武曉慧 ，李 青，徐玉喬，陳佳琪，楊 帆，劉婉瑩，李 凱

（1.西安醫(yī)學(xué)院肥胖與代謝病研究所，陜西西安 710021；2.空軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科暨病理學(xué)教研室，陜西西安 710032；3.西安醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院，陜西西安 710021）

骨骼肌是人體四大基本組織之一，骨骼肌病變嚴(yán)重影響人體運(yùn)動(dòng)功能，甚至危及生命［1］。近年來(lái)的研究表明，表觀遺傳學(xué)調(diào)控機(jī)制與骨骼肌細(xì)胞的分化調(diào)控及骨骼肌疾病如肌營(yíng)養(yǎng)不良癥、橫紋肌肉瘤等有密切聯(lián)系［2-5］，了解骨骼肌細(xì)胞的分化調(diào)控機(jī)制可以為這些疾病的發(fā)病機(jī)制研究提供理論依據(jù)。Ezh2是多梳族抑制性復(fù)合物2（polycomb repressive complex 2，PRC2）的催化活性亞單位，由746 個(gè)氨基酸組成，可以催化組蛋白H3K27 的甲基化，形成H3K27me3。H3K27me3 一般沉默靶基因的表達(dá)［6］?，F(xiàn)有的研究結(jié)果表明，Ezh2在E9.5 天的胚胎發(fā)育部位以及在未分化的骨骼肌成肌細(xì)胞中陽(yáng)性表達(dá)，但隨著胚胎的生長(zhǎng)發(fā)育逐漸被抑制［7］。在肌衛(wèi)星細(xì)胞系C2C12 成肌誘導(dǎo)分化過程中，Ezh2表現(xiàn)為減少趨勢(shì)［7］。在小鼠的骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中敲除Ezh2，會(huì)導(dǎo)致骨骼肌分化不良，肌纖維間脂肪沉著和纖維素增加，小鼠存活率下降，但在分化終末階段敲除Ezh2則不會(huì)明顯影響骨骼肌細(xì)胞分化［8-9］?？傊?，目前Ezh2對(duì)骨骼肌細(xì)胞分化的影響研究結(jié)果是其在成肌細(xì)胞和肌衛(wèi)星細(xì)胞階段發(fā)揮作用，在分化終末階段不發(fā)揮作用，但Ezh2在更早期的間充質(zhì)干細(xì)胞階段對(duì)骨骼肌細(xì)胞分化的具體影響尚不清楚［8，10］。本研究擬觀察在間充質(zhì)干細(xì)胞中敲除Ezh2的小鼠骨骼肌分化表型，明確此階段Ezh2缺失對(duì)骨骼肌分化造成的影響。此外，本研究擬進(jìn)一步觀察骨骼肌收縮的能量供應(yīng)細(xì)胞器-線粒體，在Ezh2缺失后是否受到相應(yīng)的影響，從亞細(xì)胞水平探索Ezh2對(duì)骨骼肌細(xì)胞分化的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

1.1.1Ezh2基因敲除小鼠的構(gòu)建 采用Cre-loxp方法構(gòu)建了Ezh2基因敲除小鼠。Ezh2flox/+雌雄小鼠（B6；129S1-Ezh2tm2Sho/J）及Prx1驅(qū)動(dòng)Cre小鼠（B6.Cg-Tg（Prrx1-cre）1Cjt/J，間充質(zhì)干細(xì)胞條件敲除工具鼠［11-12］）由空軍軍醫(yī)大學(xué)張豐副教授和葉菁教授惠贈(zèng)。通過Prx1-Cre工具小鼠與Ezh2flox/+小鼠雜交，獲得Ezh2flox/+Prx1-Cre+小鼠，再回交獲得Ezh2flox/floxPrx1-Cre+小鼠（以下簡(jiǎn)寫為Ezh2F/FPrx1-Cre）。同窩中基因型為Ezh2flox/+或Ezh2+/+Prx1-Cre+同性別小鼠作為對(duì)照組。小鼠為SPF 級(jí)，飼養(yǎng)于SPF 級(jí)屏障實(shí)驗(yàn)室，生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK（陜）2019-001；使用許可證編號(hào)：SYXK（陜）2019-001。本實(shí)驗(yàn)中所有動(dòng)物操作符合西安醫(yī)學(xué)院和空軍軍醫(yī)大學(xué)倫理委員會(huì)標(biāo)準(zhǔn)。

1.1.2 小鼠基因鑒定 提取鼠尾DNA 進(jìn)行PCR，反應(yīng)體系為20 μL，引物序列（5′-3′）如下：Ezh2Forward：CATGTGCAGCTTTCTGTTCA；Ezh2Reve?rse：CACAGCCTTTCTGCTCACTG；Prx1-CreForw?ard：TCTCTGGCTCTGATGTTGGCA；Prx1-CreRe?verse：CGCATAACCAGTGAAACAGC。PCR 結(jié)束后用EB 預(yù)染的1.6%瓊脂糖凝膠100 V 電泳30 min分離DNA，紫外凝膠成像儀成像后根據(jù)條帶位置判斷小鼠基因型。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 小鼠骨骼肌組織化學(xué)染色 脫頸椎法處死小鼠，取小鼠小腿腓腸肌部位骨骼肌，立即進(jìn)行冰凍切片，切片厚度10 μm，行蘇木素-伊紅染色（HE染色）、改良Gomori 三色染色（Modified Gomori Tri?chrome，MGT）及四氮唑還原酶（NADH-tetrarolium redutase，NADH-TR）染色。

HE 染色：用甲醛固定切片上的組織后進(jìn)行常規(guī)染色，脫水、透明后樹膠封片。

MGT 染色：Harris 蘇木精染色10 min 后用水沖洗，Gomori 氏溶液浸泡30 min，0.2%醋酸浸洗1 min，酒精脫水，二甲苯透明，樹膠封固。染色后，細(xì)胞核應(yīng)呈紅色，肌纖維呈暗綠色，膠原纖維呈亮綠色，線粒體呈紅色［13］。

四氮唑還原酶（NADH-tetrarolium redutase，NADH-TR）染色：將切片放入37 ℃孵箱內(nèi)孵育于含有Tric 緩沖液（PH7.4）、硝基四氮唑和NADH的染色液中30 min，蒸餾水洗，甘油明膠封固。染色后，Ⅰ型肌纖維呈藍(lán)紫色，Ⅱ型肌纖維呈淺灰色［14-15］。

1.2.2 免疫組化染色 腓腸肌組織用40 g/L 甲醛溶液固定48 h，常規(guī)脫水、浸蠟、包埋、切片厚度3 μm，切片脫蠟后過梯度酒精至水，檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液高壓修復(fù)抗原（pH6.0）；體積分?jǐn)?shù)3%H2O2孵育10 min；體積分?jǐn)?shù)5% 羊血清室溫封閉15 min；用1∶300 稀釋的細(xì)胞色素C（Cytochrome c，CytC，Abcam，美國(guó)），濕盒內(nèi)4℃孵育過夜；生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG 二抗37 ℃孵育15 min；辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液37 ℃孵育15 min，DAB 顯色，蘇木素襯染核30 s，常規(guī)脫水透明，中性樹膠封片。

1.2.3 電鏡分析 取腓腸肌組織，2.5%戊二醛固定液固定24 h 后，將組織塊切成1 mm3左右大小，注意縱橫方向，送空軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科電鏡室制樣，透射電鏡觀察并照相。

1.2.4 ATP 濃度測(cè)定 采用ATP 檢測(cè)試劑盒（S0026B，碧云天）進(jìn)行檢測(cè)。樣品每20 mg 組織加入100 μL 裂解液后進(jìn)行勻漿。4 ℃13 800 ×g離心5 min，取上清，用于后續(xù)的測(cè)定。ATP 濃度的測(cè)定：加100 μL ATP 檢測(cè)工作液到檢測(cè)孔內(nèi)，室溫放置3 min，消耗本底ATP。在檢測(cè)孔內(nèi)加入20 μL 樣品或標(biāo)準(zhǔn)品，迅速混勻，2 s 后用熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中ATP 的濃度。用BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定樣品中的蛋白濃度。ATP 的濃度以nmol/ng 蛋白的形式表示。

1.2.5 Western blot 法檢測(cè)蛋白表達(dá)量 取小鼠腓腸肌組織約100 mg，提取總蛋白，測(cè)定小鼠骨骼肌分化標(biāo)志物Myogenin、Desmin 和Myosin［15-18］的蛋白表達(dá)量。采用BCA 法測(cè)蛋白濃度（上海，碧云天），樣品上樣量為20 μg/孔，電泳結(jié)束后轉(zhuǎn)至PVDF 膜，將膜用50 g/L 脫脂奶粉室溫封閉1 h，1×PBST 洗膜5 min×3 次，置于1 抗中4℃搖床孵育過夜（兔H3K27me3 抗體，Abcam（15 ku）；兔Ezh2抗體，CST（98 ku）；鼠β-Tubulin 抗體，天津三箭（55 ku）；兔GAPDH 抗體，武漢三鷹（36 ku），兔Myosin 抗體，碧云天（19 ku）；兔Desmin 抗體，碧云天（53 ku）；小鼠Myogenin 抗體，SANTA CRUZ（34 ku）；兔CytC 抗體，Abcam（14 ku）。1×PBST 洗膜5 min×3 次，將膜置于二抗（中衫金橋羊抗兔或羊抗鼠IgG，濃度均為1∶5 000）中室溫孵育1 h，再用PBST 洗膜3 次，ECL 發(fā)光液發(fā)光。

1.2.6 逆轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real?time RT-qPCR）法檢測(cè)基因相對(duì)表達(dá)量 檢測(cè)骨骼肌細(xì)胞標(biāo)志物Myogenin、Ckm、p16Ink4a［19］、Msx1［20］、Atf3［21］、Pax3［22］、MhcIIb和線粒體標(biāo)志物COX1、CS、CytC、Tfam［23］、Pgc1α［24］、IDH3a的基因表達(dá)，取小鼠腓腸肌組織，使用RNA 提取試劑盒（日本TaKaRa）提取總RNA。反轉(zhuǎn)錄為cDNA，SYBR Green master mix（日本TaKaRa）催化下，在Real-Time PCR 儀（美國(guó)Bio-Rad）上進(jìn)行擴(kuò)增。待測(cè)基因的引物由大連寶生公司設(shè)計(jì)并合成，所測(cè)基因英文全稱及引物序列信息見表1、2。以小鼠GAPDH 為內(nèi)參。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布時(shí)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組間比較且方差齊時(shí)采用獨(dú)立樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，方差不齊的數(shù)據(jù)采用校正t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)為雙側(cè)，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ezh2 基因敲除小鼠骨骼肌細(xì)胞分化不良

經(jīng)觀察，Ezh2基因敲除小鼠的體型較小、體質(zhì)量較輕，精神狀態(tài)、毛發(fā)光澤度、飲食以及活動(dòng)情況如常，但敲除小鼠出生后死亡率較同窩對(duì)照組高，繁殖能力下降。敲除小鼠前肢出現(xiàn)向內(nèi)曲屈畸形。取6周齡小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。經(jīng)檢測(cè)，敲除組小鼠骨骼肌中Ezh2（t=3.327，P=0.029 2）和H3K27me3（t=4.330，P=0.012 3）的蛋白含量降低，表明成功構(gòu)建了Ezh2基因敲除小鼠（圖1A，均P< 0.05）。小鼠骨骼肌切片HE 染色結(jié)果顯示，敲除組肌纖維粗細(xì)不等，核一般在周邊，但部分細(xì)胞核發(fā)生內(nèi)移現(xiàn)象，如圖1B 右圖綠色箭頭所指處，此為病理性改變。小鼠骨骼肌分化相關(guān)基因中Myogenin（t=7.822，P=0.001 4，校正t檢驗(yàn)）和MhcIIb（t=4.668，P=0.043 0，校正t檢驗(yàn)）的mRNA 表達(dá)均明顯減少（均P<0.05；圖1C），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余基因表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。敲除組Myogenin（t=9.126，P=0.000 8）蛋白表達(dá)量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但Desmin（t=1.767，P=0.152 0）和Myo?sin（t=2.241，P=0.088 5）蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1D）。

表1 被測(cè)基因英文全稱Table 1 Full English name of detected genes

表2 被測(cè)基因引物序列信息Table 2 Primer sequence information of detected genes

2.2 Ezh2 敲除小鼠骨骼肌內(nèi)線粒體數(shù)量增加

MGT 染色顯示，骨骼肌細(xì)胞間無(wú)明顯膠原纖維增生。NADH-TR 染色顯示敲除組肌纖維粗細(xì)不等，I 型肌纖維內(nèi)NADH 增多，提示線粒體數(shù)量增加或NADH 增加。細(xì)胞色素C 免疫組化染色顯示敲除組骨骼肌I 型肌纖維內(nèi)線粒體數(shù)量增加或CytC 表達(dá)增加（圖2A）。為進(jìn)一步確定表型，采用電鏡在骨骼肌橫縱兩個(gè)切面上進(jìn)行了觀察，橫斷面上發(fā)現(xiàn)肌膜下線粒體數(shù)量明顯增加，呈團(tuán)塊狀堆積（圖2B）?？v切面發(fā)現(xiàn)骨骼肌肌原纖維粗細(xì)不等，肌原纖維間的線粒體異常增加。未見線粒體水腫及明顯的嵴斷裂。對(duì)照組Z 線、明帶和暗帶清晰可見，敲除組明帶清晰度略下降（圖2C）。

2.3 Ezh2 敲除小鼠骨骼肌內(nèi)線粒體可能為代償性增加

圖1 Ezh2 基因敲除小鼠骨骼肌分化表型Fig.1 Differentiation phenotype of skeletal muscle in Ezh2 knockout mice

為了判別敲除組骨骼肌細(xì)胞內(nèi)線粒體增加的表型是Ezh2缺失后促進(jìn)了線粒體增生還是線粒體功能異常所導(dǎo)致的代償性增生，進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)。經(jīng)檢測(cè)，線粒體結(jié)構(gòu)和生成相關(guān)基因的表達(dá)有不同程度的升高，敲除組線粒體相關(guān)基因CytC（t=7.248，P=0.0185）、Tfam（t=4.927，P=0.0388，校正t檢驗(yàn)）、Pgc1α（t=8.183，P=0.0012，校正t檢驗(yàn)）的表達(dá)明顯高于對(duì)照組（圖3A），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。細(xì)胞色素C 蛋白表達(dá)增加（t=3.009，P=0.0396；圖3B），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)測(cè)定，敲除組骨骼肌內(nèi)ATP 含量明顯少于對(duì)照組（t=4.189，P=0.0138；圖3C）。取2 周齡小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，此階段小鼠剛開始進(jìn)行自主活動(dòng)，此時(shí)對(duì)骨骼肌的利用還不充分。HE 染色結(jié)果顯示，2 周齡小鼠敲除組仍存在肌纖維粗細(xì)不等，直徑較為纖細(xì)，提示骨骼肌纖維分化不良，但NADH-TR 染色兩組無(wú)明顯差別（圖4A、B），說(shuō)明線粒體增加并不明顯。間充質(zhì)干細(xì)胞是骨骼、脂肪、骨骼肌等細(xì)胞共同的前體細(xì)胞，本實(shí)驗(yàn)小鼠的脂肪組織也發(fā)生了Ezh2敲除（圖4C）。因棕色脂肪富含線粒體，我們對(duì)6 周齡小鼠的棕色脂肪細(xì)胞中的線粒體進(jìn)行了電鏡觀察，兩組胞漿內(nèi)均滿布線粒體，并未發(fā)現(xiàn)敲除組線粒體數(shù)量的增加，線粒體形態(tài)無(wú)明顯異常（圖4D）。綜合上述證據(jù)，推測(cè)Ezh2缺失后由于線粒體ATP 產(chǎn)生能力下降，機(jī)體為了滿足運(yùn)動(dòng)需求而促使線粒體數(shù)量發(fā)生了代償性增加。

圖2 小鼠骨骼肌細(xì)胞特殊染色、免疫組化染色及電鏡照片F(xiàn)ig.2 Special staining，immunohistochemical staining and electron micrograph of skeletal muscle fibers of mice

3 討論

本研究利用在間充質(zhì)干細(xì)胞中敲除Ezh2的小鼠，觀察了骨骼肌細(xì)胞分化的表型。研究所用工具鼠的Cre 酶驅(qū)動(dòng)基因Prx1在胚胎E10.5 天有明確的表達(dá)［25］，與文獻(xiàn)報(bào)道的Ezh2在胎鼠體節(jié)發(fā)育陽(yáng)性表達(dá)最強(qiáng)階段的E9.5 天時(shí)間接近，利用Prx1可以較完全地敲除胎鼠間充質(zhì)干細(xì)胞中的Ezh2。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在出生后2 周齡和6 周齡的Ezh2敲除小鼠，均觀察到了骨骼肌細(xì)胞分化不良，具體表現(xiàn)為肌纖維粗細(xì)不等，肌原纖維粗細(xì)不均，核內(nèi)移等結(jié)構(gòu)性異常。實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了與骨骼肌細(xì)胞分化調(diào)控密切相關(guān)的一部分基因的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，Myogenin和MhcIIb的mRNA 表達(dá)明顯減少，Myogenin 蛋白表達(dá)量下降，提示這些重要的骨骼肌分化相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)受到影響，與形態(tài)學(xué)表型相一致。這些研究結(jié)果表明，Ezh2在間充質(zhì)干細(xì)胞階段對(duì)于骨骼肌細(xì)胞的分化是必須存在的，否則將引起分化障礙。

圖3 骨骼肌線粒體相關(guān)基因表達(dá)、CytC 蛋白表達(dá)和ATP 含量測(cè)定結(jié)果Fig.3 Expression of mitochondrial related genes，CytC protein and ATP content in skeletal muscle

圖4 2 周齡小鼠骨骼肌HE 和NADH-TR 染色及6 周齡小鼠背部棕色脂肪電鏡照片F(xiàn)ig.4 HE and NADH-TR staining of skeletal muscle of 2-week-old mice and electron micrograph of brown adipocytes in the back of 6-week-old mice

骨骼肌是高能量需求組織，尤其是運(yùn)動(dòng)時(shí)，對(duì)能量的需求明顯增多［25］。骨骼肌收縮時(shí)需要大量的能量用于離子泵、橫橋擺動(dòng)、細(xì)胞信號(hào)傳遞等，三磷酸腺苷（adenosine-triphosphate，ATP）為肌纖維收縮的直接能源物質(zhì)，而線粒體是能量物質(zhì)氧化產(chǎn)生ATP 的主要場(chǎng)所［26］。骨骼肌細(xì)胞的線粒體根據(jù)所在位置不同，一般分為肌膜下線粒體和肌原纖維間的線粒體，前者被認(rèn)為與動(dòng)脈血循環(huán)氧的提供有關(guān)，主要為保持肌膜完整性以及各種離子和代謝產(chǎn)物的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)提供能量，后者則與肌肉收縮時(shí)能量的提供有關(guān)［27］。既往的研究沒有關(guān)注Ezh2缺失對(duì)于線粒體造成的影響。本研究通過骨骼肌特異性染色，線粒體氧化呼吸鏈結(jié)構(gòu)蛋白CytC 的檢測(cè)以及電子顯微鏡觀察了線粒體的形態(tài)和分子表型。實(shí)驗(yàn)中我們觀察到在敲除組Ⅰ型肌纖維（Ⅰ型肌纖維又稱慢縮肌纖維，含有較多的線粒體；Ⅱ型肌纖維又稱快縮肌纖維，含有較少的線粒體［14］）中存在線粒體NADH 異常增多和標(biāo)志物CytC 異常增多的現(xiàn)象。這促使我們通過進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)去尋找原因。在電鏡下，我們觀察到敲除組6 周齡小鼠肌膜下線粒體和肌原纖維間的線粒體數(shù)量均異常增加，呈團(tuán)塊狀堆積，但未見線粒體水腫及明顯的嵴斷裂。線粒體生成相關(guān)基因Tfam、Pgc1α的表達(dá)均升高，免疫組化染色和West?ern blot 結(jié)果均證實(shí)敲除組的CytC 蛋白含量均加。假設(shè)增加的線粒體是功能正常的線粒體，那么不論是動(dòng)脈血氧的利用還是ATP 的生成均應(yīng)提高。但實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，敲除組小鼠骨骼肌內(nèi)ATP含量是減少的，這提示實(shí)驗(yàn)中觀察到的線粒體增加很可能是一種代償性表現(xiàn)。為了觀察是否在骨骼肌還未經(jīng)運(yùn)動(dòng)刺激的幼齡動(dòng)物體內(nèi)是否有相同的現(xiàn)象，我們觀察了2 周齡小鼠的骨骼肌，此時(shí)小鼠處在剛剛開始自主運(yùn)動(dòng)的發(fā)育時(shí)期。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2 周齡Ezh2缺失小鼠骨骼肌內(nèi)NADH 與對(duì)照組并無(wú)明顯差別。因本實(shí)驗(yàn)所用小鼠為間充質(zhì)干細(xì)胞敲除模型，Ezh2敲除范圍較為廣泛，骨骼肌、骨、脂肪等間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的組織內(nèi)均發(fā)生了敲除，我們又選取了富含線粒體的棕色脂肪組織作為觀察對(duì)象，觀察線粒體表型。經(jīng)觀察，棕色脂肪細(xì)胞內(nèi)線粒體并無(wú)增加現(xiàn)象，線粒體形態(tài)亦無(wú)明顯異常。這說(shuō)明，Ezh2缺失未能在其他組織細(xì)胞引起線粒體的增加，進(jìn)一步間接地證明6 周齡小鼠骨骼肌內(nèi)線粒體增加的原因很有可能是Ezh2缺失引起線粒體ATP 產(chǎn)生能力不足的情況下，機(jī)體為了滿足自身的運(yùn)動(dòng)需求，出現(xiàn)的一種代償性調(diào)節(jié)，使得線粒體數(shù)量增加［28］。目前可以確定，Ezh2的缺失損害了骨骼肌線粒體產(chǎn)生ATP 的能力，但因線粒體ATP 產(chǎn)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)非常多，具體哪個(gè)或哪些環(huán)節(jié)發(fā)生了障礙，尚有待進(jìn)一步系統(tǒng)性的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行探索。

綜上所述，本研究的結(jié)果證實(shí)，在小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞成肌分化階段，Ezh2發(fā)揮了重要的作用，Ezh2在本階段促進(jìn)骨骼肌細(xì)胞的分化。本研究還發(fā)現(xiàn)Ezh2缺失后會(huì)對(duì)骨骼肌細(xì)胞內(nèi)線粒體產(chǎn)生ATP 的能力造成不良影響，線粒體代償性增加，具體環(huán)節(jié)有待進(jìn)一步的研究。