宋瑩瑩，徐芳菲，郭暢冰，婁子恒，曹志強(qiáng)*

（吉林人參研究院·吉林通化·134001）

人參是五加科植物人參（Panax ginseng C.A.Mey）的干燥根，味甘、微苦、微溫，歸脾、肺、心、腎經(jīng)[1]，首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是我國(guó)馳名中外的名貴藥材，開(kāi)發(fā)前景廣闊。但由于人參生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，病蟲(chóng)害較為嚴(yán)重，頻繁施用農(nóng)藥難免導(dǎo)致農(nóng)殘問(wèn)題。通過(guò)長(zhǎng)期的農(nóng)藥殘留檢測(cè)工作中發(fā)現(xiàn)，人參中有機(jī)氯農(nóng)藥檢出率較高。因此，為了確保檢測(cè)結(jié)果的可信度，本文根據(jù)JJF 1059.1—2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》，對(duì)人參中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的檢測(cè)過(guò)程進(jìn)行不確定度來(lái)源分析，找到影響檢測(cè)結(jié)果不確定度的主要因素，從而為相關(guān)的測(cè)量不確定度評(píng)定提供參考，對(duì)于質(zhì)量控制具有重要意義[2～6]。本文檢測(cè)的農(nóng)殘有機(jī)氯十六種包括：六氯苯、甲體-六六六、五氯硝基苯、丙體-六六六、乙體-六六六、丁體-六六六、七氯、艾氏劑、氧化氯丹、環(huán)氧七氯、 反式氯丹、順式氯丹、PP'-DDE、OP'-DDT、PP'-DDD、PP'-DDT。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

人參購(gòu)于當(dāng)?shù)厝藚⑹袌?chǎng)。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 主要儀器

表1 實(shí)驗(yàn)主要用儀器

1.2.2 主要試劑

正己烷（AR）；丙酮（AR）；氯化納（AR）；二氯甲烷（AR）；無(wú)水硫酸鈉（AR）；濃硫酸（AR） 。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品測(cè)定

按照《中國(guó)藥典》2015年版第一增補(bǔ)本，人參項(xiàng)下有機(jī)氯類(lèi)農(nóng)藥殘留量的測(cè)定。精密稱(chēng)取人參粉末5.0000g，置具塞錐形瓶中，加水30mL，振搖10min，精密加丙酮50mL，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率300W，頻率40kHz)30min，放冷，再稱(chēng)定重量，用丙酮補(bǔ)足減失的重量，再加氯化納約8g，精密加二氯甲烷25mL，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率300W，頻率40kHz)15min，再稱(chēng)定重量，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，振搖使氯化鈉充分溶解，靜置，轉(zhuǎn)移至離心管中，離心（每分鐘3000轉(zhuǎn)）3min，使完全分層，將有機(jī)相轉(zhuǎn)移至裝有適量無(wú)水硫酸鈉的具塞錐形瓶中，放置30min。精密量取15mL，置 40℃水浴中減壓濃縮至約1mL，加正己烷約5mL，減壓濃縮至近干，用正己烷溶解并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，轉(zhuǎn)移至離心管中，緩緩加入硫酸溶液(9→10)1mL，振搖1min，離心（每分鐘3000轉(zhuǎn)）10min，分取上清液，加水1mL，振搖，取上清液，即得。

1.3.2 數(shù)學(xué)模型

試樣中有機(jī)氯農(nóng)藥的含量數(shù)學(xué)模型建立如下：

式中：

W——試樣中各組分農(nóng)藥含量，單位為毫克每千克（mg/kg）

A——試樣中各組分農(nóng)藥峰面積，單位為赫茲*秒（Hz*s）

As——標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積,單位為赫茲*秒（Hz*s）

C——標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）

V1——萃取溶劑總體積，單位為毫升（mL）

V2——取出樣品溶液的體積，單位為毫升（mL）

V3——樣品定容體積，單位為毫升（mL）

M——稱(chēng)取試樣質(zhì)量，單位為克（g）

1.4 不確定度分量來(lái)源

從檢測(cè)過(guò)程和數(shù)學(xué)模型分析，檢測(cè)有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量的不確定度主要有以下7個(gè)來(lái)源：a.樣品稱(chēng)量過(guò)程引入的不確定度。b.試劑轉(zhuǎn)移過(guò)程移液槍引入的不確定度。c.樣液定容過(guò)程引入的不確定度。d.樣品上機(jī)過(guò)程引入的不確定度。e.標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度。即標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相對(duì)不確定度、標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋過(guò)程引入的不確定度。f.實(shí)驗(yàn)回收率引入的不確定度。g.重復(fù)測(cè)量引入的不確定度。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品稱(chēng)量過(guò)程引入的不確定度

電子天平檢定合格，根據(jù)檢定證書(shū)，當(dāng)0.01 g≤m≤5g時(shí)，天平校準(zhǔn)允許的最大誤差為土0.05mg，稱(chēng)取人參粉末5.0000g，取矩形分布，引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.2 試劑轉(zhuǎn)移過(guò)程移液槍引入的不確定度

移液槍引入的不確定度，用B類(lèi)不確定評(píng)定。根據(jù) 2～10mL移液槍的出廠證書(shū)可知系統(tǒng)誤差為0.29%，即引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.3 樣液定容至5mL容量瓶過(guò)程引入的不確定度

根據(jù)JG196—2006((常用玻璃量器檢定規(guī)程》[7],得5mLA級(jí)容量瓶允許最大誤差為±0.020mL,即5mL容量瓶的誤差半寬為0.02mL，符合均勻分布，則其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.4 樣品上機(jī)過(guò)程引入的不確定度

氣相色譜儀引入的不確定度，查檢定報(bào)告可知：

2.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度

2.5.1 標(biāo)準(zhǔn)品本身濃度的不確定度

根據(jù)各標(biāo)準(zhǔn)品的說(shuō)明書(shū)，統(tǒng)計(jì)計(jì)算各標(biāo)準(zhǔn)品相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度，詳見(jiàn)表2。

表2 十六種有機(jī)氯農(nóng)殘標(biāo)準(zhǔn)品相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

2.5.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋過(guò)程引入的不確定度

2.5.2.1 移液管引入的不確定度

根據(jù)JJG196—2006《常用玻璃量器檢定規(guī)程》，1mL移液管允許最大誤差為±0.008mL，按照均勻分布計(jì)算，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

0.5 mL移液管允許最大誤差為±0.005mL，按照均勻分布計(jì)算，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.5.2.2 容量瓶引入的不確定度

同理查JJG196—2006(常用玻璃量器檢定規(guī)程》，得50mL容量瓶允許最大誤差為±0.05mL，按照均勻分布計(jì)算，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

10mL容量瓶允許最大誤差為±0.02mL，按照均勻分布計(jì)算，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.5.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液上機(jī)引入的不確定度

氣相色譜儀引入的不確定度，查檢定報(bào)告可知：

2.6 實(shí)驗(yàn)回收率引入的不確定度

對(duì)空白樣品進(jìn)行6次加標(biāo)回收試驗(yàn)，加標(biāo)水平為0.1μg/mL，即加標(biāo)樣檢出濃度示值與回收率見(jiàn)表3。

由表3可以知道，各目標(biāo)物的回收率平均值R與標(biāo)準(zhǔn)偏差S，用t檢驗(yàn)法來(lái)檢驗(yàn)回收率是否與100%存在顯著性差異。

方法使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)做回收試驗(yàn)，其不確定度為[8]：

式中：U(R)為標(biāo)準(zhǔn)不確定度；

R為平均回收率；

S為重復(fù)分析的標(biāo)準(zhǔn)偏差；

n為重復(fù)次數(shù)；

Cs為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)給定的標(biāo)準(zhǔn)值；

U(Cs)為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)不確定度。

由于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度在標(biāo)準(zhǔn)溶液使用引入的不確定度已考慮過(guò)，這里不做再次考慮，上式簡(jiǎn)化為：

查t表得，在自由度為5，置信概率為95%下，t0.95(5)=2.57。由表3計(jì)算得出各目標(biāo)物t均大于t0.95(5)，因此，平均回收率R與100%存在顯著性差異，須使用回收率修正結(jié)果。修正公式如下:

2.7 重復(fù)測(cè)量引入的不確定度

通過(guò)對(duì)同一樣品重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定值詳見(jiàn)表5。按A類(lèi)評(píng)定應(yīng)用貝塞爾公式計(jì)算，即每項(xiàng)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度U11(rel)如下表。

3 合成不確定度與實(shí)驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)JJF 1059.1—2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》，合成不確定度計(jì)算公式為：式中 xi，xj，為輸入量，i≠j

r(xi,xj)為輸入量xi和xj之間的相關(guān)系數(shù)估計(jì)值。

實(shí)際工作中，若各輸入量之間均不相關(guān)，或雖有部分輸入量相關(guān)，但其相關(guān)系數(shù)較小而近似為r(xi,xj)=0，于是 Uc(y)可簡(jiǎn)化為：

根據(jù)以上評(píng)估過(guò)程，各不確定度分量相互獨(dú)立，因此，計(jì)算公式：

計(jì)算結(jié)果見(jiàn)下表。

4 結(jié)論

本研究對(duì)使用氣相色譜法進(jìn)行人參中十六種有機(jī)氯測(cè)定的不確定度來(lái)源進(jìn)行了較全面的分析，通過(guò)對(duì)不確定度的計(jì)算評(píng)定，比較了各相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量，發(fā)現(xiàn)影響測(cè)定人參中十六種有機(jī)氯的不確定度主要因素是回收率和重復(fù)性試驗(yàn)，因此本試驗(yàn)的關(guān)鍵在于對(duì)樣品的前處理與儀器的穩(wěn)定性，所以在以后的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要加強(qiáng)操作的規(guī)范性，且待儀器穩(wěn)定后再檢測(cè)，以減小不確定度的產(chǎn)生，從而得到準(zhǔn)確性高的檢測(cè)結(jié)果。