張玉昆，郭珊珊，牛雯穎△，馮月男，卞敬琦

（1. 黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040； 2. 河北省滄州市人民醫(yī)院，河北 滄州 061000）

固本安神膠囊是由葛根、黃芩、五味子、生地、淫羊藿、巴戟天等12 味中藥經(jīng)粉碎灌裝而成［1］有滋陰補陽，交通心腎之功效，用于絕經(jīng)前后諸證屬陰陽兩虛者，是臨床有效經(jīng)驗方劑制成的醫(yī)院制劑。中醫(yī)學認為，絕經(jīng)前后諸證多發(fā)生在女子七七前后，常伴有月經(jīng)周期紊亂、月經(jīng)量異常，潮熱，汗出，心煩失眠，情緒改變等癥狀［2］。絕經(jīng)前后諸證的發(fā)生與發(fā)展持續(xù)時間多則數(shù)年，一般都需要用藥治療。但長時間的用藥治療，重金屬及有害元素就會在機體富集，從而產(chǎn)生一定的潛在安全隱患［3］。2015 年版《中國藥典（一部）》對部分中藥材或中藥飲片中砷（As）、汞（Hg）、鉛（Pb）、鎘（Cd）、銅（Cu）5 種元素的含量限度要求分別為As＜2 mg/kg，Hg＜0.2 mg/kg，Pb ＜5 mg/kg，Cd ＜0.3 mg/kg，Cu ＜20 mg/kg。本研究中應用原子吸收光譜儀檢測固本安神膠囊中重金屬及有害元素的含量，并通過風險評估，評價固本安神膠囊中As，Hg，Pb，Cd，Cu 的健康風險，為臨床提供安全的醫(yī)院制劑奠定基礎?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

儀器：novAA400P 型原子吸收光譜儀，TOPwavePL100型微波消解爐，均購自德國耶拿分析儀器股份公司。

試藥：固本安神膠囊細粉（黑龍江中醫(yī)藥大學實驗實訓中心自制）；優(yōu)級純硝酸（天津科密歐公司）；As，Hg，Pb，Cd，Cu 5 種元素的標準溶液（質(zhì)量濃度均為1 000 μg/mL，批 號 分 別 為GBW08611-13051027，GBW08617-17203402，GBW08601-17201301，GBW08612-17020613，GBW08615-16011006），均購自中國計量科學研究院；純凈水（實驗室自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

標準溶液：以As 元素為例，取1 mL As 元素標準溶液（質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL），用2%硝酸溶液定容至100 mL，作為母液；再取400，200，100，50，0 μL 定容至100 mL，最終As 元素標準溶液質(zhì)量濃度為40，20，10，5，0 ng/mL。同法制備其余4 種元素的標準溶液。詳見表1。

表1 5 種元素標準溶液質(zhì)量濃度

供試品溶液：稱取樣品內(nèi)容物細粉0.20 g，精密稱定，精密量取8.00 mL 硝酸。分先后置消解罐中，微波消解爐中消解50 min，取出，置120 ℃控溫電熱板趕酸至約1.5 mL，分別多次用2%硝酸溶液潤洗消解罐，并轉(zhuǎn)移至25 mL 容量瓶中，用2%硝酸定容，混勻，即得。

空白溶液：同供試品溶液制備方法，不加入固本安神膠囊細粉，制備空白溶液。

2.2 測定方法[4 -7]

原子吸收光譜儀參數(shù)見表2。As，Hg 2 種元素采用氫化物法進行測定，相關(guān)參數(shù)見表3；Pb，Cd 2 種元素采用石墨爐法測定，相關(guān)參數(shù)見表4 及表5；Cu 元素采用火焰法測定。火焰原子化器裝置參數(shù)設置：Cu 元素模式為火焰法；助燃氣為乙炔-空氣；積分模式為平均值；讀數(shù)時間為3 s；燃燒頭高度為6 mm。

表2 原子吸收分光光度計參數(shù)

表3 氫化物發(fā)生原子化器參數(shù)

表4 測定Pb 元素石墨爐升溫參數(shù)

表5 測定Cd 元素石墨爐升溫參數(shù)

2.3 方法學考察

線性關(guān)系考察：取2.1 項下各元素不同質(zhì)量濃度的標準溶液，按2.2 項下設定參數(shù)進行測定，以標準溶液質(zhì)量濃度（X）為橫坐標、吸光度（Y，3 次測量的平均值）為縱坐標繪制標準曲線，得線性方程YAs=0.573 855 0+0.068 943 3 X（R =0.999 7），YHg=0.008 581 0 +0.0376303X（R=0.9991），YPb=0.1352755+0.0044456X（R=0.997 3），YCd=0.016 762 3+0.044 322 8 X（R=0.996 3）；YCu=0.008 270+0.142 073 X（R=0.999 3）。

檢測限和定量限確定：取空白溶液連續(xù)進樣11 次，計算出空白值的標準偏差，靈敏度為標準曲線斜率。檢測限=3×標準偏差/靈敏度；定量限=10×標準偏差/靈敏度。結(jié)果As，Hg，Pb，Cd，Cu 5 種元素的檢測限分別為0.021，0.012，0.033，0.005 1，0.17 mg/kg；定量限分別為0.07，0.04，0.11，0.017，0.57 mg/kg。

精密度試驗：取5 種元素標準溶液單一濃度，重復檢測6 次，記錄各元素的吸光度。結(jié)果As，Hg，Pb，Cd，Cu 吸光度的RSD 分別為2.35%，2.08%，1.32%，1.04%，1.88%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同批（批號為181201）固本安神膠囊細粉0.20 g，精密稱定，平行制備6 份供試品溶液，檢測5 種元素含量。結(jié)果As，Hg，Pb，Cd，Cu 的平均含量分別為0.38，0.053，2.03，0.03，7.01 mg/kg，RSD 分別為3.62%，4.10%，2.33%，2.08%，4.85%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取同批（批號為181201）固本安神膠囊細粉0.20 g，共6 份，其中As，Hg，Pb，Cd，Cu 含量已知，分別加入等量As，Hg，Pb，Cd，Cu 標準溶液，微波消解后重新制成6 份供試品溶液，檢測5 種元素的含量，并計算回收率。結(jié)果見表6。

表6 5 種元素加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

2.4 樣品中5 種元素含量測定

對5 批固本安神膠囊細粉中As，Hg，Pb，Cd，Cu 元素的含量進行測定，結(jié)果Cu 元素的殘留量最多，其次為Pb 元素。詳見表7。

2.5 固本安神膠囊重金屬健康風險評估

2.5.1 每日最大可耐受攝入量EDI 計算

EDI=（C× F）/ BW

式中，C 為固本安神膠囊中重金屬質(zhì)量比（mg/kg）；F 為固本安神膠囊的每日服用量（4.8 g）；BW 為我國成年女性的平均體質(zhì)量（57.3 kg）。

每日暫定可耐受攝入量（PIDI）參照食品添加劑專家聯(lián)合委員會（JECFA）的報告，As，Hg，Pb，Cd，Cu 的PIDI分 別 為 0.002 14，0.000 57，0.003 57，0.000 83，0.500 00 mg/kg［8-12］。當EDI/ PIDI ＜1 時，可認為負荷的重金屬量對人體無明顯健康影響。

2.5.2 風險評估

在無明顯健康影響基礎上進行風險評估，目標危險商值（THQ）是廣泛認同的用于人體通過飲食攝取重金屬風險的評估方法。每日服用藥物的質(zhì)量與每日總體飲食的質(zhì)量比值是影響計算THQ 的重要因素。固本安神膠囊每日服用量為4.8 g，估算成人每天飲食量為1 500 g，故當THQ ＜0.003 2 時，固本安神膠囊不會對人體造成明顯風險影響；反之，則會造成明顯風險影響。

式中，C 為固本安神膠囊中重金屬質(zhì)量比（mg/kg）；F 為固本安神膠囊的每日服用量為4.8 g；ED 為暴露于含重金屬固本安神膠囊的年數(shù)（按30 計）；EF 為每年暴露于重金屬的天數(shù)（按30 計）；BW 為我國成年女性的平均體質(zhì)量（57.3 kg）；AT 為平均接觸含重金屬固本安神膠囊的時間（按平均人壽命70年×365天/年）。RFD 為美國環(huán)保署（US EPA）的日參考劑量：As，Hg，Pb，Cd，Cu 分別為0.000 3，0.000 3，0.001 5，0.001，0.04 mg/kg）［13］。重金屬及有害元素對人體健康的影響通常會是多種有害元素共同發(fā)揮作用，故總危險商值用TTHQ 表示，計算方法如下列公式。

TTHQ≤1.0，表明無明顯風險影響；TTHQ ＞1.0，表明對人體健康產(chǎn)生風險影響的可能性大；TTHQ＞10.0 ，表明存在慢性毒性效應。

2.5.3 評估結(jié)果

固本安神膠囊中As，Hg，Pb，Cd，Cu 5 種元素的EDI/ PTDI ＜1?？烧J為人體負荷固本安神膠囊中重金屬的量無明顯健康影響。以目標危險商值THQ ＜0.003 2為評價標準時，固本安神膠囊中As，Hg，Cd，Cu 的單一元素均未對人體健康產(chǎn)生風險影響；但Pb 元素的THQ=0.004 226 ＞0.003 2，可能對人體健康產(chǎn)生風險影響。Pb 元素過多也會導致TTHQ 指數(shù)超標，Pb 元素的貢獻度超過54%。詳見表8。

表8 固本安神膠囊安全風險評估結(jié)果

3 討論

重金屬及有害元素富集在中藥材中，與其毒副作用密切相關(guān)［14］。重金屬易在人體富集，不易分解，蓄積到一定程度會引起系列疾?。?5］。固本安神膠囊用于女性更年期前后諸癥，需長期用藥。因此，對其中As，Hg，Pb，Cd，Cu 5 種重金屬及有害元素的限量進行鑒定具有重要意義。本研究中應用原子吸收光譜儀對固本安神膠囊中以上5 種重金屬及有害元素進行了限量檢測，并對檢測方法學進行了考察。結(jié)果顯示，儀器設備精密度和準確度符合要求，試驗方法合理；固本安神膠囊中的重金屬及有害元素的含量符合2015 年版《中國藥典（一部）》的要求［16］。基于以上5 種重金屬及有害元素符合標準的情況下，本研究中對固本安神膠囊又進行了健康風險評估，結(jié)果顯示固本安神膠囊不會對人體造成明顯健康影響，但其中Pb 元素的THQ ＞0.003 2，可能對人體健康產(chǎn)生風險影響，故批量生產(chǎn)過程中應嚴格控制投料藥材中的Pb 元素的內(nèi)控標準。