孫玉姣,馬蕓皓,王 凡,袁旭霜,徐 洋,張 楠,王建康

(陜西科技大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院,陜西 西安 710021)

0 引言

中國擁有豐富的茶葉資源,對茶葉資源的綜合開發(fā)利用一直受到人們的關(guān)注.茯磚茶(Fu Brick tea)是中國的傳統(tǒng)發(fā)酵黑茶,起源于陜西涇陽,歷史悠久,是所有茶類中加工工藝最復(fù)雜、生產(chǎn)加工周期最長、工藝最獨特的產(chǎn)品,有降血壓、抗氧化、保護肝臟、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等保健功能,被譽為“中國古絲綢之路上神秘之茶、西北各民族生命之茶”.茯磚茶中含有豐富的茶多酚和茶多糖.茶多酚是形成茶葉色香味的主要成分之一,目前對茯磚茶的研究多集中于黃烷醇、黃酮、兒茶素、花色苷和酚酸等茶多酚[1,2].茶多糖(Tea Polysaccharide)是茶葉中一種重要的功能性大分子物質(zhì),具有多種生物活性,其保健功效隨著茶葉在醫(yī)藥、保健和食品加工等方面的廣泛應(yīng)用而受到越來越多的關(guān)注.茶多糖的組成與含量因茶葉品種、采摘季節(jié)及加工工藝的不同而異,烏龍茶中茶多糖的含量高于紅茶和綠茶.此外,原料越老,茶多糖的含量也越高,而黑茶多使用的原料較老,預(yù)期黑茶中擁有豐富的多糖資源[3].然而,目前對黑茶多糖,尤其是茯磚茶多糖的研究尚處于起步階段[4,5].

已有研究表明,采用不同提取方法可得到具有不同物理化學(xué)性質(zhì)、理化性質(zhì)和生物活性的多糖分子[6].熱水提取法是最常用的方法,該方法具有簡單、方便、成本低等優(yōu)點,缺點是耗時長、產(chǎn)率低;而采用酸液或堿液輔助熱水提取多糖可以提高多糖的溶解性和提取率[7-9].當(dāng)前研究主要集中于茯茶多糖的熱水提取,而采用酸法或堿法制備茯茶多糖的研究鮮有報道.據(jù)此,本研究分別采用水提法、酸法和堿法等不同方法提取茯茶多糖,并比較其理化性質(zhì)和抗氧化作用,為進一步探討茯茶多糖結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系以及茯茶資源的深加工提供理論依據(jù).

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 主要材料與試劑

茯磚茶,購于陜西省涇陽茯茶鎮(zhèn),粉碎后過60目篩,備用;葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品(相對分子質(zhì)量分別為5、12、25、50、80 和150 k Da),購 于 美 國Sigma-Aldrich 公司;單糖標(biāo)準(zhǔn)品(Rha、Rib、Xyl、Ara、Man、Glc和Gal)、吩嗪硫酸甲酯(PMS)、還原態(tài)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)、氯化硝基四氮唑(NBT)、1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)、鐵氰化鉀([K3Fe(CN)6])和2,4,6-三吡啶三嗪(TPTZ),購于上海阿拉丁生化科技股份有限公司;其余試劑均為國產(chǎn)分析純.

1.1.2 主要儀器

UV-2600系列分光光度計,尤尼柯(上海)儀器有限公司;DF-101S 集熱式恒溫加熱磁力攪拌器,鞏義市予華儀器責(zé)任有效公司;BS-100A 自動部分收集器,上海滬西分析儀器廠有限公司;氣相色譜儀、高效液相色譜儀配備2414示差折光檢測器,日本島津公司;氣相色譜柱Rtx-5MS(30.0 m×0.25 mm ×0.25μm),美國Restek公司;液相色譜柱TSK-gel G4000SW(7.5 mm×30.0cm),日本Tosoh公司;FEI Q45環(huán)境掃描電子顯微鏡;美國FEI公司.

1.2 茯茶多糖的提取與制備

1.2.1 水提法

參照Sun等[9]的方法并加以改進,稱取20 g茯茶粉,加入2 000 mL 蒸餾水,在60 ℃下水浴攪拌4 h,過濾,收集上清液濃縮至50 mL.濾渣再重復(fù)提取2次,合并提取液.加入4倍體積的95%乙醇,在4℃下放置過夜,離心,取沉淀溶于50 mL蒸餾水.采用Sevag試劑(氯仿∶正丁醇=4∶1,v/v)除蛋白,收集水層透析,并濃縮、凍干,得到茯茶水提多糖,命名為FTWP.

1.2.2 酸提法

參照Sun等[9]的方法并加以改進,稱取20 g茯茶粉,加入2 000 mL 1%(w/v)的檸檬酸水溶液,使溶液pH 穩(wěn)定在2.0,其余步驟參照水提法,得到茯茶酸提多糖,命名為FTAcP.

1.2.3 堿提法

參照Sun等[9]的方法并加以改進,稱取20 g茯茶粉,加入2 000 mL 1%(w/v)的Na OH 水溶液,使溶液pH 穩(wěn)定在10.0,其余步驟參照水提法,得到茯茶堿提多糖,命名為FTAlP.

1.3 茯茶多糖的理化性質(zhì)分析

1.3.1 中性糖含量測定

采用苯酚-硫酸法[10].將FTWP、FTAcP 和FTAlP 配制成濃度為0.2 mg/m L的溶液,吸取各樣品溶液0.1 mL,補水至2.0 mL,依次加入50μL的80%(w/v)苯酚溶液和2.5 mL的濃硫酸,室溫靜置20 min后,490 nm 測定光吸收值.2 mL的蒸餾水作為空白對照,按照上述方法操作.以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)回歸方程計算各個樣品的中性糖含量.

1.3.2 糖醛酸含量測定

采用間羥聯(lián)苯法[11].將FTWP、FTAcP 和FTAlP 配制成濃度為0.2 mg/m L的溶液,吸取各樣品溶液0.1 mL,補水至0.25 mL,依次加入1.5 mL的0.012 5 mol/L四硼酸鈉硫酸溶液,振搖混勻,沸水浴中加熱5 min后,冷卻至室溫,加入25μL 的0.15%(w/v)間羥聯(lián)苯溶液,520 nm 測定光吸收值.0.25 mL的蒸餾水作為空白對照,按照上述方法操作.以葡萄糖醛酸為標(biāo)準(zhǔn),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)回歸方程計算各個樣品的糖醛酸含量.

1.3.3 相對分子質(zhì)量測定

采用高效凝膠滲透色譜法(high-performance gel-permeation chromatography,HPGPC)[12].將FTWP、FTAcP 和FTAlP 配制成濃度為5 mg/m L的溶液,進樣10μL,流動相為磷酸鹽緩沖液(0.02 mol/L,pH 6.0),流速為0.5 mL/min,柱溫箱和檢測器溫度均為30℃,測定保留時間.以不同分子量葡聚糖為標(biāo)準(zhǔn),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)回歸方程計算各個樣品的相對分子質(zhì)量.

1.3.4 中性單糖組成分析

采用氣相色譜法(Gas chromatography,GC)[12].各取FTWP、FTAcP 和FTAlP 2 mg溶于2 mL的2 mol/L TFA,在121 ℃下加熱2 h.冷卻后,用1 mol/L NaOH 中和,減壓蒸干.加入4%(w/v)硼氫化鈉(NaBH4),搖勻后,室溫靜置1.5 h,緩慢滴加200μL的冰乙酸,結(jié)束反應(yīng),加入0.1%(v/v)甲醇/HCl溶液,減壓蒸干,除去過量的硼酸鹽.依次加入1 mL吡啶和1 mL 乙酸酐,搖勻,沸水浴中反應(yīng)30 min,反應(yīng)結(jié)束后,減壓蒸干.加入1 mL三氯甲烷和1 mL蒸餾水對樣品萃取,棄水相,保留三氯甲烷相,重復(fù)三次,取有機相進行GC分析.

GC分析條件:以N2作載氣,流速0.6 mL/min,分流比19∶1,進樣量0.5μL,進樣口溫度270℃,檢測器溫度280℃.柱升溫條件:180℃(2 min)6℃/min 210℃0.3℃/min 215℃6℃/min 240℃(30 min).七種單糖(Rha、Rib、Ara、Xyl、Man、Glc和Gal)作為標(biāo)準(zhǔn),進行同樣的衍生化處理和GC分析.

1.3.5 分子形貌分析

分別取大小厚度合適的FTWP、FTAcP 和FTAlP樣品粘著于載物臺,放置于真空噴鍍儀內(nèi)鍍一層導(dǎo)電金膜后,采用掃描電鏡(Scanning electron microscope,SEM)進行觀察.

1.4 茯茶多糖的抗氧化作用分析

1.4.1 羥自由基清除能力的測定

分別稱取FTWP、FTAcP和FTAlP配制成2.5mg/mL的溶液,稀釋為0.25 mg/mL、0.50 mg/mL、1.00 mg/mL、1.50 mg/mL和2.00 mg/mL的樣品待測液.采用水楊酸比色法[13],取1 mL不同濃度的待測液,依次加入1 mL的9 mmol/L FeSO4溶液、1 mL的9 mmol/L水楊酸-乙醇溶液和1 mL 的8.8 mmol/L H2O2,混勻,37℃下水浴30 min,冷卻后,510 nm 測定光吸收值.待測樣品對羥自由基的清除能力按照下列公式(1)進行計算:

式(1)中:Ao-以H2O 代替待測液加入水楊酸比色試劑的吸光值,As-待測液加入水楊酸比色試劑的吸光值,Ac-待測液不添加水楊酸比色試劑的吸光值.

1.4.2 超氧陰離子自由基清除能力的測定

分別稱取FTWP、FTAcP 和FTAlP 配制成2.5 mg/mL的溶液,稀釋為0.25 mg/mL、0.50 mg/mL、1.00 mg/mL、1.50 mg/mL和2.00 mg/mL的樣品待測液.采用PMS-NADH 系統(tǒng),考察待測樣品對超氧陰離子自由基的清除能力[14].所使用的藥品都需要先用0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)配制,然后取1mL的待測液,分別加入1 mL的30μmol/mL PMS、1 mL 的338μmol/mL NADH和1 mL的72μmol/mL NBT,搖勻,室溫放置5 min后,560 nm測定光吸收值.待測樣品對超氧陰離子自由基的清除能力按照上述公式(1)進行計算;其中Ao-以磷酸鹽緩沖液代替待測液加入PMSNADH系統(tǒng)試劑的吸光值,As-待測液加入PMSNADH系統(tǒng)試劑的吸光值,Ac-待測液不添加PMSNADH系統(tǒng)試劑的吸光值.

1.4.3 DPPH 自由基清除能力的測定

分別稱取FTWP、FTAcP 和FTAlP 配制成2.5 mg/mL的溶液,稀釋為0.25 mg/mL、0.50 mg/mL、0.75 mg/mL、1.00 mg/mL和1.25 mg/mL的樣品待測液.將DPPH溶于甲醇,配制成0.2 mmol/L的DPPH溶液.取1 mL不同濃度的樣品待測液,加入2 mL配制好的DPPH溶液與2 mL甲醇,搖勻,室溫下避光反應(yīng)15 min后,517 nm測定光吸光值[14].待測樣品對DPPH自由基的清除能力按照上述公式(1)進行計算;其中Ao-以H2O代替待測液加入DPPH 溶液的吸光值,As-待測液加入DPPH 溶液的吸光值,Ac-待測液不添加DPPH溶液的吸光值.

1.4.4 還原力的測定

將不同提取方法提取的多糖配制成2.5 mg/mL的溶液,并稀釋為0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.3 mg/mL、0.4 mg/mL、0.5 mg/mL、0.6 mg/mL的樣品待測液.取不同濃度的樣品溶液1 mL,加入1 mL的0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液(p H=6.6)和0.125 mL的1%(w/v)的鐵氰化鉀溶液,在50℃下水浴反應(yīng)20 min后,依次加入0.125 mL的10%(w/v)的三氯乙酸終止反應(yīng),最后加入1.5 mL的0.1%(w/v)FeCl3顯色,搖勻后,700 nm測定吸光值,吸光值越高代表寡糖的還原能力越強[15].空白參比為蒸餾水代替樣品溶液.

1.4.5 亞鐵離子螯合能力的測定

分別稱取FTWP、FTAcP 和FTAlP配制成2.5 mg/mL的溶液,稀釋為0.25 mg/mL、0.50 mg/mL、1.00 mg/mL、1.50 mg/mL和2.00 mg/mL的樣品待測液.取200μL待測液,依次加入3 mL甲醇和200μL的2 mmol/L FeCl2溶液,混勻后室溫反應(yīng)5 min,加入400μL的5 mmol/L 2,4,6-三吡啶三嗪(TPTZ)溶液,混勻后室溫反應(yīng)10 min,562 nm測定光吸光值[16].待測樣品對亞鐵離子的螯合能力按照下列公式(2)進行計算:

式(2)中:Ao-以H2O 代替待測液加入螯合試劑的吸光值,As-待測液加入螯合試劑的吸光值,Ac-待測液不添加螯合試劑的吸光值.

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

所有實驗都進行三次重復(fù),實驗結(jié)果采用Origin 8.0和SPSS 22.0軟件進行處理和方差分析,并采用LSD 法對各組間的差異進行多重比較.

2 結(jié)果與討論

2.1 水提、酸提和堿提茯茶多糖的制備及其中性糖含量和糖醛酸含量比較

三種方法制備的茯茶多糖得率、中性糖含量和糖醛酸含量見表1.相比于水提法,酸提法和堿提法可不同程度提高茯茶多糖的得率;并且,水提茯茶多糖(FTWP)、酸提茯茶多糖(FTAcP)和堿提茯茶多糖(FTAlP)的化學(xué)組成均有一定的差別,其中酸提茯茶多糖(FTAcP)的中性糖含量最高,為65.58%±1.66%;堿提茯茶多糖(FTAlP)的糖醛酸含量最高,為29.76%±0.83%;由此可見,堿提法更有助于制備富含糖醛酸的酸性多糖.此外,水提茯茶多糖(FTWP)、酸提茯茶多糖(FTAcP)和堿提茯茶多糖(FTAlP)的蛋白含量較低,分別為1.50%±0.61%、3.95%±0.22%和6.80%±0.42%.

表1 茯茶多糖的得率和化學(xué)組成比較

2.2 水提、酸提和堿提茯茶多糖的相對分子質(zhì)量比較

利用高效凝膠滲透色譜法(HPGPC)對水提茯茶多糖(FTWP)、酸提茯茶多糖(FTAcP)和堿提茯茶多糖(FTAlP)的相對分子質(zhì)量進行測定,結(jié)果如圖1所示.根據(jù)葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品(相對分子質(zhì)量分別為5、12、25、50、80 和150 k Da)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到的線性回歸方程是:y=-0.178 6x+8.189 6,R2=0.999 9;根據(jù)保留時間,計算可得FTWP、FTAcP 和FTAlP 的相對分子質(zhì)量分別為4.78×105±1.92 Da、4.70×105±2.81Da和4.68×105±1.51Da,沒有表現(xiàn)出顯著性差異.

圖1 茯茶多糖的相對分子質(zhì)量比較

2.3 水提、酸提和堿提茯茶多糖的中性單糖組成比較

利用氣相色譜法(GC)對水提茯茶多糖(FTWP)、酸提茯茶多糖(FTAcP)和堿提茯茶多糖(FTAlP)的中性單糖組成進行測定,結(jié)果如圖2所示.依據(jù)單糖標(biāo)準(zhǔn)品的出峰時間確定,水提茯茶多糖(FTWP)、酸提茯茶多糖(FTAcP)和堿提茯茶多糖(FTAlP)均是由鼠李糖(Rha)、阿拉伯糖(Ara)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal)組成,但是峰面積由明顯差異.根據(jù)其峰面積和響應(yīng)因子,計算各個單糖的摩爾百分比可得,水提茯茶多糖(FTWP)、酸提茯茶多糖(FTAcP)和堿提茯茶多糖(FTAlP)中Rha∶Ara∶Man∶Glc∶Gal的摩爾比例分別為1.58∶2.41∶1∶1.97∶3.89;1.24∶2.04∶1∶4.58∶3.09和1.21∶2.16∶1∶3.80∶3.14.由此可見,酸提法和堿提法可能會影響茯茶多糖的單糖組成,提高了多糖中Glc的含量.

圖2 不同提取方式茯茶多糖的單糖組成比較

2.4 水提、酸提和堿提茯茶多糖的分子形貌比較

利用掃描電鏡(SEM)分別在500 倍和4 000倍放大倍數(shù)下觀察水提茯茶多糖(FTWP)、酸提茯茶多糖(FTAcP)和堿提茯茶多糖(FTAlP)的分子形貌,結(jié)果如圖3所示.結(jié)果顯示,三種方法提取的茯茶多糖主要以不規(guī)則的片狀結(jié)構(gòu)為主體,但FTWP 的邊緣呈現(xiàn)出不規(guī)則的鋸齒狀結(jié)構(gòu);相較于FTWP,FTAcP和FTAlP的表面和邊緣更加平整光滑,邊緣的鋸齒狀結(jié)構(gòu)明顯減少;此外對比FTAcP和FTAlP發(fā)現(xiàn),FTAlP 的表面更加致密,并且還觀察到大小不均一的桿柱狀形態(tài).由此可見,酸提法和堿提法可能會影響茯茶多糖的微觀分子形貌.

圖3 不同提取方法茯茶多糖的分子形貌比較

2.5 水提、酸提和堿提茯茶多糖對羥自由基的清除能力比較

如圖4所示,在0.25～2 mg/m L 的濃度范圍內(nèi),水提茯茶多糖(FTWP)、酸提茯茶多糖(FTAcP)和堿提茯茶多糖(FTAlP)的清除率隨著多糖質(zhì)量濃度的增加而呈現(xiàn)出不同程度的增加.當(dāng)FTWP的濃度達到2 mg/m L時,其對羥自由基的清除能力達到81.01%±0.69%,是FTWP 在0.25 mg/m L濃度時清除率(68.57%±0.43%)的1.18 倍.而相比于FTWP,在此濃度范圍內(nèi)FTAcP和FTAlP 對羥自由基的清除能力均顯著低于FTWP 的清除率(***p＜0.001).當(dāng)多糖濃度達到2 mg/m L 時,FTAcP 和FTAlP對羥自由基的清除能力分別為59.68%±0.39%和64.13%±0.36%,比FTWP 對羥自由基的清除能力分別降低了0.26倍和0.21倍.

圖4 茯茶多糖對羥自由基的清除能力比較(相同濃度下FTAcP、FTAlP同F(xiàn)TWP的比較,*p＜0.05、**p＜0.01和***p＜0.001)

2.6 水提、酸提和堿提茯茶多糖對超氧陰離子自由基的清除能力比較

如圖5所示,在0.25～1.5 mg/m L 的濃度范圍內(nèi),水提茯茶多糖(FTWP)、酸提茯茶多糖(FTAcP)和堿提茯茶多糖(FTAlP)的清除率隨著多糖質(zhì)量濃度的增加而增大;而當(dāng)多糖濃度增加至2 mg/m L時,FTWP、FTAcP和FTAlP對超氧陰離子自由基的清除能力反而下降.當(dāng)FTWP 的濃度達到1.5 mg/m L 時,其對超氧陰離子自由基的清除能力達到67.86%±3.99%,是FTWP 在0.25 mg/m L濃度時清除率(54.91%±5.56%)的1.24倍.而相比于FTWP,FTAlP在2 mg/m L 時的清除率為76.52%±4.43%,顯著高于FTWP在此濃度時的清除率(*p＜0.05).

2.7 水提、酸提和堿提茯茶多糖對DPPH 自由基的清除能力比較

如圖6所示,在0.25～2 mg/m L 的濃度范圍內(nèi),酸提茯茶多糖(FTAcP)隨著多糖質(zhì)量濃度的增加而呈現(xiàn)出不同程度的增加.在0.25～1.5 mg/m L的濃度范圍內(nèi),水提茯茶多糖(FTWP)和堿提茯茶多糖(FTAlP)的清除率隨著多糖質(zhì)量濃度的增加而增大;而當(dāng)多糖濃度增加至2 mg/mL 時,FTWP 和FTAlP 對DPPH 自由基的清除能力反而下降.當(dāng)多糖濃度僅為0.25 mg/mL時,FTAlP 對DPPH 自由基的清除能力達到71.81%±1.01%,顯著高于FTWP在此濃度時的清除率(52.38%±4.93%;***p＜0.001),在低濃度時表現(xiàn)出良好的清除能力.

2.8 水提、酸提和堿提茯茶多糖的還原能力比較

還原力是評價物質(zhì)抗氧化作用的一個重要指標(biāo),吸光值越大,表明還原性越高[17].如圖7所示,在0.1～0.5 mg/m L 的濃度范圍內(nèi),水提茯茶多糖(FTWP)、酸提茯茶多糖(FTAcP)和堿提茯茶多糖(FTAlP)的還原力隨著多糖質(zhì)量濃度的增加而增大.當(dāng)FTWP的濃度達到0.5 mg/m L 時,其還原力為0.98±0.00,是FTWP 在0.1 mg/m L濃度時還原力(0.13±0.00)的7.54倍.而相比于FTWP,在此濃度范圍內(nèi)FTAcP的還原力均顯著高于FTWP的還原力(***p＜0.001);當(dāng)FTAcP僅為0.1 mg/m L時,其還原力為0.64±0.04,是FTWP還原力(0.13±0.00)的4.92倍;當(dāng)FTAcP濃度達到0.5 mg/m L 時,其還原力高達2.31±0.03,是FTWP還原力(0.98±0.00)的2.36倍.此外,通過對比FTAlP 和FTWP 發(fā)現(xiàn),在0.2～0.5 mg/m L的濃度范圍內(nèi),FTAlP的還原力顯著高于FTWP的還原力(***p＜0.001);當(dāng)FTAlP濃度達到0.5 mg/m L 時,其還原力高達2.23±0.03,是FTWP還原力(0.98±0.00)的2.28倍.

圖7 茯茶多糖的還原能力比較(相同濃度下

2.9 水提、酸提和堿提茯茶多糖對亞鐵離子的螯合能力比較

亞鐵離子具有很強的助氧化活性,因此通過鰲合亞鐵離子,降低物質(zhì)中亞鐵離子的濃度,可避免或降低其氧化活性[18].如圖8所示,在0.25～1.5 mg/mL的濃度范圍內(nèi),水提茯茶多糖(FTWP)對亞鐵離子的螯合能力隨著多糖質(zhì)量濃度的增加而增大;在0.25～2 mg/mL的濃度范圍內(nèi),酸提茯茶多糖(FTAcP)和堿提茯茶多糖(FTAlP)對亞鐵離子的螯合能力隨著多糖質(zhì)量濃度的增加而增大.在0.25～1 mg/mL的濃度范圍內(nèi),FTAcP 對亞鐵離子的螯合能力顯著高于FTWP的螯合能力(***p＜0.001);在0.25～0.5 mg/mL的濃度范圍內(nèi),FTAlP 對亞鐵離子的螯合能力顯著高于FTWP的螯合能力(***p＜0.001);在較低濃度時,FTAcP 和FTAlP 均表現(xiàn)出更為優(yōu)越的螯合能力.

圖8 茯茶多糖對亞鐵離子的螯合能力比較(相同濃度下FTAcP、FTAlP 同F(xiàn)TWP的比較,*p＜0.05、**p＜0.01和***p＜0.001)

已有研究表明,酸性條件或堿性條件能破壞細胞壁,促使胞內(nèi)多糖或細胞壁結(jié)合多糖的溶出,顯著提高多糖的得率;此外,堿提法可提高酸性多糖的溶解性,使得植物細胞中更多的酸性多糖溶出,顯著提高酸性多糖的占比[19].本研究同樣發(fā)現(xiàn)酸提法和堿提法可明顯提高茯茶多糖的得率,并且堿提茯茶多糖具有較高的糖醛酸含量.葡萄糖、糖醛酸結(jié)構(gòu)的存在可能提高多糖的抗氧化活性[9,19,20].

通過上述抗氧化評估研究發(fā)現(xiàn),酸提法和堿提法制備茯茶多糖并不會破壞多糖的抗氧化作用.在較低濃度范圍內(nèi),酸提茯茶多糖(FTAcP)和堿提茯茶多糖(FTAlP)表現(xiàn)出更加顯著的對超氧陰離子自由基、DPPH 自由基的清除能力,還原力和對亞鐵離子的螯合能力,提示酸提茯茶多糖和堿提茯茶多糖具有良好的抗氧化作用,這可能歸功于酸提茯茶多糖具有較高的Glc含量,堿提茯茶多糖具有較高的糖醛酸含量.基于此,后續(xù)研究將通過解析水提茯茶多糖(FTWP)、酸提茯茶多糖(FTAcP)和堿提茯茶多糖(FTAlP)的精細結(jié)構(gòu),深入探索茯茶多糖抗氧化作用的構(gòu)效關(guān)系.

3 結(jié)論

本文采用水提法、酸法和堿法等三種不同方法提取茯茶多糖,并初步分析其化學(xué)組成、相對分子質(zhì)量、單糖組成、分子形貌和體外抗氧化作用.結(jié)果表明,水提茯茶多糖、酸提茯茶多糖和堿提茯茶多糖的理化性質(zhì)和抗氧化作用具有明顯差異.酸提茯茶多糖的葡萄糖含量最高,堿提茯茶多糖的糖醛酸含量最高,促使酸提茯茶多糖和堿提茯茶多糖在較低濃度時表現(xiàn)出良好的抗氧化作用.通過研究不同提取方法對茯茶多糖的理化性質(zhì)和抗氧化作用的影響,可為茯茶多糖結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系研究提供一定的理論參考,有助于茯茶資源的深入開發(fā)利用.