[4-5]。一項(xiàng)調(diào)查研究表明約0.1%的感染性角膜炎為隱形眼鏡相關(guān)感染性角膜炎[11]，常見細(xì)菌為表皮葡萄球菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌，真菌為鐮刀菌屬、彎孢霉屬、曲霉菌屬和念珠菌屬等[12]。

銅綠假單胞菌由于其特殊的生物學(xué)性質(zhì)以及易生長(zhǎng)的特性導(dǎo)致其可以在被污染的滴眼液和清洗液中長(zhǎng)期生存，當(dāng)接觸到有缺損的角膜上皮時(shí)容易導(dǎo)致眼部感染的發(fā)生。另外銅綠假單胞菌具有多種耐藥機(jī)制，對(duì)常用的抗生素容易產(chǎn)生耐藥性，治療棘手[13]。佩戴過的隱形眼鏡其表面有蛋白沉積物是細(xì)菌良好的培養(yǎng)基，如不進(jìn)行徹底清洗則細(xì)菌容易在鏡片表面殘留，且容易形成生物被膜，此時(shí)如果角膜出現(xiàn)破損或佩戴時(shí)間過長(zhǎng)則會(huì)增加患感染性角膜炎的機(jī)會(huì)。

鐮刀菌是引起真菌性角膜炎常見的病原菌[12]，除常見的由于植物性損傷引起鐮刀菌感染外，角膜接觸鏡的佩戴和護(hù)理不當(dāng)也會(huì)引起鐮刀菌角膜炎[14]。而且鐮刀菌是耐藥性最強(qiáng)的真菌之一，尤其是茄病鐮刀菌，對(duì)大多數(shù)臨床常用的抗真菌藥物具有天然耐藥性，僅對(duì)少數(shù)抗真菌藥物如兩性霉素B、伏立康唑、那他霉素的體外最小抑菌濃度較低，治療有一定的困難[15-16]。本次實(shí)驗(yàn)中可以發(fā)現(xiàn)無論是標(biāo)準(zhǔn)清洗還是對(duì)照儀器清洗，對(duì)鐮刀菌的清洗效果均不滿意。博視頓新潔護(hù)理液的說明書上也明確顯示對(duì)茄科鐮刀菌經(jīng)過4倍浸泡時(shí)間后殺滅率也只有90%左右。而我們團(tuán)隊(duì)研發(fā)的新型角膜接觸鏡護(hù)理液可以在常規(guī)的清洗中將鐮刀菌殺滅，這點(diǎn)遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于市面上的其他產(chǎn)品。

人們選擇配戴角膜接觸鏡，意味著離不開各種各樣的化學(xué)清洗液、消毒液和護(hù)理液。其成分復(fù)雜，如果一旦液體中有一種成分失效或者污染，則會(huì)帶來眼部感染甚至失明的風(fēng)險(xiǎn)；此外，長(zhǎng)期反復(fù)使用化學(xué)性清洗消毒液還會(huì)引起眼表的各種疾?。喝缇奕轭^性結(jié)膜炎、角膜知覺下降、干眼癥等等[8-10]。我們團(tuán)隊(duì)研發(fā)的新型角膜接觸鏡清洗消毒護(hù)理儀解決了以上問題，利用物理的方法以水為清洗媒介對(duì)角膜接觸鏡進(jìn)行清洗消毒，將角膜接觸鏡的深層清潔和紫外線消毒殺菌技術(shù)相結(jié)合，且實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化控制，在整個(gè)清洗、消毒的過程中，不需要用手接觸鏡片，有效防止了鏡片的二次污染，且整個(gè)過程為純物理過程，不涉及化學(xué)品的使用和污染。本文實(shí)驗(yàn)清洗結(jié)果也表明新型角膜接觸鏡清洗護(hù)理儀清洗鏡片無磨損、無洗劑殘留且能殺滅常見的可以引起角膜感染的細(xì)菌和真菌。

新型角膜接觸鏡清洗消毒護(hù)理儀操作也很簡(jiǎn)單方便，只需要將角膜接觸鏡正確安放在鏡片槽內(nèi)，合上鏡片槽，在清洗腔加入100ml水，合上蓋子后按下清洗開關(guān)即可。經(jīng)3min清洗后，水由儀器下方排水管排出，此后由功率為12W的紫外燈照射3min，整體工作時(shí)間為6 min。期間鏡片槽會(huì)在轉(zhuǎn)子的帶動(dòng)下以2次/s正反轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)的速度旋轉(zhuǎn)離心，轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)引起的水流將鏡片上的殘留物清洗干凈，水排出后紫外燈會(huì)自動(dòng)點(diǎn)亮，此時(shí)轉(zhuǎn)子仍在進(jìn)行離心運(yùn)轉(zhuǎn)，在運(yùn)轉(zhuǎn)過程中，鏡片的各個(gè)部位都會(huì)受到紫外線照射，同時(shí)在離心力的作用下，鏡片上殘留的水滴會(huì)被徹底甩干。

目前市面上角膜接觸鏡清洗儀中效果相對(duì)較好的氣囊式3D角膜接觸鏡清洗儀，其屬于阻尼式清洗儀，運(yùn)用仿生學(xué)模擬揉搓，改變了延襲多年清洗鏡片必須依賴手搓的問題，通過軟體硅膠對(duì)鏡片的物理揉搓，破壞蛋白、脂質(zhì)、膠凍塊、黏多糖與鏡片的結(jié)合達(dá)到清潔鏡片的作用。由于本實(shí)驗(yàn)中接種菌量大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了正常狀態(tài)下角膜接觸鏡表面的微生物含量，且本實(shí)驗(yàn)側(cè)重評(píng)價(jià)儀器的清洗效果，并未進(jìn)行后續(xù)的沖洗和長(zhǎng)時(shí)間浸泡。實(shí)驗(yàn)中可以明顯看到對(duì)照清洗儀清洗后的鏡片上會(huì)殘留有較多的清洗液，殘留清洗液不可避免有致病微生物的存在，而護(hù)理液清洗組微生物生長(zhǎng)較水媒介清洗組微生物生長(zhǎng)明顯減少，可見護(hù)理液中的化學(xué)消毒成分對(duì)微生物殺滅起到了重要的作用。因此目前的角膜接觸鏡清洗儀僅解決了手揉搓等弊端，但仍需大量使用化學(xué)性的護(hù)理液等，化學(xué)成分的失效及污染仍存在感染隱患，長(zhǎng)期大量化學(xué)物質(zhì)的使用必然會(huì)對(duì)眼表及環(huán)境產(chǎn)生負(fù)面影響。

綜上，本團(tuán)隊(duì)研發(fā)的新型角膜接觸鏡清洗護(hù)理儀具有顯著效果，其以水為清洗媒介利用物理的方法對(duì)角膜接觸鏡進(jìn)行消毒殺菌，將角膜接觸鏡的深層清潔和紫外線消毒殺菌技術(shù)相結(jié)合，且實(shí)行了自動(dòng)化控制；實(shí)現(xiàn)了角膜接觸鏡護(hù)理儀物理清洗和物理消毒相結(jié)合，為角膜接觸鏡佩戴者，尤其是青少年OK鏡佩戴者的清洗消毒護(hù)理提供最佳的清洗效果，保障了接觸鏡佩戴者的眼部健康。相關(guān)技術(shù)和產(chǎn)品在專利審批及批量研制中，進(jìn)一步效果有待后期大規(guī)模臨床驗(yàn)證。