梁明坤， 韋宇婷， 梁杏秋， 覃 輝， 鐘 靜*

(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科， 廣西 南寧 530011； 2.廣西中醫(yī)藥大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 ， 廣西 南寧 530001)

0 引言

抑郁癥(Depression)又稱抑郁障礙，主要臨床特征是顯著而持久的心境低落，屬于心境障礙的主要類型.近年來，抑郁癥患病率呈上升趨勢，不僅威脅患者的健康，使生活質(zhì)量下降，而且給家庭和社會造成極大負(fù)擔(dān)，已成為嚴(yán)重的社會和醫(yī)療問題[1].一旦患病將是一個痛苦的過程，每次發(fā)作持續(xù)至少2周以上、長者甚或數(shù)年，并且易反復(fù)發(fā)作，甚至有自殺傾向[2].

然而，到目前為止，抑郁癥的具體病因尚不完全清楚，多因素參與了發(fā)病的過程，包括生物、心理與社會環(huán)境等方面因素，其中生物學(xué)因素涉及了遺傳、神經(jīng)生化、神經(jīng)內(nèi)分泌等方面[3]，這就使得抑郁癥的研究受到了限制，加上還沒有特異性的檢查項目，使得很多早期抑郁癥患者得不到合理的治療，西醫(yī)西藥的治療雖然有一定的療效，但是副作用大[4]，病情容易反復(fù)，有些甚至需要終身服藥.因此，很有必要尋找一種更為安全有效的抑郁癥治療方法.

玫瑰花為薔薇科植物玫瑰的干燥花蕾，其性微溫，味甘、微苦，歸肝、脾、胃經(jīng)，具有舒肝解郁、和血調(diào)經(jīng)、開竅化淤、疏肝醒脾等功效[5].玫瑰花是一種具有較高藥用價值和經(jīng)濟(jì)價值的藥用植物，藥用歷史悠久，歷代草本均有玫瑰花在藥用方面的記載[6].隨著醫(yī)療模式的轉(zhuǎn)變和人們保健意識的增強(qiáng)，玫瑰花被制成顆粒劑，在心腦血管疾病治療、腫瘤預(yù)防、抗衰老和美容保健方面都有應(yīng)用[7,8].

目前，研究玫瑰花對抑郁癥的治療作用及其機(jī)理還是很少.研究發(fā)現(xiàn)玫瑰花粉具有較理想的抗抑郁活性[9].玫瑰花顆粒比玫瑰花粉較安全穩(wěn)定、便攜，更適合推廣.但玫瑰花顆粒的抗抑郁作用及其可能的作用機(jī)制尚不夠明確.本研究采用慢性不可預(yù)知性溫和應(yīng)激( CUMS) 建立小鼠抑郁模型，通過小鼠體重測試、強(qiáng)迫游泳實驗、懸尾實驗、曠場實驗來評價玫瑰花顆粒對CUMS模型小鼠的抗抑郁作用，同時通過 ELISA試劑盒檢測小鼠血清中5-HT的含量表達(dá)，初步探討玫瑰花顆?？挂钟舻淖饔脵C(jī)理.

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 動物

SPF級成年雄性ICR小鼠，體重20～22 g，由湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司提供，許可證號SCXK(湘)2016-0002.飼養(yǎng)溫度為(24±1) ℃，光照12 h黑白循環(huán)，自由攝食、飲水.實驗前，于飼養(yǎng)環(huán)境中適應(yīng)1周.

1.1.2 藥物與試劑

玫瑰花顆粒(廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院制劑中心生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z41021897)；鹽酸氟西汀膠囊(蘇州中化藥品工業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字：H20064844)；小鼠5羥色胺(5-HT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒(貨號：JL12087，上海將來實業(yè)股份有限公司).

1.1.3 主要儀器

ANY-maze動物行為分析系統(tǒng)(美國Stoelting公司)；連續(xù)波長檢測儀(INFINITE M200PRO)；自制全透明強(qiáng)迫游泳圓筒及懸尾實驗、曠場實驗檢測箱.

1.2 實驗方法

1.2.1 造模、分組及給藥

將60只ICR小鼠隨機(jī)分為正常對照組，抑郁模型組，鹽酸氟西汀組(1.58 mg/kg)，玫瑰花顆粒低(3.67 g/kg)、中(7.34 g/kg)、高(14.68 g/kg)劑量組，每組10只.除正常組對照組，各組小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，進(jìn)行21 d造模，采用孤養(yǎng)結(jié)合慢性不可預(yù)見性溫和刺激方法造模，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表不可預(yù)見性每天給予1種應(yīng)激，每種刺激平均出現(xiàn)3次且不連續(xù)出現(xiàn).具體方法包括：夾尾5 min、禁食24 h、禁水24 h、游泳6 min(25 ℃)、懸尾6 min、污籠24 h、無墊料.造模3周后，進(jìn)行行為學(xué)測試，小鼠強(qiáng)迫游泳及懸尾實驗不動時間明顯增加，可以初步判別小鼠造模成功.造模成功后，小鼠按10 mL/kg進(jìn)行灌胃給藥，每天1次，連續(xù)28 d，正常對照組及抑郁模型組給予等容積生理鹽水灌胃.

1.2.2 體重檢測

實驗開始后，分別記錄給藥第1 d、7 d、14 d、28 d小鼠體重，以觀察各組實驗小鼠體重的變化.

1.2.3 強(qiáng)迫游泳實驗(FST)[10]

動物具體分組及給藥方式、劑量、時間同1.2.1，于末次給藥1 h后，將小鼠放于直徑25 cm，高40 cm的透明圓柱形玻璃缸中，缸內(nèi)水深15 cm，水溫(24±1 ℃)，老鼠停止在水中掙扎，或表現(xiàn)出漂浮狀態(tài)，只有輕微的身體運(yùn)動才能使它們的頭漂浮在水面上，表現(xiàn)出絕望狀態(tài)，從小鼠入水后計時6 min，適應(yīng)2 min，記錄后4 min內(nèi)累計不動時間(s).

1.2.4 懸尾實驗(TST)[11]

動物具體分組及給藥方式、劑量、時間同1.2.1，于末次給藥1 h后，用不粘膠將小鼠尾部1.5 cm處懸掛于懸尾箱內(nèi)，使其呈倒懸狀態(tài)，頭部距離地面30 cm，小鼠為了能夠克服不正常體位而掙扎活動，但在活動的一段時間內(nèi)出現(xiàn)間斷性不動，表現(xiàn)出失望心理狀態(tài)，記錄小鼠停止掙扎不動或無任何活動的時間.用攝像設(shè)備記錄6 min，適應(yīng)2 min，記錄后4 min累計不動時間(s).

1.2.5 曠場實驗(OFT)[12]

動物具體分組及給藥方式、劑量、時間同1.2.1，于末次給藥1 h后，將小鼠放入敞箱，敞箱裝置為長寬各60 cm，高25 cm，底面劃一個30 cm×30 cm等邊方格的木箱，使其與外框組成“回”字形方格，內(nèi)面用黑漆涂滿.將小鼠從邊緣放入裝置內(nèi)，用攝像設(shè)備觀察小鼠7 min，適應(yīng)2 min，記錄后5 min內(nèi)總運(yùn)動距離及穿越至中心方格次數(shù)(四爪均進(jìn)入的方格方可計數(shù))，在觀察下一只小鼠之前，用75%的酒精和1%的次氯酸鈉徹底清潔敞箱.

1.2.6 單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-HT的測定

最末次行為實驗結(jié)束后，立即麻醉，心臟采血0.5～1.0 mL，室溫下靜置90 min，4 ℃ 3 000 r/min離心15 min后，取上清液，-20 ℃保存待測.嚴(yán)格按照ELISA試劑盒操作說明書步驟測定實驗小鼠血清5-HT的含量.

1.2.7 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果與討論

2.1 玫瑰花顆粒對CUMS模型小鼠體重的影響

在給藥第1 d、7 d、14 d、28 d，給藥前后各組小鼠體重均無顯著性差異.其結(jié)果如圖1所示.

圖1 玫瑰花顆粒對CUMS模型小鼠體重的影響

2.2 玫瑰花顆粒對CUMS模型小鼠強(qiáng)迫游泳(FST)的影響

給藥第7 d、14 d和28 d，與對照組相比，模型組小鼠強(qiáng)迫游泳不動時間明顯增加(P<0.05)；與模型組相比，玫瑰花顆粒高、中劑量組小鼠強(qiáng)迫游泳不動時間均顯著減少 (P<0.05，P<0.01)，而鹽酸氟西汀組小鼠不動時間均無明顯變化.其結(jié)果如圖2所示.

與對照組對比：*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較：#P<0.05,##P<0.01

2.3 玫瑰花顆粒對CUMS模型小鼠懸尾實驗不動時間的影響

給藥第7 d、14 d和28 d，與對照組相比較，模型組小鼠懸尾不動時間顯著增加(P<0.05)；與模型組相比，給藥第7 d，鹽酸氟西汀組和玫瑰花顆粒高劑量組小鼠的懸尾不動時間均顯著減少 (P<0.01，P<0.05 )，但給藥第14 d及28 d，鹽酸氟西汀組和玫瑰花顆粒各給藥組小鼠的懸尾不動時間均無明顯改善(P> 0.05).其結(jié)果如圖3所示.

與對照組對比：*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較：#P<0.05,##P<0.01

2.4 玫瑰花顆粒對CUMS模型小鼠曠場實驗的影響

在曠場實驗,給藥第7 d、14 d和28 d，與對照組相比，模型組小鼠水平總運(yùn)動距離明顯減少(P<0.01)；與模型組相比，鹽酸氟西汀組和玫瑰花顆粒低、中、高劑量組均能明顯增加CUMS模型小鼠的水平總運(yùn)動距離(P<0.05，P<0.01)；而鹽酸氟西汀組在給藥第14 d后小鼠的曠場實驗水平總運(yùn)動距離無明顯變化(P>0.05).在給藥第7 d后，鹽酸氟西汀組及玫瑰花顆粒各劑量組均能明顯增加曠場實驗中小鼠進(jìn)入中心方格的次數(shù)(P<0.05，P<0.01 )，而在給藥第14 d和28 d后，鹽酸氟西汀組及玫瑰花顆粒各劑量組均無效(P>0.05).其結(jié)果如圖4、5所示.

與對照組對比：*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較：#P<0.05,##P<0.01

與對照組對比：*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較：#P<0.05,##P<0.01

2.5 玫瑰花顆粒對CUMS模型小鼠血清5-HT的影響

與對照組相比，模型組血清5-HT含量明顯低于對照組(P<0.01)；給藥28 d后，與模型組相比，玫瑰花顆粒高、中劑量組血清5-HT含量明顯增高(P<0.01，P<0.05).其結(jié)果如圖6所示.

隨著發(fā)病率逐年上升，學(xué)者們對抑郁癥的研究也越來越關(guān)注.為研究抑郁發(fā)病及機(jī)制，研究者經(jīng)過不斷探索，對抑郁癥不同的動物模型進(jìn)行實驗研究，而良好、有效的動物模型更能真實反映研究的客觀性與科學(xué)性，有利于抑郁癥的臨床治療[13].由于慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激抑郁模型的造模方法與臨床上抑郁癥患者發(fā)病主要原因接近，能較好地模擬抑郁狀態(tài)[14].因此，在這項研究中，采用傳統(tǒng)的建模方法長期不可預(yù)知溫和刺激經(jīng)典模型建立小鼠抑郁模型.其理論研究依據(jù)與人類對于抑郁癥中慢性、低水平的應(yīng)激源導(dǎo)致我國抑郁癥的發(fā)生并加速中國抑郁癥進(jìn)行發(fā)展的機(jī)理更接近，小鼠利用單獨飼養(yǎng)模式模擬人類失去社會和家庭支持的孤獨狀態(tài)[15-18].

實驗研究結(jié)果分析顯示，玫瑰花顆粒給藥第1 d、7 d、14 d、28 d，給藥前后各組小鼠體重均無顯著性差異，說明玫瑰花顆粒對小鼠體重?zé)o影響，其原因可能是玫瑰花顆粒是玫瑰花的提取物制成的顆粒劑，與特殊工藝制備得到的玫瑰花粉末發(fā)揮藥效的部位不一致.與對照組相比，抑郁模型組小鼠在曠場實驗中水平總運(yùn)動距離顯著縮短，且進(jìn)入中心方格次數(shù)顯著減少.水平總運(yùn)動距離縮短說明了動物進(jìn)行的活動度降低，進(jìn)入中心方格次數(shù)減少反映了模型組小鼠對新鮮生活環(huán)境的好奇程度降低，強(qiáng)迫游泳和懸尾不動時間的延長反映了動物的行為絕望狀態(tài)的增加[19].可見，該動物模型表現(xiàn)為抑郁，活動減少，興趣喪失和抑郁癥的臨床表現(xiàn)相似，這種抑郁狀態(tài)可以維持?jǐn)?shù)月，是較理想的抑郁動物模型[20].

3 結(jié)論

研究結(jié)果表明，與模型組相比，不同劑量玫瑰花顆粒均能顯著增加小鼠的自發(fā)活動及運(yùn)動距離，可見玫瑰花顆粒具有較好的抗抑郁作用.本研究中的強(qiáng)迫游泳不動時間的實驗數(shù)據(jù)提示玫瑰花顆粒不但具有明顯的抗抑郁作用，且隨著劑量的升高，抗抑郁的效果更好.單胺遞質(zhì)不足是抑郁癥發(fā)病的原因之一[21,22]，Elisa實驗結(jié)果顯示玫瑰花顆粒能顯著增加小鼠血清5-HT含量.因此，加強(qiáng)對單胺遞質(zhì)的研究，有助于中醫(yī)藥對抑郁癥的預(yù)防與治療.

綜上所述，玫瑰花顆粒能明顯改善小鼠抑郁行為，且能顯著增加血清5-HT含量，但具體的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究.