張承舜，張寒瀟，曹新，呂鵬，朱莉娟，余曙光

(成都中醫(yī)藥大學(xué) 針灸推拿學(xué)院/第三附屬醫(yī)院，四川 成都 610075)

心血管疾病在全世界范圍內(nèi)造成高死亡率和嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，2019年全球有5.23億心血管病患者，其中死亡人數(shù)為1860萬(wàn)，占全球總死亡人數(shù)的三分之一[1]。血脂異常是導(dǎo)致心血管疾病的重要因素，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化、心律失常、糖尿病、阿爾茨海默病等慢性疾病的發(fā)生發(fā)展[2]。我們的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示[3]，12周高脂肪、高膽固醇飲食能夠誘導(dǎo)載脂蛋白E基因敲除(Apolipoprotein E-deficient,ApoE-/-)小鼠出現(xiàn)自發(fā)性室上性心律失常，發(fā)生率為60%。自主神經(jīng)系統(tǒng)失衡與心律失常的發(fā)生密切相關(guān)，自主神經(jīng)系統(tǒng)由交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)組成。交感神經(jīng)系統(tǒng)過(guò)度興奮會(huì)增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度,導(dǎo)致鈣超負(fù)荷，出現(xiàn)心律失常[4]。心率變異性(Heart Rate Variability,HRV)是用于評(píng)估連續(xù)心跳之間的時(shí)間變化的一種非侵入性測(cè)量方法[5]，能夠反映交感神經(jīng)系統(tǒng)和副交感神經(jīng)系統(tǒng)狀態(tài)。HRV分析主要分為時(shí)域分析(Time-Domain Analysis)、頻域分析(Frequency-Domain Analysis)和非線性分析(Non-Linear Analysis)，通過(guò)以上三種分析參數(shù)能夠量化HRV，在臨床HRV測(cè)量中，HRV低值能夠反映不良心血管事件，與心律失常和死亡率升高有關(guān)[6]，目前關(guān)于血脂異常導(dǎo)致心臟自主神經(jīng)功能紊亂的研究漸受關(guān)注[7]，既往研究表明針灸療法影響自主神經(jīng)功能[8]，本研究以內(nèi)關(guān)和足三里為代表，以期明確其對(duì)高脂血癥誘導(dǎo)心律失常自主神經(jīng)功能的調(diào)節(jié)作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

59只7周齡SPF級(jí)健康雄性野生型C57BL/6J小鼠及相同背景ApoE-/-小鼠，體質(zhì)量(22±2)g，由江蘇集萃藥康生物科技有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(蘇)2018-0008。所有小鼠飼養(yǎng)于四川省針灸與時(shí)間生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室獨(dú)立通氣籠(Individual Ventilated Cage,IVC)系統(tǒng)，自由獲取食物與飲水，恒定溫度(23±1)℃，相對(duì)濕度：40%～50%，光暗周期12 h∶12 h。

1.1.2 動(dòng)物分組

適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將野生型C57B6/J小鼠作為空白組(n=11)，給予SPF維持飼料。將ApoE-/-小鼠隨機(jī)分為模型組(n=10)，針刺內(nèi)關(guān)組(PC6+針，n=8)，針刺足三里組(ST36+針，n=10)，艾灸內(nèi)關(guān)組(PC6+灸，n=10)，艾灸足三里組(ST36+灸，n=10)，給予12周高脂飼料(1.25%膽固醇，20.35%脂肪)喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料均由四川省成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案通過(guò)成都中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(倫理編號(hào)：2018-11)。

1.2 主要材料與儀器

一次性無(wú)菌針灸針(環(huán)球牌；規(guī)格：0.25 mm×0.25 mm×13 mm；生產(chǎn)批號(hào)：181020)；自制小鼠固定裝置(專利號(hào)：ZL201920957720.5)；自制小鼠前肢艾灸裝置(專利號(hào)：ZL201920958794.0)；自制小鼠后肢艾灸裝置(專利號(hào)：ZL201920976758.7)；艾條(湖南省臨湘市湖香艾生物科技有限公司；規(guī)格：0.5 mm×0.5 mm×18 cm；特殊訂制產(chǎn)品)，5 mL一次性無(wú)菌注射器針頭(浙江京環(huán)醫(yī)療用品有限公司；生產(chǎn)批號(hào)：20180219P75)。

Powerlab數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)、LabChart 8.2.3心電圖記錄軟件(AD Instruments；澳大利亞)，R500小動(dòng)物麻醉機(jī)(瑞沃德生命科技有限公司；中國(guó)深圳)、異氟烷(瑞沃德生命科技有限公司；中國(guó)深圳)。

1.3 內(nèi)關(guān)、足三里選穴

參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》“常用動(dòng)物針灸穴位及圖譜”[9]選取小鼠雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴，內(nèi)關(guān)穴位于前肢內(nèi)側(cè)，腕關(guān)節(jié)上方0.3 cm處的橈、尺骨間；足三里穴位于膝關(guān)節(jié)下方，腓骨小頭下0.3 cm處的肌溝中。

1.4 動(dòng)物治療

針刺組與艾灸組從高脂飼料喂養(yǎng)第1天開始針刺或艾灸干預(yù)。將小鼠固定在本課題組自行設(shè)計(jì)的小鼠固定裝置上，暴露雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴，采用一次性無(wú)菌針灸針，直刺進(jìn)針1～2 mm；采用相同規(guī)格針灸針，將小鼠固定在本課題組自制專利后肢艾灸裝置上，針刺雙側(cè)足三里穴，直刺進(jìn)針約3 mm；針刺內(nèi)關(guān)與針刺足三里組均留針30 min，1次/d，連續(xù)針刺5 d，共治療12周。將艾灸內(nèi)關(guān)組小鼠捆綁固定于小鼠固定裝置上，在小鼠前肢艾灸裝置上固定艾條，與內(nèi)關(guān)穴皮膚保持1～1.5 cm距離；將艾灸足三里組小鼠固定后，在小鼠后肢艾灸裝置上固定艾條，與足三里穴皮膚保持1～1.5 cm距離；艾灸組均施灸30 min，1次/d，連續(xù)艾灸5 d，共治療12周?？瞻捉M和模型組小鼠采取相同方式抓取及相同時(shí)間固定。

1.5 心率變異性測(cè)定方法

結(jié)束12周干預(yù)后，對(duì)所有小鼠進(jìn)行二導(dǎo)聯(lián)心電圖檢查，預(yù)先去除交流電干擾。打開PowerLab 數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)、LabChart 8.2.3心電圖記錄軟件、小動(dòng)物麻醉機(jī)，從將小鼠放入動(dòng)物麻醉誘導(dǎo)盒開始計(jì)時(shí)，采用3%異氟烷吸入麻醉，待小鼠完全麻醉后，將其轉(zhuǎn)移到心電圖記錄平臺(tái)上，同時(shí)通過(guò)面罩以1%異氟烷維持麻醉。提捏小鼠右側(cè)前肢、右側(cè)后肢、左側(cè)后肢處皮膚，分別插入5 mL一次性無(wú)菌注射器針頭，分別將接有負(fù)極、地線、正極的電極夾在注射器針柄處。所有的電極設(shè)置和系統(tǒng)調(diào)整在5 min內(nèi)完成，采用PowerLab數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)進(jìn)行20 min的心電圖數(shù)據(jù)采集。數(shù)據(jù)采集完成后，為了統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，減少干擾和誤差，在數(shù)據(jù)分析時(shí)，選取15～20 min內(nèi)5 min穩(wěn)定心電圖，在LabChart 8 軟件中HRV模塊對(duì)連續(xù)RR間期進(jìn)行時(shí)域分析、頻域分析、非線性參數(shù)分析，包括正常RR間期的標(biāo)準(zhǔn)偏差(Standard Deviation of Normal R-R Intervals，SDNN),連續(xù)差異均方根(TheRoot Mean Square of Successive Differences，RMSSD),總功率(Total Power),極低頻(Very Low Frequency，VLF),低頻(Low Frequency，LF),高頻(High Frequency，HF),LF/HF,瞬時(shí)節(jié)拍變異性的標(biāo)準(zhǔn)偏差(Standard Deviation of Instantaneous Beat-to-BeatVariability，SD1),連續(xù)R-R間期的長(zhǎng)期標(biāo)準(zhǔn)偏差(Long-term Standard Deviation of Continuous R-R Intervals，SD2),SD1/SD2，繪制HRV Classifier Plot散點(diǎn)圖，采用逆向回放對(duì)電腦自動(dòng)分析下的散在散點(diǎn)進(jìn)行人工識(shí)別和偽差去除，以確保選擇區(qū)間內(nèi)RR間期的真實(shí)性。

2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

3 結(jié)果

采用高脂飲食喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠12周，發(fā)現(xiàn)模型組心律失常成模率為60%。

3.1 各組小鼠心率變異性Classifier Plot散點(diǎn)圖的比較

空白組小鼠復(fù)雜性與RR間期分別在0.72～0.87 ms、148～168 ms范圍內(nèi)波動(dòng)，散點(diǎn)集中，無(wú)異位搏動(dòng)；模型組小鼠復(fù)雜性與RR間期分別在0.65～1.4 ms、120～164 ms范圍內(nèi)波動(dòng)，散點(diǎn)分散、跨度大，出現(xiàn)異位搏動(dòng)(圖1)。

注：橫坐標(biāo)代表RR間期，縱坐標(biāo)代表復(fù)雜性(Complexity)，藍(lán)色散點(diǎn)代表正常心率，紅色散點(diǎn)代表心律失常

針刺內(nèi)關(guān)組小鼠復(fù)雜性與RR間期分別在0.66～0.92 ms、127～148 ms范圍內(nèi)，與模型組相比，散點(diǎn)更為集中、跨度更小，無(wú)心律失常；針刺足三里組小鼠復(fù)雜性與RR間期分別在0.62～0.83 ms、160～176 ms范圍內(nèi)，與模型組相比，散點(diǎn)更為集中，無(wú)異位搏動(dòng)，與針刺內(nèi)關(guān)組相比，RR間期更小(圖2)。

圖2 針刺內(nèi)關(guān)組、針刺足三里組小鼠代表性心率變異性散點(diǎn)圖

艾灸內(nèi)關(guān)組小鼠復(fù)雜性與RR間期分別在0.64～0.87 ms、132～164 ms范圍內(nèi)，與模型組相比，散點(diǎn)更為集中、跨度更小，無(wú)異位搏動(dòng)；與針刺內(nèi)關(guān)組相比，復(fù)雜性更為集中，而RR間期較為分散。艾灸足三里組小鼠復(fù)雜性與RR間期分別在0.64～0.82 ms、148～172 ms范圍內(nèi)，與模型組相比：散點(diǎn)更為集中，無(wú)異位搏動(dòng)；與針刺足三里組相比，RR間期較為分散(圖3)。

圖3 艾灸內(nèi)關(guān)組、艾灸足三里組小鼠代表性心率變異性散點(diǎn)圖

3.2 各組小鼠時(shí)域分析的比較

12周干預(yù)后，與空白組相比，模型組SDNN顯著降低(P<0.001)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比，針刺內(nèi)關(guān)及艾灸內(nèi)關(guān)組對(duì)SDNN均呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)(P=0.076或P=0.053)。與空白組相比，模型組RMSSD呈現(xiàn)出降低趨勢(shì)(P=0.071)。

3.3 各組小鼠頻域分析的比較

12周干預(yù)后，與空白組相比，模型組Total Power、VLF、LF、HF均顯著降低(P<0.05或P<0.01)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比，針刺內(nèi)關(guān)及艾灸內(nèi)關(guān)組VLF均顯著增加(P<0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與針刺內(nèi)關(guān)相比，針刺足三里組VLF顯著降低(P<0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

注：模型組與空白組比較，***P<0.001；空白組(n=11)，模型組(n=10)，針刺內(nèi)關(guān)組(n=8)，針刺足三里組(n=9)，艾灸內(nèi)關(guān)組(n=10)，艾灸足三里組(n=10)

注：模型組與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01；針刺內(nèi)關(guān)組與模型組比較，#P<0.05；艾灸內(nèi)關(guān)組與模型組比較，?P<0.05；針刺足三里組與針刺內(nèi)關(guān)組比較，△P<0.05?？瞻捉M(n=11)，模型組(n=10)，針刺內(nèi)關(guān)組(n=8)，針刺足三里組(n=9)，艾灸內(nèi)關(guān)組(n=10)，艾灸足三里組(n=10)

3.4 各組小鼠非線性分析的比較

表1 各組小鼠非線性參數(shù)

12周干預(yù)后，與空白組相比，模型組SD2顯著降低(P<0.001)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比，針刺內(nèi)關(guān)組及艾灸內(nèi)關(guān)組SD2均顯著增加(P<0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 討論

本研究在高脂飼料喂養(yǎng)的ApoE-/-小鼠中觀察到血脂異常導(dǎo)致的自主神經(jīng)功能變化，與以往單純研究心律失常的普通飲食組相比，高脂肪、高膽固醇造成的心律失常能更好地模擬實(shí)際生活中由于血脂升高導(dǎo)致的心血管慢性病變，表現(xiàn)為HRV降低，交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)均抑制。并且在本研究中對(duì)比了刺激方法(針刺及艾灸)的不同，以及經(jīng)穴特異性(內(nèi)關(guān)與足三里)，發(fā)現(xiàn)與空白組相比，模型組HRV參數(shù)整體顯著下降，表現(xiàn)為總體RR間期的估計(jì)值SDNN、Total Power、VLF、LF、HF、SD2顯著下降，而針刺或艾灸內(nèi)關(guān)穴刺激能夠顯著升高部分HRV參數(shù)(VLF、SD2)，使交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)均興奮；并且針刺內(nèi)關(guān)效果優(yōu)于艾灸內(nèi)關(guān)效果，而足三里刺激無(wú)改善HRV作用。

高脂血癥造成病理產(chǎn)物堆積，阻滯心脈，使臟腑功能受損，可導(dǎo)致心律失常的發(fā)生，使患者生活質(zhì)量下降，增加死亡率，造成沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。在ApoE-/-小鼠中，高脂飲食導(dǎo)致的血脂異常造成心電圖變化，表現(xiàn)為心率加快、P波時(shí)限增長(zhǎng)及QTc延長(zhǎng)，并且捕捉到心律失常[3]。HRV來(lái)自交感神經(jīng)系統(tǒng)和副交感神經(jīng)系統(tǒng)的相互競(jìng)爭(zhēng)，通過(guò)測(cè)定心臟自主神經(jīng)系統(tǒng)的狀態(tài)，反映生理狀態(tài)和心律失常、心肌梗死以及心源性死亡等病理狀態(tài)。既往研究表明[10]，膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平增高的患者HRV降低，并且冠心病死亡率增加。針對(duì)無(wú)心臟病受試者短期HRV(5～10 min)的調(diào)查顯示[11]，RMSSD和Total Power都與LDL-C成反比(P<0.01)。給予無(wú)冠狀動(dòng)脈疾病的家兔高膽固醇飲食，發(fā)現(xiàn)家兔出現(xiàn)心肌肥厚和心臟交感神經(jīng)增生，同時(shí)心室顫動(dòng)的易損性增加[12]；HRV分析發(fā)現(xiàn)：在室性心律失常發(fā)作前30分鐘交感神經(jīng)活動(dòng)增加[4]。此外，HRV降低和心律失常及心血管疾病致死率存在關(guān)聯(lián)性，其預(yù)測(cè)價(jià)值獨(dú)立于傳統(tǒng)的臨床風(fēng)險(xiǎn)分層因素[13]。與不易感室顫的動(dòng)物相比，在運(yùn)動(dòng)期間，易感心室顫動(dòng)的動(dòng)物的HRV減少更多[14]。隨訪研究表明[6]，在114例死亡病例中，有約66%的死者(75/114)患有心律失常，幸存者和死者之間的HRV時(shí)域和頻域參數(shù)以及非線性動(dòng)力學(xué)指標(biāo)有顯著差異[13]。在本研究中使用的ApoE-/-小鼠在高脂飲食的喂養(yǎng)下，易出現(xiàn)動(dòng)脈粥樣斑塊，同時(shí)我們觀察到模型組整體HRV降低，時(shí)域分析指標(biāo)SDNN顯著降低(P<0.001)，RMSSD呈現(xiàn)出降低趨勢(shì)(P=0.071)，結(jié)合Classifier散點(diǎn)圖能夠看出，模型組RR變化更大，散點(diǎn)分散、跨度大，并且出現(xiàn)心律失常，表明低HRV可能與血脂異常升高有關(guān)。

針灸療法治療心血管疾病歷史悠久，針灸對(duì)自主神經(jīng)具有調(diào)節(jié)作用。通過(guò)刺激正中傳入神經(jīng)(內(nèi)關(guān)穴)可改善貓交感神經(jīng)興奮引起的心肌缺血；在臨床試驗(yàn)中，心臟復(fù)律后接受針刺治療的患者的房顫復(fù)發(fā)率更低，與接受抗心律失常藥胺碘酮治療的患者相似，針刺還能顯著減少陣發(fā)性房顫患者的癥狀性房顫發(fā)作次數(shù)和持續(xù)時(shí)間[4,15]。在本研究中針刺內(nèi)關(guān)(P=0.076)或艾灸內(nèi)關(guān)(P=0.053)呈現(xiàn)出改善SDNN的趨勢(shì)，說(shuō)明針刺或艾灸可能從改善HRV指標(biāo)達(dá)到降低心律失常的目的，內(nèi)關(guān)穴刺激作為一種正中神經(jīng)刺激，能夠通過(guò)調(diào)節(jié)高脂血癥誘導(dǎo)的HRV異常，起到降低心律失常，保護(hù)心臟的作用。

在本研究中，與空白組相比，模型組Total Power、VLF、LF和HF等頻域分析參數(shù)都呈現(xiàn)降低趨勢(shì)。在頻域分析中，VLF與全因死亡率的相關(guān)性比LF或HF更強(qiáng)[16]，VLF降低反映迷走神經(jīng)抑制，而交感神經(jīng)阻滯不影響VLF，VLF還受到運(yùn)動(dòng)、體溫和腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的影響[16]。在本研究中，與空白組相比，模型組VLF顯著降低，表明模型組的潛在心律失常發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)更高(P<0.01)，而針刺或艾灸內(nèi)關(guān)后，VLF顯著降低(P<0.05)，說(shuō)明針刺或艾灸內(nèi)關(guān)能夠通過(guò)升高VLF，降低心血管不良事件的發(fā)生，但足三里刺激不能得到相同的結(jié)果，說(shuō)明內(nèi)關(guān)穴刺激在治療高脂血癥誘導(dǎo)的心血管疾病上效果優(yōu)于足三里。在血脂異常升高導(dǎo)致的心律失常小鼠中，與空白組相比，模型組LF和HF均顯著降低(P<0.05)，而針刺對(duì)LF有升高的趨勢(shì)(P=0.062)。表明模型組交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)均受到抑制，而針刺主要對(duì)交感神經(jīng)產(chǎn)生影響。羅麗平等[17]觀察針刺“內(nèi)關(guān)+間使”對(duì)健康人HRV的影響，發(fā)現(xiàn)針刺5min時(shí)HF升高，LF/HF降低，說(shuō)明針刺的即刻效應(yīng)主要興奮迷走神經(jīng)，而與本研究中的頻域分析參數(shù)完全相反，說(shuō)明即刻效應(yīng)與12周長(zhǎng)期針刺對(duì)HRV的影響是完全不同的，長(zhǎng)期針刺主要興奮交感神經(jīng)，而對(duì)迷走神經(jīng)的興奮作用不強(qiáng)。非線性分析參數(shù)SD2與頻域分析參數(shù)LF相關(guān)，在本研究中，與空白組相比，模型組LF與SD2均顯著降低(P<0.05或P<0.001)，趨勢(shì)一致，表明模型組交感神經(jīng)抑制，針刺或艾灸內(nèi)關(guān)后交感神經(jīng)興奮。既往研究顯示，SD1與壓力反射敏感度相關(guān)，但在本研究中各組間SD1差異不顯著，說(shuō)明可能與壓力反射敏感度關(guān)系不明顯。

歷代醫(yī)籍中對(duì)飲食導(dǎo)致的血脂異常和肥胖疾病做出論述，清代張志聰在《黃帝內(nèi)經(jīng)靈樞集注》中提到“脂”“膏”的來(lái)源是由于“蒸津液化”后天水谷導(dǎo)致，精微在外使“皮肉膏肥”，在內(nèi)使“膏脂豐流”，導(dǎo)致高脂血癥的發(fā)生。陽(yáng)明經(jīng)為多氣多血之經(jīng)，主血所生病，足三里穴為足陽(yáng)明胃經(jīng)下合穴，具有通利三焦氣血、健脾除痰、消滯助運(yùn)、化濁降脂的作用，在臨床上廣泛應(yīng)用于治療高脂血癥[18]、高血壓等心胸疾病。內(nèi)關(guān)穴是治療心胸疾病的特定穴，同時(shí)內(nèi)關(guān)穴傳入神經(jīng)C6～T1與心臟支配神經(jīng)節(jié)段C8～T10部分重疊，內(nèi)關(guān)刺激具有改善自主神經(jīng)系統(tǒng)功能從而治療心律失常的作用，但關(guān)于刺激內(nèi)關(guān)或足三里穴治療血脂異常導(dǎo)致心率變異性或心律失常的研究較少。電針內(nèi)關(guān)激活正中神經(jīng)傳入通路，可抑制心肌缺血大鼠的交感神經(jīng)活性[19]，減少梗死面積，改善心功能和心臟重構(gòu)，起到與減少交感神經(jīng)與Ikr電流間相互作用、交感神經(jīng)切除術(shù)和β受體阻滯劑類似的抑制交感作用[20]；電針足三里穴顯著改善心力衰竭大鼠壓力反射功能和血液動(dòng)力學(xué)參數(shù)，與交感神經(jīng)系統(tǒng)的激活減少有關(guān)[21]。在本研究中內(nèi)關(guān)穴刺激發(fā)揮主要作用，而足三里穴刺激對(duì)HRV參數(shù)改善不明顯，說(shuō)明在改善血脂異常誘導(dǎo)的HRV改變上，內(nèi)關(guān)穴具有明顯的特異性，足三里對(duì)心律失常的作用不如內(nèi)關(guān)有效。足陽(yáng)明胃經(jīng)經(jīng)脈循行經(jīng)過(guò)心胸部，經(jīng)脈所過(guò)，主治所及，故足三里能夠治療心胸疾病，但本研究發(fā)現(xiàn)，足三里在血脂異常誘導(dǎo)的HRV改變上的作用不及內(nèi)關(guān)穴，是由于內(nèi)關(guān)穴為心包經(jīng)絡(luò)穴、八脈交會(huì)穴，對(duì)心臟疾病的直接作用優(yōu)于足三里通過(guò)調(diào)整氣血的間接作用。臨床研究[22]使用雙側(cè)內(nèi)關(guān)與足三里配合治療，明顯降低患者血脂水平(膽固醇、甘油三酯、LDL-C)，結(jié)合本研究顯示出：不論是在治療血脂升高，還是治療血脂異常誘導(dǎo)的心臟疾病，內(nèi)關(guān)穴具有更明顯的作用。

在本研究刺激方法上，針刺優(yōu)于艾灸，說(shuō)明機(jī)械刺激效果優(yōu)于溫?zé)岽碳ぁＰ难芟到y(tǒng)受到不斷變化的機(jī)械信號(hào)的刺激，包括拉伸、壓縮、彎曲和剪切力[23]。針刺作為一種機(jī)械刺激，能夠降低L型Ca2+通道表達(dá)，減少鈣離子內(nèi)流，從而降低家兔快速型心律失常發(fā)生率[24]。而艾灸作為一種溫?zé)岽碳?，需要一定的時(shí)間-熱量的積聚才能達(dá)到治療效果，與38℃艾灸熱刺激相比，46℃對(duì)心動(dòng)過(guò)緩大鼠的心臟調(diào)節(jié)作用更大，更能促進(jìn)穴區(qū)局部肥大細(xì)胞脫顆粒[25]。本研究結(jié)果顯示，在治療血脂等病理產(chǎn)物堆積導(dǎo)致的疾病，宜使用針刺更佳。

本研究以血脂異常誘導(dǎo)心律失常ApoE-/-小鼠作為研究對(duì)象，通過(guò)內(nèi)關(guān)或足三里穴位刺激觀察其HRV變化，發(fā)現(xiàn)內(nèi)關(guān)優(yōu)于足三里，針刺效果優(yōu)于艾灸，研究結(jié)果有助于闡釋內(nèi)關(guān)穴刺激對(duì)長(zhǎng)期高脂血癥合并心律失常時(shí)自主神經(jīng)系統(tǒng)的作用，為選取適當(dāng)?shù)拇碳し椒把ㄎ惶峁┙梃b。