高博韜 黃昕艷 趙剛

(佳木斯大學(xué) 1口腔醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；2黑龍江省口腔生物醫(yī)學(xué)材料及臨床應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)

口腔癌是頭頸部最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病機(jī)制尚不明確，預(yù)后差，患者5年生存率較低〔1〕。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2018 年全球口腔癌新增患者35.4萬例，占全球癌癥新增人數(shù)的2.0%，其中口腔癌死亡人數(shù)17.7萬例〔2〕。口腔癌因高死亡率及嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量而備受關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)口腔鱗狀細(xì)胞癌組織學(xué)特征多為癌細(xì)胞呈鱗狀分化并侵犯周圍正常組織，癌癥發(fā)展過程不僅受到蛋白信號(hào)通路調(diào)控，且許多非編碼RNA也發(fā)揮了重要作用，其中關(guān)于LncRNA作用的研究日益增多。本文將對(duì)一些LncRNA在口腔癌進(jìn)程中的作用進(jìn)行綜述，為口腔癌預(yù)防與靶向治療提供新思路。

1 LncRNA影響腫瘤發(fā)生的作用機(jī)制

近年來發(fā)現(xiàn)有很多非編碼RNA參與腫瘤發(fā)病機(jī)制，其中LncRNA對(duì)于腫瘤發(fā)生發(fā)展的調(diào)控受到較多關(guān)注。LncRNA是在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中廣泛存在。本文將LncRNA影響腫瘤發(fā)生的作用機(jī)制大致分為兩類：

1.1通過抑制信號(hào)通路蛋白轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生級(jí)聯(lián)效應(yīng)影響口腔癌發(fā)生 Wnt/β-catenin通路是調(diào)節(jié)癌癥增殖遷移及耐藥性的重要信號(hào)通路。口腔癌的增殖轉(zhuǎn)移與Wnt/β-catenin通路密切相關(guān)，如Liu等〔3〕發(fā)現(xiàn)LncRNA FTH1P3高表達(dá)可以通過增強(qiáng)PI3K/Akt/GSK3b/Wnt/β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)促進(jìn)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的遷移和侵襲。也有研究證明MALAT1可以通過抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞增殖、侵襲、遷移、EMT，并抑制細(xì)胞凋亡〔4〕。相反MEG3 卻能通過抑制 Wnt/β-catenin信號(hào)通路起到抑制腫瘤的作用〔5〕。

1.2充當(dāng)microRNA海綿直接抑制蛋白轉(zhuǎn)錄影響口腔癌發(fā)生 研究發(fā)現(xiàn)LncRNA能夠通過ceRNA軸抑制miRNA活性，進(jìn)而對(duì)癌癥的發(fā)生發(fā)展進(jìn)行調(diào)控〔6〕。Li等〔7〕通過實(shí)驗(yàn)證明HOXC13-AS能夠通過靶向miR-378g競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合HOXC13啟動(dòng)子上游序列，進(jìn)而上調(diào)表達(dá)，高表達(dá)的HOXC13促進(jìn)口腔癌的侵襲與遷移。

2 與口腔癌發(fā)生密切相關(guān)的LncRNA

到目前為止，人類在基因組中發(fā)現(xiàn)的LncRNA 已超過1×106個(gè)，現(xiàn)已證明LncRNA的失調(diào)與人類癌癥的發(fā)生發(fā)展有密切聯(lián)系〔8〕，其中有的能夠促進(jìn)增殖或減少凋亡，有的能夠調(diào)節(jié)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。

2.1LncRNA CASC9 Yang等〔9〕通過RT-qPCR檢測(cè)35例配對(duì)口腔鱗癌和癌旁組織中CASC9的表達(dá)水平。用RT-qPCR檢測(cè)口腔癌細(xì)胞系和正常口腔黏膜細(xì)胞系中CASC9的表達(dá)水平，結(jié)果顯示癌組織CASC9的表達(dá)遠(yuǎn)高于正常口腔組織。除此之外，AKT激活劑加入CASC9敲除的口腔癌細(xì)胞后，自噬體密度顯著降低，敲除CASC9的口腔癌細(xì)胞中激活A(yù)KT信號(hào)通路后p-mTOR的表達(dá)顯著增加，可以得出結(jié)論：CASC9通過調(diào)節(jié)口腔癌中AKT/mTOR信號(hào)通路來調(diào)節(jié)自噬和凋亡〔9〕。Chen等〔10〕將94例患者分為低CASC9表達(dá)組(n=59)和高CASC9表達(dá)組(n=35)，經(jīng)過數(shù)據(jù)分析，發(fā)現(xiàn)TSCC組織中的CASC9水平與腫瘤直徑、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。通過熒光素酶報(bào)告分析驗(yàn)證了miR-423a-5p與SOX12 3-UTR的直接結(jié)合。通過增殖與遷移實(shí)驗(yàn)鑒定了用siCtrl或siCASC9或siCASC9 + miR-423-5p抑制劑轉(zhuǎn)染的TSCC細(xì)胞增殖，siCASC9處理降低了TSCC細(xì)胞遷移和侵襲率，miR-423-5p抑制劑減輕了siCASC9處理導(dǎo)致的遷移和侵襲率的下降。最后提出CASC9通過與miR-423-5p/SOX12相互作用調(diào)節(jié)舌鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。

由此可見LncRNA CASC9能夠通過激酶方式調(diào)節(jié)蛋白產(chǎn)生，進(jìn)而對(duì)口腔癌細(xì)胞自噬和凋亡進(jìn)行非常顯著的調(diào)控。除此之外還能夠通過與miR-423-5p/SOX12海綿效應(yīng)來調(diào)控舌鱗癌。

2.2LncRNA HOTAIR Wu等〔11〕在2015年首次發(fā)現(xiàn)HOTAIR與口腔癌之間的關(guān)系，證明了LncRNA HOTAIR能夠通過募集EZH2和抑制E-鈣黏蛋白在口腔鱗狀細(xì)胞癌中促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。

Lu等〔12〕研究證明HOTAIR在口腔癌干細(xì)胞中的表達(dá)降低導(dǎo)致EMT特性降低，進(jìn)而證明HOTAIR介導(dǎo)的口腔癌調(diào)節(jié)是通過調(diào)節(jié)EMT標(biāo)記來進(jìn)行的。Tao等〔13〕通過構(gòu)建攜帶sh-HOTAIR的慢病毒載體并將其轉(zhuǎn)染到HN4和Cal27中，證明敲低HOTAIR可顯著抑制OSCC的遷移、侵襲和EMT。還通過生信預(yù)測(cè)miR-326可以與HOTAIR高度堿基互補(bǔ)配對(duì)，并通過實(shí)驗(yàn)證明miR-326可以逆轉(zhuǎn)HOTAIR敲低對(duì)口腔癌細(xì)胞遷移、侵襲和EMT的影響，隨后又預(yù)測(cè)到MTA2是miR-326的潛在靶標(biāo)，提出改善口腔癌治療可以利用HOTAIR-miR-326-MTA2軸調(diào)控影響癌細(xì)胞的侵襲能力。Su等〔14〕研究還證明，HOTAIR基因多態(tài)性不僅影響口腔癌的發(fā)病率，還調(diào)節(jié)其發(fā)展。Wang等〔15〕對(duì)HOTAIR與口腔癌的研究則從自噬和順鉑方面進(jìn)行，發(fā)現(xiàn)當(dāng)HOTAIR沉默時(shí)，口腔癌細(xì)胞的凋亡急劇增加，caspase3、caspase7和bim的表達(dá)上調(diào)，而Mcl1、survivin和bcl-2的表達(dá)下調(diào)。研究提示HOTAIR通過加速自噬和減少細(xì)胞凋亡在口腔癌細(xì)胞中充當(dāng)癌基因，沉默HOTAIR可提高口腔癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性。

總之，LncRNA HOTAIR能夠通過HOTAIR-miR-326-MTA2軸及調(diào)節(jié)EMT標(biāo)記來調(diào)控口腔癌的發(fā)生發(fā)展，并可以提高口腔癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果均代表靶向HOTAIR可能是口腔癌治療的新途徑。

2.3Linc00958 Chen等〔16〕在2019年首次證明了Linc00958能夠促進(jìn)口腔鱗狀細(xì)胞癌中的細(xì)胞增殖和遷移。

由于LncRNA調(diào)節(jié)基因表達(dá)的方式取決于LncRNA的細(xì)胞位置〔17〕，Chen等〔16〕結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果YBX2與LINC00958正相關(guān)，而與miR-627-5p負(fù)相關(guān)，證明Linc00958調(diào)節(jié)miR-627-5pYBX2軸以促進(jìn)口腔鱗狀細(xì)胞癌的增殖和遷移。Wang等〔18〕除了證明Linc00958能夠促進(jìn)口腔癌進(jìn)展外，還證明了Linc00958能夠靶向miR-185-5p進(jìn)而發(fā)揮海綿作用。Wang等〔18〕通過RT-PCR結(jié)果證實(shí)miR-185-5p的表達(dá)與YWHAZ表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。且通過Western印跡可以發(fā)現(xiàn)Linc00958的過表達(dá)可以增強(qiáng)YWHAZ表達(dá)水平，最終揭示出LINC00958/miR-185-5p/YWHAZ軸可以調(diào)節(jié)口腔癌細(xì)胞的增殖與遷移。由此可見，像大多數(shù)LncRNA調(diào)控口腔癌的機(jī)制一樣，LINC00958調(diào)節(jié)口腔癌的發(fā)生發(fā)展主要是通過海綿效應(yīng)來完成。

2.4LncRNA FGD5-AS1 Liu等〔19〕首先證明FGD5-AS1能夠促進(jìn)口腔癌的發(fā)生及發(fā)展。

Liu等〔19〕將30對(duì)口腔癌組織和癌旁組織標(biāo)本對(duì)比，證明FGD5-AS1在口腔癌組織中異常上調(diào)，而敲除FGD5-AS1可抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移和侵襲并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，推測(cè)FGD5-AS1是口腔癌發(fā)生過程中的致癌基因。并通過實(shí)驗(yàn)證明，F(xiàn)GD5-AS1通過與miR-520b結(jié)合從而上調(diào)USP21的表達(dá)影響口腔癌的發(fā)展。Ge等〔20〕除了發(fā)現(xiàn)在口腔癌中LncRNA FGD5-AS1表達(dá)上調(diào)，還發(fā)現(xiàn)FGD5-AS1能夠充當(dāng)miR-153-3p的海綿及miR-153-3p直接靶向MCL1，最終得出結(jié)論FGD5-AS1通過miR-135-3p/MCL1軸在口腔癌細(xì)胞中促進(jìn)增殖、遷移和侵襲?？傊?，F(xiàn)GD5-AS1可能是口腔癌臨床治療的潛在治療靶標(biāo)。

2.5其他與口腔癌相關(guān)的LncRNA 除以上LncRNA以外，不斷有新LncRNA與口腔癌之間的關(guān)系被逐漸發(fā)現(xiàn)，如維生素D能通過MAPK途徑抑制LncRNA LUCAT1進(jìn)而抑制口腔鱗狀細(xì)胞癌的增殖〔21〕，LncRNA NR4A1AS能夠通過去甲基化上調(diào)miR-221并促進(jìn)口腔鱗狀細(xì)胞癌中的細(xì)胞增殖〔22〕，RP11-874J12.4通過RP11-874J12.4/miR-19a-5p/EBF1軸促進(jìn)口腔鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生等〔23〕。除了促進(jìn)之外，少部分LncRNA還可以對(duì)口腔癌的發(fā)生發(fā)展進(jìn)行抑制，如LncRNA MEG3可以通過海綿化miR-548d-3p來調(diào)節(jié)口腔鱗狀細(xì)胞癌的JAK-STAT通路進(jìn)而抑制遷移并促進(jìn)細(xì)胞凋亡〔24〕。

3 展 望

由于近些年對(duì)LncRNA在口腔癌中表達(dá)水平的研究逐漸深入，越來越多的LncRNA被證明直接或間接地能夠影響口腔癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及侵襲，文中所提及的LncRNA只是口腔癌相關(guān)LncRNA中的冰山一角，在口腔癌中尚有大量的LncRNA作用機(jī)制仍有待研究。因此，對(duì)口腔癌相關(guān)LncRNA的研究將對(duì)臨床方面的口腔癌診斷、治療和預(yù)后產(chǎn)生重大影響。