鄭森元，李 健，高鴻亮

（新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化病二科，烏魯木齊 830054）

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種慢性非特異性腸道炎癥性疾病，主要累及人體乙狀結(jié)腸與直腸黏膜，多發(fā)于20～30歲之間，隨著經(jīng)濟水平的發(fā)展和生活質(zhì)量的提高，我國UC 的發(fā)病率呈逐年上升趨勢[1-2]。臨床表現(xiàn)主要為反復(fù)腹瀉、腹痛、膿血便為主，病程長且易復(fù)發(fā)，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量[3]。研究表明長期未控制的UC 會導(dǎo)致患者腸道纖維化狹窄，與結(jié)直腸癌的發(fā)生有密不可分的關(guān)系[4,5]。目前UC的發(fā)病機制尚不明確，遺傳、環(huán)境和腸道微生物等因素可能共同參與了UC 的發(fā)生發(fā)展。針對輕、中度UC患者誘導(dǎo)和維持緩解的藥物主要以氨基水楊酸類為主，其中包括美沙拉嗪，但長期單純使用此類藥物對于改善長期療效有限，甚至?xí)l(fā)生一些不良反應(yīng)。血清CC 趨化因子配體11（CLL11）和腸粘膜受體型蛋白酪氨酸磷酸酶O（PTPRO）都是腸道黏膜炎性機制的重要調(diào)節(jié)因子，CCL11通過刺激嗜酸性粒細(xì)胞在腸道中聚集，激發(fā)腸道黏膜炎性反應(yīng)，誘導(dǎo)腸道免疫平衡的破壞[6]。Toll 樣受體4（TLR4）作為一種天然免疫系統(tǒng)的模式識別受體，在維持腸黏膜正常功能中發(fā)揮著重要作用，PTPRO 可通過TLR4 促進巨噬細(xì)胞產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子，加重UC 病情的發(fā)展[7]。維生素D3（vitamin D3，VD3）具有調(diào)節(jié)人體鈣、磷代謝及免疫功能，人體缺乏VD3會導(dǎo)致腸道免疫系統(tǒng)紊亂，加重UC的病情進一步進展[8]。本研究通過測定輕、中度UC患者治療前后血清CLL11、PTPRO表達(dá)水平及內(nèi)鏡下Mayo 評分，評價VD3和美沙拉嗪聯(lián)合用藥對輕、中度活動期潰瘍性結(jié)腸炎的治療效果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料以2020年1月～12月在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化病內(nèi)科就診住院的103名輕、中度UC 患者作為研究對象，其中男性51 例，女性52例，年齡32~47歲，平均（39.95±6.5）歲，隨機分為治療組（n=52）和對照組（n=51）。兩組患者性別、年齡、基礎(chǔ)疾病等基線資料差異相比均無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。本研究通過新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)[2]納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《炎癥性腸病診斷與治療的共識意見（2018 年，北京）》的輕、中度潰瘍性結(jié)腸炎診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）首次使用維生素D3治療；（3）既往沒有接受過免疫抑制劑及抗感染藥物治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）重度潰瘍性結(jié)腸炎患者；（2）合并嚴(yán)重心、肝、腎功能障礙者；（3）腫瘤性疾病者；（4）甲狀旁腺功能亢進及骨質(zhì)疏松者；（5）合并其他自身免疫性疾病者。

1.3 治療方法對照組患者口服美沙拉嗪緩釋顆粒（美沙拉嗪緩釋顆粒：0.5 g/袋，上海愛的發(fā)制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20143164），每次1 g，每天4 次。治療組患者在此基礎(chǔ)上口服維生素D3（骨化三醇膠丸：0.25 μg/粒，上海羅氏制藥有限公司，進口藥品注冊證號J20150011），每次0.25 μg，每天1 次。兩組患者連續(xù)治療8 周，治療期間均加強對患者的心理指導(dǎo)，根據(jù)患者實際情況給予相應(yīng)飲食指導(dǎo)及糾正水電解質(zhì)紊亂等對癥治療。

1.4 指標(biāo)測定

1.4.1 血清CC 趨化因子配體11 指標(biāo)測定 采用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）法檢測血清CCL11 水平，分別于治療前和治療8周以后，分別抽取兩組患者早上8 點空腹靜脈血5 mL，進行離心處理并分離上層清液，放置于-20℃冰箱保存。CCL11 試劑盒及操作步驟由艾美捷科技公司提供，于酶標(biāo)包被板標(biāo)準(zhǔn)孔中加樣50 μL，向待測樣品孔中加入40 μL 樣品稀釋液及10 μL 待測樣品，37℃下溫育30 min 后洗滌。加入酶標(biāo)試劑后，再次溫育、洗滌，依次加入顯色劑A 和B，于37℃避光顯色后加終止液終止反應(yīng)。以空白孔調(diào)零，測定450 nm處每個孔的吸光度（OD值）。

1.4.2 腸粘膜受體型蛋白酪氨酸磷酸酶O 指標(biāo)測定通過蛋白質(zhì)印跡法檢測UC 患者腸道組織細(xì)胞中PTPRO 蛋白表達(dá)水平，分別于治療前及治療8 周后，取兩組患者腸道黏膜細(xì)胞加入蛋白裂解液進行定量處理，滴加勻漿緩沖液后轉(zhuǎn)移至4℃環(huán)境下、3 500 r/min 離心15 min。吸取上層清液，于電壓位120V 電泳，轉(zhuǎn)膜緩沖液平衡5 min，共3 次，后浸入轉(zhuǎn)膜緩沖液進行轉(zhuǎn)膜10 min。用PBS 緩沖溶液洗膜5 min，共3 次，加入一抗并放置于4℃孵育過夜，用磷酸鹽吐溫緩沖液(PBST)清洗3 次,每次10 min，加入二抗，放置室溫下孵育1 h，再用PBST 清洗3 次后曝光并觀察結(jié)果。

1.4.3 改良Mayo 評分[2]對納入患者的便血情況、排便次數(shù)及腸鏡下結(jié)直腸黏膜情況等實施綜合性評估，包括：（1）排便次數(shù)：0 分：正常；1 分：比正常排便次數(shù)增加1~2次/d；2分：比正常排便次數(shù)增加3~4次/d；3 分：比正常排便次數(shù)增加5 次/d 或以上。（2）便血情況：0 分：無出血；1 分：不到一半時間出現(xiàn)便中混血；2 分：大部分時間內(nèi)便中混血；3 分：一直存在出血。（3）內(nèi)鏡發(fā)現(xiàn)：0分：正?；驘o活動性病變；1分：輕度病變(血管紋理減少、輕度易脆、紅斑) ；2 分：中度病變(血管紋理缺乏、易脆、糜爛、明顯紅斑)；3 分：重度病變(有自發(fā)性出血或潰瘍形成)。（4）醫(yī)師總體評價：0 分：正常；1 分：輕度病情；2 分：中度；3 分：重度。臨床緩解：治療后不適癥狀全部消失，腸鏡下顯示腸道黏膜基本正常，潰瘍面愈合，無明顯糜爛。有效：治療后不適癥狀基本消失，腸鏡下顯示腸道黏膜輕度炎癥或假息肉形成。無效：未符合上述標(biāo)準(zhǔn)。有效率=（臨床緩解人數(shù)+有效人數(shù)）/總?cè)藬?shù)×100%。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 22.0 軟件進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者臨床療效比較與對照組治療后比較，治療組患者治療后總有效率提高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1 兩組患者臨床療效比較

2.2 兩組患者治療前后血清CLL11、PTPRO 蛋白水平比較治療前兩組患者血清CLL11水平、PTPRO蛋白表達(dá)量比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。與對照組治療后比較，治療組治療后患者血清CLL11 水平、PTPRO 蛋白表達(dá)量均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

表2 兩組治療前后血清CLL11水平、PTPRO蛋白表達(dá)量比較（±s，ng/mL）

表2 兩組治療前后血清CLL11水平、PTPRO蛋白表達(dá)量比較（±s，ng/mL）

組別治療組（n=52）對照組（n=51）t值P值血清CLL11水平治療前1.25±0.23 1.24±0.24 0.35>0.05治療后0.47±0.12 0.74±0.11 5.25<0.05 PTPRO蛋白表達(dá)量治療前3.74±0.72 3.73±0.70 0.26>0.05治療后2.06±0.55 2.52±0.72 4.34<0.05

2.3 兩組患者治療前后Mayo 評分比較治療前兩組患者Mayo 評分比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。與對照組治療后比較，治療組治療后患者Mayo 評分降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表3。

表3 兩組治療前后Mayo評分比較[（±s），分]

表3 兩組治療前后Mayo評分比較[（±s），分]

組別治療組（n=52）對照組（n=51）t值P值Mayo評分治療前1.46±0.49 1.45±0.46 0.64>0.05治療后0.65±0.57 1.09±0.55 3.34<0.05

3 討論

潰瘍性結(jié)腸炎在歐美國家發(fā)病率較高，在我國的發(fā)病率隨飲食結(jié)構(gòu)改變也有逐年上升趨勢[2]。目前潰瘍性結(jié)腸炎的診斷、病情活動度監(jiān)測以及療效判斷主要依賴于臨床評估、血清學(xué)指標(biāo)和內(nèi)鏡檢查等指標(biāo)。研究發(fā)現(xiàn)黏膜愈合（MH）指標(biāo)對于治療UC患者療效具有重要的指導(dǎo)作用[9,10]，能夠較好地預(yù)測后期疾病復(fù)發(fā)率[11]，但部分血清學(xué)指標(biāo)（血常規(guī)、C 反應(yīng)蛋白、紅細(xì)胞沉降率等）與其他疾病也有一定的相關(guān)性，導(dǎo)致它們不能作為評價潰瘍性結(jié)腸炎活動度的準(zhǔn)確標(biāo)志指標(biāo)。本研究選取血清CLL11 水平、PT?PRO 蛋白表達(dá)量在UC 患者呈中高表達(dá)，檢測其表達(dá)水平對UC 患者病情活動度監(jiān)測及療效判斷有一定的參考意義。

美沙拉嗪能有效抑制人體前列腺素合成及白三烯B4釋放，減輕腸道黏膜炎癥反應(yīng)，阻止腸粘膜損傷進展[12]。外源性VD3在人體能夠合成活性VD3，促進腸黏膜屏障損傷修復(fù)，保護其完整性，維持腸道免疫平衡。Hlavaty 等[13]研究指出，維生素D3缺乏在UC 患者中十分常見，血清VD3水平與UC 患者的生活質(zhì)量有著密切的關(guān)系。Gubatan 等[14]研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)血清VD3含量低于35 ng/mL 時會增加UC 復(fù)發(fā)的風(fēng)險。本研究顯示UC 患者普遍存在VD3缺乏，與楊林雪等的研究結(jié)果相一致[15]。外源性VD3的補充對人體炎癥反應(yīng)、免疫系統(tǒng)反應(yīng)的調(diào)節(jié)等具有重要作用[16]。

綜上所述，維生素D3與腸道免疫、腸道黏膜屏障完整性等相關(guān)，與美沙拉嗪聯(lián)合更有利于控制輕、中度活動期患者病情變化，有效抑制炎癥反應(yīng)的進一步發(fā)展。對于判斷UC 患者病情活動度監(jiān)測及療效判斷，新標(biāo)志物血清CLL11 水平、PTPRO 蛋白表達(dá)量指標(biāo)的補充具有一定的臨床價值。