駱啟晗 潘珍珍 石榮珍 高建莉

溫泉是一種由地殼深處受地?zé)嶙饔枚鴱牡叵伦匀挥砍鰜淼娜甗1]，泉水溫度超過25 ℃，富含多種礦物質(zhì)元素，如鉀、鈣、鈉等，以及氡、鐳等放射性元素，且溫泉水中的二氧化碳、硫化氫等氣體也具有醫(yī)療價值[2]。溫泉水浴對多種疾病都有明顯的療效。相關(guān)研究認(rèn)為溫泉水浴可降低個體血壓及血糖、血脂水平，輔助治療糖尿病并發(fā)癥，還可治療呼吸道疾病、頑固性皮膚病，緩解類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎癥狀等[3]。

鍺(Ge)是一種具有多種生物活性的微量元素，對人體具有廣泛的防病治病等功效，被科學(xué)家稱為“21世紀(jì)的救命鍺”“生命的奇效元素”[4]。鍺對于免疫調(diào)節(jié)、癌癥預(yù)防、慢性肝炎治療等都具有積極作用。五沒食子酰葡萄糖鍺(PGG-Ge)對人乳腺癌細(xì)胞MCF7等6種腫瘤細(xì)胞的增生均具有明顯的抑制作用[5]；Ge-132能夠有效抑制3LL肺癌細(xì)胞的遷移和生長；合成抗壞血酸有機鍺倍半氧化物能夠抑制S-180肉瘤的生長, 其能效可以達(dá)到與廣譜抗癌藥物環(huán)磷酰胺相當(dāng)?shù)乃剑缓铣啥喾渔N也能夠有效地抑制HepG2腫瘤細(xì)胞的生長[6]。鍺元素在自然界分布廣泛，在許多地區(qū)的礦泉水及地下水都發(fā)現(xiàn)含鍺。本實驗所使用的溫泉水樣本取自福建省清流縣天芳悅潭，經(jīng)ICP-MS檢測，鍺含量為0.01 mg/L，通過研究富鍺溫泉水對4T1乳腺癌荷瘤小鼠的腫瘤生長、轉(zhuǎn)移的抑制作用及機體免疫功能的影響，明確其對乳腺癌荷瘤機體的作用。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞株 4T1 小鼠乳腺癌細(xì)胞株，由中國科學(xué)院細(xì)胞庫提供。采用DMEM培養(yǎng)基(添加NaHCO31.5 g/L，青霉素1×105U/L、鏈霉素100 mg/L)90%，優(yōu)質(zhì)胎牛血清 (批號：A66E00F，Gemini，美國)10%在37 ℃、飽和濕度及5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每2～3 d傳代1次。

1.2 藥物、試劑及儀器 注射用環(huán)磷酰胺(CTX)(江蘇盛迪醫(yī)藥公司，批號14120525，規(guī)格200 mg/瓶，Milli-Q水配成0.67 mg/mL，-20 ℃保存)；黃芪購于浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院(浙江省中醫(yī)院)中藥房，70%乙醇回流提取，冷凍干燥后，制備成浸膏。臨用前生理鹽水稀釋灌胃給藥。溫泉水樣本取自福建省清流縣天芳悅潭，經(jīng)ICP-MS檢測，鍺含量為0.01 mg/L，水樣采用0.22 μm微孔濾膜過濾后-20 ℃保存，臨用前解凍。細(xì)胞培養(yǎng)瓶T75(Nunc，批號：7133428)；DMEM高糖培養(yǎng)液[賽默飛世爾(蘇州)儀器有限公司，批號：8117065]；0.25%Trypsin & 0.25%胰酶溶液(杭州吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司，批號：2017052601)；胎牛血清(GEMINI， 批 號：A66E00F)；0.4% 臺 盼 藍(lán) 溶 液(Solarbio，上海索萊寶科技有限公司，批號：20120906)；異氟烷(深圳市瑞沃德生命科技有限公司，批號：204141201)；甲醛溶液(上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，批號：20170109)；PBS緩沖液 (索萊寶，批號：113I0227)；碳酸氫鈉NaHCO3(SIGMA，批號：SLBK6477V)；ELISA試劑盒(上海源葉生物科技有限公司，批號：)生理鹽水(江蘇蘇中藥業(yè)集團股份有限公司，批號：15012406)。熒光倒置顯微鏡(尼康)；血球計數(shù)板(玉環(huán)縣求精醫(yī)用儀器廠)；小動物吸入式麻醉機(深圳市瑞沃德生命科技有限公司)；超凈工作臺(上海博迅實業(yè)有限公司)；恒溫培養(yǎng)箱(美國Thermo scientific)；低速大容量多管離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠)；全自動血液分析儀(希森美康株式會社)。小鼠手術(shù)器械包購自世界精密儀器有限公司(美國，批號03-D)；0.1 mL滅菌注射器，由上海奧爾科特生物科技有限公司提供；游標(biāo)卡尺購自上海美耐特實業(yè)有限公司。

1.3 BALB/c小鼠乳腺癌模型的建立 BALB/c小鼠購自上海西普爾必凱實驗動物有限公司，許可證號碼：SCXK(滬)2013-0016，4～6周齡雌性小鼠，體質(zhì)量(18±2)g，SPF級，飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心，自由飲食，維持12 h/12 h明暗周期。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，選取健康BALB/c小鼠36只，氣麻機2%的異氟烷麻醉小鼠后，除空白對照組外的小鼠均于右側(cè)倒數(shù)第二對乳腺脂肪墊下接種1×107/只4T1細(xì)胞懸液，每只注射100 μL細(xì)胞懸液，制備小鼠4T1乳腺癌荷瘤模型。

1.4 動物分組及給藥方法 造模成功后，采用完全隨機分組法將雌性BALB/c小鼠分為模型組、CTX組、溫泉水組、黃芪對照組，每組8只，另設(shè)未造模小鼠8只為正常組。造模48 h后，模型組皮下注射給予質(zhì)量濃度為0.009 g/mL的生理鹽水200 μL/次/只，CTX組腹腔注射給予CTX 100 mg/kg，黃芪對照組灌胃給予30 mg/kg的黃芪提取物，溫泉水組皮下注射給予200 μL/次/只。每3 d給藥一次，連續(xù)給藥28 d。實驗期間小鼠自由采食飲水。

1.5 腫瘤體積、瘤重及腫瘤生長曲線檢測 荷瘤小鼠造模第5天用游標(biāo)卡尺第一次測量瘤體長徑L(mm)和短徑W(mm)，之后每5 d檢測一次，根據(jù)公式：V＝(L＋W)(L)(W)(0.261 8)，計算瘤體積V(mm3)，繪制腫瘤生長曲線。給藥28 d后，小鼠脫頸椎處死。剖取移植瘤，并計算腫瘤指數(shù)(腫瘤指數(shù)＝單個瘤重/小鼠體質(zhì)量)；抑瘤率(%)＝(1－治療組平均瘤重/對照組平均瘤重)×100%。

1.6 胸腺、淋巴結(jié)、脾臟、肺重量及指數(shù)檢測 解剖小鼠取肺、胸腺、脾、腋下淋巴結(jié)。稱重拍照、分別計算各個臟器系數(shù)。臟器指數(shù)＝臟器重量/小鼠體質(zhì)量。

1.7 血常規(guī)及ELISA法 末次給藥2 h后，取血，血常規(guī)檢測各組小鼠血液內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)量(RBC)、白細(xì)胞數(shù)量(WBC)、血紅蛋白(HGB)等16項血液學(xué)指標(biāo)。采用ELISA試劑盒測定小鼠血清中血清白細(xì)胞介素-10(interleukin-10，IL-10)水平。

1.8 血涂片 取3 μL左右的血置于載玻片上，將推玻片與載玻片保持30°角，置于血滴正前方，稍微后移，血液沿推玻片散開后，勻速向前推玻片，至血液鋪完血膜為止。待血膜干透后，將載玻片置于染色架上，滴加瑞氏染液試劑一3～5滴，使其覆蓋血膜，染色1 min固定血片。接著滴加瑞氏染液試劑二6～10滴，用洗耳球吹氣使載玻片上染液充分混合，染色8 min。之后水洗30 s，待干后拍照觀察血細(xì)胞分布情況及形態(tài)變化。

1.9 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件處理，實驗數(shù)據(jù)結(jié)果均用(±s)表示，每組數(shù)據(jù)進行正態(tài)性檢驗，符合正態(tài)性分布的多個樣本均數(shù)比較采用單因素ANOVA分析，若方差齊則采用LSD檢驗，若方差不齊就采用Games-Howell(A)檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠體質(zhì)量及去瘤體質(zhì)量的變化 荷瘤小鼠在腫瘤接種9 d后，體質(zhì)量增加趨勢明顯，且體質(zhì)量顯著大于正常組小鼠(P＜0.05)；CTX組體質(zhì)量明顯低于模型組(P＜0.05)；而比較其他各時段各組小鼠體質(zhì)量數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)與模型組相比，溫泉水組小鼠的體質(zhì)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義。CTX組去瘤體質(zhì)量明顯低于模型組(P＜0.05)，其余各組小鼠去瘤體質(zhì)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(見表1)。

2.2 小鼠胸腺、脾臟、肺指數(shù) 模型組胸腺重量和指數(shù)明顯小于正常組(P＜0.05，P＜0.01)，溫泉水組胸腺重量和指數(shù)明顯大于模型組(P＜0.05，P＜0.05)，表現(xiàn)與中藥黃芪組類似。模型組的肺指數(shù)明顯高于正常組(P＜0.05)，溫泉水組的肺指數(shù)明顯高于模型組(P＜0.05)。CTX顯著抑制荷瘤小鼠胸腺重量(P＜0.05)和脾臟重量(P＜0.01)，降低小鼠胸腺指數(shù)(P＜0.01)和脾臟指數(shù)(P＜0.05)，抑制脾臟壞死發(fā)生率(降低至40%)。溫泉水對小鼠的脾臟重量和指數(shù)影響與模型組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(見表2，見圖1)。

表1 溫泉水樣本對4T1荷瘤小鼠體質(zhì)量的影響[(±s)，n＝8] 單位：g

表1 溫泉水樣本對4T1荷瘤小鼠體質(zhì)量的影響[(±s)，n＝8] 單位：g

注：與正常組比較，△P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05；溫泉水組、黃芪組、CTX組劑量每3 d一次。

?組別 劑量 動物體質(zhì)量 去瘤體質(zhì)量接種前 Day 3 Day 9 Day 15 Day 21 Day 27正常組 NS 15.30±1.19 15.74±1.17 17.76±1.05 17.73±1.07 18.53±1.09 18.85±1.18 18.85±1.18模型組 NS 16.30±0.89 16.35±1.23 18.34±1.35 19.15±1.27 20.26±1.53△ 20.19±1.79△ 19.54±1.72溫泉水組 200 μL/只 16.38±1.08 16.46±0.94 18.03±1.79 19.06±1.98 20.06±1.76 20.04±1.02 19.13±2.08黃芪組 30 mg/kg 15.69±0.67 15.85±0.8 17.73±1.25 18.56±1.25 19.58±1.43 19.30±1.20 18.45±1.17 CTX組 43 mg/kg 15.74±0.99 16.21±0.79 16.59±0.91* 16.83±0.97* 17.64±0.95* 17.70±0.85* 17.50±0.84*

表2 溫泉水樣本對4T1荷瘤小鼠臟器指數(shù)的影響[(±s)，n＝8]

表2 溫泉水樣本對4T1荷瘤小鼠臟器指數(shù)的影響[(±s)，n＝8]

注：與正常組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；CTX組、溫泉水組、黃芪組劑量每3 d一次。

?組別 劑量 胸腺重量 胸腺指數(shù) 脾臟重量 脾臟指數(shù) 肺重量 肺指數(shù)正常組 NS 53.63±10.92 0.29±0.06 86.04±6.67 0.45±0.04 153.55±13.43 0.82±0.08模型組 NS 36.98±8.00△ 0.18±0.04△△ 1 070.00±148.83△△ 5.26±0.65△△ 195.10±27.43 0.96±0.10△CTX組 43 mg/kg 18.16±7.48* 0.10±0.04** 407.96±62.86** 2.32±0.42** 189.26±12.79 1.02±0.09溫泉水組 200 μL/只 47.30±13.83* 0.24±0.07* 1 104.56±112.47 5.53±0.53 215.64±25.15 1.09±0.17*黃芪組 10 mg/kg 50.56±12.64* 0.26±0.06** 978.29±127.51 5.08±0.64 197.25±25.78 1.02±0.09

2.3 小鼠腫瘤體積和瘤重、轉(zhuǎn)移率和轉(zhuǎn)移灶數(shù)在整個腫瘤生長期，溫泉水組的腫瘤體積均低于模型組，但未見差異有統(tǒng)計學(xué)意義。腫瘤接種28 d后，溫泉水組腫瘤的瘤重與模型組和中藥黃芪組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。值得注意的是，與模型組相比溫泉水組小鼠的肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量相對較少，轉(zhuǎn)移灶較小，肺轉(zhuǎn)移發(fā)生率降低(見表3)。

2.4 荷瘤小鼠外周血常規(guī)和血清IL-10水平 標(biāo)準(zhǔn)曲線y＝0.003 3x+ 0.018 8，R2＝0.998 4，計算得到實際濃度，血清IL-10水平從(221.52±72.90)降低到(151.44±34.67)(P＜0.05)，提示富鍺溫泉水對荷瘤小鼠血清IL-10的水平有顯著抑制作用。此外，溫泉水皮下注射顯著降低荷瘤小鼠增加的嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)(P＜0.05)和血紅蛋白分布寬度(P＜0.05，見表4)。

表3 溫泉水樣本對4T1小鼠腫瘤體積、重量及轉(zhuǎn)移率的影響[(±s)，n＝8]

表3 溫泉水樣本對4T1小鼠腫瘤體積、重量及轉(zhuǎn)移率的影響[(±s)，n＝8]

注：與模型組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 腫瘤體積/mm3瘤重/g 腫瘤指數(shù)/% 抑瘤率/%給藥6 d 給藥12 d 給藥18 d 給藥24 d模型組 56.15±17.25 197.03±83.01 437.53±165.61 741.11±331.24 0.85±0.19 4.18±0.83 CTX組 24.86±11.86* 34.73±13.59** 71.82±22.30** 128.87±45.73** 0.20±0.09** 1.16±0.52** 76.47溫泉水組 46.99±20.29 186.12±81.01 411.55±141.17 732.07±210.80 0.91±0.13 4.62±1.00 -7.06黃芪組 61.24±14.38 197.14±66.26 454.19±104.56 757.12±253.02 0.85±0.11 4.41±0.56 0組別 肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)目/個 轉(zhuǎn)移率總轉(zhuǎn)移灶數(shù) ＜2 mm ＞2 mm 平均轉(zhuǎn)移灶數(shù)模型組 45 35 10 5.6 8/8 CTX組 0 0 0 0 0/8溫泉水組 19 16 3 2.71 7/8黃芪組 22 18 4 2.75 7/8

表4 溫泉水樣本對4T1荷瘤小鼠血常規(guī)的影響[(±s)，n＝8]

表4 溫泉水樣本對4T1荷瘤小鼠血常規(guī)的影響[(±s)，n＝8]

注：與正常組相比，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

?組別 白細(xì)胞、單核、淋巴細(xì)胞相關(guān)指數(shù)WBC/(109·L-1) LYMPH/(109·L-1) MONO/% LYMPH/(109·L-1) MONO/%正常組 3.50±0.10 2.30±0.77 0.03±0.01 65.10±9.45 0.95±0.26模型組 219.28±47.21△△ 11.87±3.97△△ 2.88±2.00△△ 5.45±1.49△△ 1.40±1.22 CTX組 13.32±7.24** 1.08±0.60** 0.08±0.02** 9.40±5.08 0.78±0.55溫泉水組 205.68±28.78 13.76±2.56 1.77±0.64 6.75±1.39 0.88±0.38黃芪組 223.30±46.51 12.14±1.09 2.66±0.53 5.63±1.24* 1.23±0.33組別 粒細(xì)胞相關(guān)指數(shù)NEUT/(109·L-1) NEUT/% EO/(109·L-1) EO/% BASO/(109·L-1) BASO/%正常組 0.75±0.43 20.13±5.75 0.41±0.27 13.23±10.35 0.00±0.00 0.18±0.17模型組 197.23±46.52△△ 89.65±3.24△△ 2.80±0.49△△ 1.30±0.22△△ 5.95±4.29△ 2.53±1.18△△CTX組 11.49±6.60** 83.2±9.64 0.51±0.08* 5.28±4.1 0.09±0.07* 0.60±0.16**溫泉水組 183.58±27.45 89.17±1.35 2.27±0.44 1.13±0.31 2.60±0.92 1.23±0..25*黃芪組 201.95±45.42 90.25±1.74 2.35±0.66 1.05±0.30 2.87±1.27 1.23±0.31*組別 紅細(xì)胞相關(guān)指數(shù)RBC(1012·L-1) HGB/(g·L-1) HDW/(g·L-1) MCH/pg正常組 9.81±1.00 159.00±17.53 18.30±1.22 16.15±0.19模型組 9.14±0.24 140.75±5.19 21.80±1.88△△ 15.38±0.31△CTX組 7.51±0.86* 126.75±13.74 25.08±1.70** 16.88±0.36**溫泉水組 9.01±0.59 135.50±9.04 19.65±1.24* 15.05±0.19黃芪組 9.01±0.55 133.75±7.89 19.88±0.43* 14.88±0.50*

2.5 溫泉水對乳腺癌小鼠外周血細(xì)胞形態(tài)的影響 血涂片結(jié)果顯示，乳腺癌荷瘤小鼠的中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞增多，且中性粒細(xì)胞胞核分葉少，這種現(xiàn)象可能是由于乳腺癌晚期，腫瘤組織炎性細(xì)胞及炎性因子浸潤，外周血內(nèi)炎癥細(xì)胞增多。溫泉水給藥小鼠的中性粒細(xì)胞數(shù)量減少且胞核分葉多，改善腫瘤誘發(fā)的慢性炎癥狀態(tài)。但未出現(xiàn)黃芪組所示，增加嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量的功效，說明溫泉水可能具有改善腫瘤免疫抑制相關(guān)免疫細(xì)胞數(shù)量的作用，但不能增加機體免疫正調(diào)控相關(guān)的免疫細(xì)胞的數(shù)量(見圖2)。

圖2 各組有代表性的小鼠血涂片(200倍)

3 討論

溫泉在預(yù)防保健、疾病治療、促進康復(fù)等方面都有顯著的效果[3]。有研究指出，溫泉水療對高血壓、哮喘、糖尿病等疾病均有一定的療效，還有助于減輕焦慮、急躁等負(fù)面情緒，提高睡眠質(zhì)量，其可以通過自身的物理效應(yīng)和化學(xué)效應(yīng)給人體健康帶來積極影響[7]。溫泉水中的化學(xué)物質(zhì)或微量元素，能刺激人體自主神經(jīng)，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌及免疫系統(tǒng)，從而起到治療作用[1]。在本研究中，富鍺溫泉水表現(xiàn)出較好的乳腺癌輔助治療作用。黃芪為臨床腫瘤輔助治療的常用中藥，能廣泛調(diào)節(jié)機體免疫系統(tǒng)[8]，改善術(shù)后身體狀態(tài)，抑制腫瘤標(biāo)志物水平，降低腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[9]，且黃芪多糖對乳腺癌化療患者具有增效減毒作用[10]。為了更精確地觀察溫泉水對荷瘤機體的作用，本實驗采用荷瘤小鼠皮下注射含鍺溫泉水的方法，并設(shè)置陽性藥CTX和中藥黃芪為對照組，以進一步明確其對荷瘤機體免疫功能的影響。

乳腺癌是女性發(fā)病率最高的腫瘤類型，傳統(tǒng)化療藥物對機體損傷較大，并且會破壞機體自身的免疫功能。本研究結(jié)果顯示，CTX顯著抑制小鼠體質(zhì)量增長，而溫泉水和黃芪對小鼠體質(zhì)量均無明顯影響，提示含鍺溫泉水基本上無毒，無副作用。肺轉(zhuǎn)移是乳腺癌最常見的內(nèi)臟轉(zhuǎn)移之一[11]，溫泉水組小鼠的肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量明顯減少，且轉(zhuǎn)移灶較小，肺轉(zhuǎn)移發(fā)生率降低，說明溫泉水有抑制乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的作用。胸腺是維持外周免疫的重要器官，為T細(xì)胞前體發(fā)育為成熟的T淋巴細(xì)胞提供了重要微環(huán)境[12]，其皮質(zhì)分泌多種胸腺素，參與生物體的免疫功能，特別是細(xì)胞免疫功能。實驗結(jié)果顯示，溫泉水組的胸腺質(zhì)量和指數(shù)顯著高于模型組，接近于正常組，提示富鍺溫泉水能對抗腫瘤引起的胸腺萎縮，保護胸腺的免疫功能；但對脾臟無明顯影響，不能抑制脾臟的腫大。鑒于溫泉水對小鼠腫瘤體積、重量無顯著作用，表明富鍺溫泉水主要通過免疫調(diào)節(jié)作用對抗乳腺癌轉(zhuǎn)移，而非直接抑制腫瘤的生長。

IL-10是一種抗炎細(xì)胞因子，在維持免疫穩(wěn)態(tài)、預(yù)防免疫介導(dǎo)的炎癥性疾病和增強對病原體的免疫應(yīng)答等方面起著至關(guān)重要的作用[13]。IL-10最初被稱為“細(xì)胞因子抑制因子”，因其對T輔助細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子具有抑制作用，幾乎由所有的白細(xì)胞以及乳腺、腎臟、結(jié)腸、胰腺、惡性黑色素瘤和神經(jīng)母細(xì)胞瘤等人類腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生[14]，并且在多種惡性腫瘤中呈高表達(dá)。IL-10 能通過抑制抗原提呈細(xì)胞(antigen presenting cell，APC)的活化作用產(chǎn)生對T 細(xì)胞的抑制效應(yīng)來形成免疫抑制環(huán)境，從而誘導(dǎo)腫瘤免疫逃逸，促進腫瘤生長和轉(zhuǎn)移[15]。溫泉水對荷瘤小鼠血清IL-10的水平有顯著抑制作用，提示其改善荷瘤小鼠的免疫抑制狀態(tài)。

綜上所述，富鍺溫泉水能夠保護荷瘤小鼠胸腺免疫功能，抑制4T1腫瘤的肺轉(zhuǎn)移，并能改善機體的免疫抑制狀態(tài)。此外，其多項實驗結(jié)果均與黃芪對照組相似。在實際應(yīng)用過程中，溫泉還起到腫瘤熱療的效益，熱療作為一種療效明確的腫瘤治療手段，正在得到越來越多的醫(yī)生和患者關(guān)注和承認(rèn)。腫瘤細(xì)胞對熱更加敏感，且腫瘤區(qū)域散熱較慢，所以可通過熱療改變腫瘤區(qū)域的溫度致使腫瘤細(xì)胞死亡[16]。因此采用42～45 ℃富鍺溫泉水溫浴的最終綜合抗腫瘤效果可能優(yōu)于單獨皮下給藥模擬的表皮吸收效果。本實驗僅初步研究了富鍺溫泉水對荷瘤機體的免疫調(diào)節(jié)作用，尚未開展全面的抗腫瘤藥效學(xué)評價和相關(guān)機制研究，且未能結(jié)合溫泉的熱療作用驗證富鍺溫泉水浴療的綜合效果。在后續(xù)研究中，將基于本研究結(jié)果，開展多劑量、多時間點的藥效學(xué)觀測，并采用富鍺溫泉水制備細(xì)胞培養(yǎng)基，從細(xì)胞水平驗證其對腫瘤相關(guān)的免疫細(xì)胞功能抑制的作用及機制。