宋 煜，黃玉珠，余宇燕，林滿遍，黃 群，林 舒

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州350122； 2.福州市中醫(yī)院，福建 福州 350001）

巖痛方為福州市中醫(yī)院腫瘤科臨床經(jīng)驗(yàn)方，由延胡索、乳香、沒藥、川烏等多味中藥組成，具有理氣止痛、化瘀消癥功效，臨床用于改善癌癥患者的氣滯血瘀型癌性疼痛癥狀，有較好療效。本方原將藥材磨粉后調(diào)油局部外敷，并配合透皮治療儀使用，易在皮膚上殘留藥汁而弄臟衣物，并會(huì)對(duì)皮膚造成一定的刺激性，故將其制成凝膠貼膏以改善用藥依從性。凝膠貼膏是指原料藥物與適宜的親水性基質(zhì)材料經(jīng)過混勻后，涂布于背襯材料上所制成的貼膏劑［1］，具有眾多優(yōu)點(diǎn)，例如載藥量大，適合中藥處方多組分的給藥；不污染衣物，貼敷舒適，可重復(fù)揭貼；與皮膚相容性好，提高藥物的滲透量使生物利用度率提高；致敏性低，安全性好，可隨時(shí)終止給藥等［2?4］。

本實(shí)驗(yàn)以初黏力、持黏力為量化指標(biāo)，并結(jié)合凝膠貼膏的賦形性及外觀、殘留情況、涂布性、滲布狀況等感官評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用Plackett?Burman 設(shè)計(jì)、最陡爬坡試驗(yàn)、Box?Behnken 響應(yīng)面法優(yōu)化巖痛凝膠貼膏基質(zhì)處方，以期制備膏體均勻、黏性較高、貼敷無殘留、涂布性好的制劑，并為其臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器 FA2004N 型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；NH?S1 型恒溫水浴鍋（上海錦屏儀器儀表有限公司）。

1.2 試劑與藥物 聚丙烯酸鈉（NP?700，美國Asland 公司，批號(hào)810570A）；聚乙烯醇（PVA1788，批號(hào) H1809081）、明膠（批號(hào)1804047）（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；高嶺土（上海展云化工有限公司，批號(hào)911159）；甘羥鋁（批號(hào)20180116）、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA?2Na）（宿遷華夏生化科技有限公司）；酒石酸（天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)20121027）；甘油（西隴科股份有限公司，批號(hào)181116）；蓖麻油（華龍藥業(yè)有限公司，批號(hào)20190226）。巖痛方提取液（自制，批號(hào)20190502）。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取液制備 取乳香、沒藥、石菖蒲粉末共220 g，加入12 倍量水浸泡60 min，水蒸氣蒸餾法提取3 h 收集揮發(fā)油，密封避光保存。另取延胡索、川烏、姜黃粉末210 g，加入8 倍量90%乙醇回流提取3 次，每次1 h，合并3 次提取液，濾過，將濾液濃縮至相對(duì)密度為1.15，加入上述揮發(fā)油混勻，即得。

2.2 凝膠貼膏制備 取處方量明膠與PVA，加入少量純化水預(yù)先過夜溶脹，置于60 ℃水浴鍋中充分溶解，作為A 相；取處方量甘油、NP?700、高嶺土，攪拌均勻，作為B 相；取“2.1”項(xiàng)下提取液，與蓖麻油混合，作為C 相；取處方量甘羥鋁、酒石酸、EDTA?2Na，加純化水，作為D 相；先將D 相與C 相混合，然后與A 相混合，再全部加到B相中不斷研磨直至體系均勻，立即涂布于10 cm×10 cm 無紡布上，覆膜即得，密封保存。

2.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)建立 參照2020 年版《中國藥典》第四部通則及相關(guān)文獻(xiàn)，以初黏力、持黏力、賦形性、感官評(píng)價(jià)的綜合評(píng)分為指標(biāo)篩選凝膠貼膏處方。

2.3.1 初黏力 參考文獻(xiàn)［5?6］，取“2.2”項(xiàng)下10 cm 凝膠貼膏1 片，揭開防黏層后膏面向上，固定于30°傾角的不銹鋼斜面上，取不同直徑的鋼球，從凝膠貼膏與鋼板接觸點(diǎn)自由滾下，測(cè)試6次，在≥4 次時(shí)可視為粘住該鋼球。以能粘住最大鋼球直徑為滿分（30 分），其余以（黏住鋼球直徑測(cè)得值／最大鋼球直徑）×30 計(jì)分。

2.3.2 持黏力 參考文獻(xiàn)［7］，取“2.2”項(xiàng)下4 cm×6.5 cm 凝膠貼膏1 片，去防黏層，以4 cm×4 cm 為測(cè)試面積，粘貼于垂直放置的清潔不銹鋼板上，凝膠貼膏下端懸掛100 g 砝碼，記錄其完全從鋼板上脫落的時(shí)間，重復(fù)3 次，取平均值。以實(shí)驗(yàn)所得數(shù)值最高者為滿分（30 分），其余以（測(cè)得值／最高值）×30 計(jì)分。

2.3.3 賦形性 參考文獻(xiàn)［5］，取“2.2”項(xiàng)下凝膠貼膏1 片，置于溫度37 ℃、相對(duì)濕度64%條件下30 min 后取出，于60°傾角鋼板上固定24 h，觀察表面是否出現(xiàn)流淌、手觸有無變黏拉絲的現(xiàn)象，滿分15 分，計(jì)分規(guī)則為①無流淌，不變黏不拉絲，12～15 分；②無流淌，變黏但不拉絲，7.5～10.5 分；③無流淌，變黏且拉絲，3～6 分；④流淌，0～3 分。

2.3.4 感官評(píng)價(jià) 參考文獻(xiàn)［7?8］，指標(biāo)包括①外觀，膏體細(xì)膩無空洞為5 分，依空洞多少分為6個(gè)等級(jí)，1 分為一級(jí)，依次按0～5 分計(jì)分；②殘留情況，揭開薄膜無殘留為5 分，按殘留程度分為6 個(gè)等級(jí)，1 分為一級(jí)，依次按0～5 分計(jì)分；③涂布性，在凝膠貼膏制備過程中易于涂布為10分，依涂布的難易程度分為5 個(gè)等級(jí)，2.5 分為一級(jí)，依次按0～10 分計(jì)分；④滲布狀況，無紡布背面無液體或油狀液體滲出為5 分，依滲布輕重程度分為6 個(gè)等級(jí)，1 分為一級(jí)，依次按0～5分計(jì)分。

2.4 Plackett?Burman 設(shè)計(jì) 根據(jù)臨床用量，往每個(gè)處方中固定加入提取液2 g，采用Plackett?Burman 設(shè)計(jì)對(duì)其他因素進(jìn)行安排，共12 次試驗(yàn)，以“2.3”項(xiàng)下綜合評(píng)分為指標(biāo)，因素水平見表1，結(jié)果見表2。

表1 Plackett?Burman 設(shè)計(jì)因素水平Tab.1 Factors and levels for Plackett?Burman design

通過Design?Expert 8.0.6 軟件對(duì)表2 數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，得到回歸方程為綜合評(píng)分＝66.14＋6.80A－0.051B＋1.68C＋10.40D－4.93E＋7.30F－5.28G（r＝0.972 1），方差分析見表3。由此可知，模型P＜0.05，表明它具有顯著性；各因素影響程度依次為甘羥鋁用量＞PVA 用量＞NP?700 用量＞甘油用量＞酒石酸用量＞高嶺土用量＞明膠用量，NP?700、甘羥鋁、PVA 用量有顯著影響（P＜0.05）。

表2 Plackett?Burman 設(shè)計(jì)結(jié)果Tab.2 Results of Plackett?Burman design

表3 Plackett?Burman 設(shè)計(jì)方差分析Tab.3 Analysis of variance for Plackett?Burman design

2.5 最陡爬坡實(shí)驗(yàn) 通過最陡爬坡實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步確定凝膠貼膏處方水平范圍，結(jié)果見表4。由此可知，試驗(yàn)號(hào)4 綜合評(píng)分最高，故Box?Behnken 響應(yīng)面法選擇其作為因素中心點(diǎn)，試驗(yàn)號(hào)3～5 作為3個(gè)主要因素的水平，即NP?700 用量為3.5～5.5 g，PVA 用量為0.25～0.45 g，甘羥鋁用量為0.06～0.10 g。

表4 最陡爬坡實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.4 Results of steepest ascent experiments

2.6 Box?Behnken 響應(yīng) 面法 在Plackett?Burman設(shè)計(jì)、最陡爬坡實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用Box?Behnken 響應(yīng)面法作進(jìn)一步優(yōu)化，因素水平見表5，結(jié)果見表6。

表5 Box?Behnken 響應(yīng)面法因素水平Tab.5 Factors and levels for Box?Behnken response surface method

通過Design?Expert8.0.6 軟件對(duì)表6 進(jìn)行二次多元回歸分析，得到方程為綜合評(píng)分＝81.30－8.38A－2.99B－2.32C－4.06AB＋5.98AC＋0.69BC－12.36A2－17.05B2－9.47C2（r＝0.983 8），方差分析見表7。由此可知，模型極顯著（P＝0.000 2），失擬項(xiàng)P＝0.101 9＞0.05，可用于預(yù)測(cè)；因素A、AC、A2、B2、C2均為顯著項(xiàng)（P＜0.05），以因素A更明顯。響應(yīng)面分析見圖1，最終確定最優(yōu)基質(zhì)處方為甘羥鋁用量0.07 g，NP?700 用量4.45 g，PVA 用量0.33 g，綜合評(píng)分為83.30 分。

圖1 各因素響應(yīng)面圖Fig.1 Response surface plots for various factors

表6 Box?Behnken 響應(yīng)面法結(jié)果Tab.6 Results of Box?Behnken response surface method

表7 Box?Behnken 響應(yīng)面法方差分析Tab.7 Analysis of variance for Box?Behnken response surface method

2.7 驗(yàn)證試驗(yàn) 按最優(yōu)處方制備3 批凝膠貼膏，進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見表8。由此可知，所得制劑表面平整，氣泡空洞少，黏性適中，綜合評(píng)分與預(yù)測(cè)值83.30 分接近，表明該方法穩(wěn)定可靠，預(yù)測(cè)性良好。

表8 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab.8 Results of verification tests（n＝3）

3 討論

巖痛方提取液是凝膠貼膏中的藥物，預(yù)試時(shí)加藥前后貼膏性能變化不明顯，但考慮到在不同基質(zhì)處方配比下影響程度仍有可能會(huì)有所差異，故在每一處方中都加入2 g 提取液。

在巖痛凝膠貼膏基質(zhì)處方的篩選過程中，由于影響因素較多，故需要經(jīng)過多次摸索。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合Plakett?Burman 設(shè)計(jì)、Box?Behnken 響應(yīng)面法、最陡爬坡實(shí)驗(yàn)簡化了篩選工序。其中Plackett?Burman設(shè)計(jì)旨在篩選實(shí)驗(yàn)過程中的影響成品質(zhì)量的重要因素［9?10］，結(jié)果證實(shí)NP?700、甘羥鋁與PVA 對(duì)凝膠貼膏的性能有顯著影響；通過最陡爬坡試驗(yàn)較快速地逼近最大響應(yīng)區(qū)域［11?12］，并迅速確定下一步Box?Behnken 響應(yīng) 面法的中心點(diǎn)；Box?Behnken 響應(yīng)面法則將因素和響應(yīng)值關(guān)系用模型擬合，并確立優(yōu)化后凝膠貼膏處方的因素用量水平，具有試驗(yàn)次數(shù)少、精度高、可連續(xù)分析因素各水平、預(yù)測(cè)精準(zhǔn)的優(yōu)勢(shì)［13?14］。上述3 種方法相結(jié)合后成功優(yōu)化了處方，所得凝膠貼膏膏體均勻平整，黏性較強(qiáng)，可反復(fù)貼揭，無殘留，并且制備時(shí)有較好涂展性，無滲布現(xiàn)象。

另外，本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)以下幾個(gè)問題：①凝膠貼膏含水量會(huì)影響其黏性，通常建議為30%～60%［15］，并注意在制劑保存過程中控制環(huán)境濕度，防止其過度吸水或失水而使膏體性能發(fā)生改變；②以NP?700 為骨架材料，選用甘羥鋁作為三價(jià)鋁離子的來源與其發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，甘羥鋁用量對(duì)交聯(lián)反應(yīng)程度、速度的影響較大。隨著其用量增加，膏體黏性升高，交聯(lián)速度加快，但用量過大時(shí)會(huì)因交聯(lián)過度而使膏體變硬，黏性下降，甚至因速度過快而造成膏體鋪展困難，如最陡爬坡實(shí)驗(yàn)第6 組中膏體整個(gè)成團(tuán)，不易混勻，難以涂布在無紡布上，其原因很可能是甘羥鋁用量過大所致。另外，交聯(lián)時(shí)環(huán)境條件（如溫度、相對(duì)濕度）也會(huì)對(duì)膏體性能產(chǎn)生影響，例如夏天制備膏體時(shí)黏度大，但殘留滲布現(xiàn)象較明顯；冬天制備時(shí)黏性顯著下降，故篩選處方宜在溫濕度差異較小的條件下完成。今后，可對(duì)凝膠貼膏的交聯(lián)溫度、濕度、時(shí)間等工藝條件作進(jìn)一步考察。