張雅楠，李浩東，章芯怡，韓 杰，黃起壬

(1.江西省基礎(chǔ)藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；2.南昌大學(xué)藥學(xué)院a.藥理學(xué)教研室；b.2018級(jí)，南昌 330006)

糖尿病是一種發(fā)病率和病死率僅次于癌癥和心血管病的第三大疾病[1]。糖尿病的晚期伴有糖尿病神經(jīng)病變、糖尿病腎病、糖尿病心肌病(DCM)等多種并發(fā)癥。DCM是最終造成糖尿病患者嚴(yán)重死亡的主要原因[2]。1972年RUBLER等[3]首次發(fā)現(xiàn)DCM是心臟疾病的一種特殊形式，在患有缺血性或高血壓性心臟病的糖尿病患者中較為常見，主要表現(xiàn)為心臟結(jié)構(gòu)和功能異常[4]。

白脂素(ASP)是由FBN1(Fibrillin-1)的最末端2個(gè)外顯子編碼的一種新型糖原蛋白激素，主要存在于人體的白色脂肪組織中，由白色脂肪細(xì)胞分泌而來[5]，肌原纖維蛋白前體C端剪切位點(diǎn)是該激素起作用的主要部位。有研究[6-7]表明ASP可以有效調(diào)節(jié)人體血糖，具有增強(qiáng)食欲和消炎等作用。ASP一方面能夠和人體肝臟細(xì)胞外周表面的受體相互結(jié)合，刺激人體肝臟細(xì)胞內(nèi)的葡萄糖分泌，直接導(dǎo)致血糖值上升；另一方面，ASP可以穿過血腦屏障，直接激活與下丘腦中樞攝食功能相關(guān)的AgRP+神經(jīng)元，并進(jìn)一步地抑制與厭食功能相關(guān)的神經(jīng)元的活性，促進(jìn)攝食活動(dòng)，間接地發(fā)揮了升高血糖的作用[8]。GROENER等[9]發(fā)現(xiàn)，1型糖尿病患者出現(xiàn)低血糖時(shí)，血漿ASP水平明顯升高，其與1型糖尿病的胰島素抵抗作用有關(guān)。LEE等[10]也發(fā)現(xiàn)，ASP可通過TLR4/JNK介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)影響胰島素對(duì)葡萄糖的作用效果。既往研究[11]表明ASP可作為預(yù)測(cè)急性冠脈綜合征(ACS)伴不穩(wěn)定型心絞痛嚴(yán)重程度的新型生化標(biāo)志物。ASP在無氧運(yùn)動(dòng)的情況下分泌增多[12]，因此推測(cè)ASP可能對(duì)DCM也有影響。目前ASP與DCM之間關(guān)系的研究較少，有研究[13-14]表明體內(nèi)攝入過多的葡萄糖，血糖濃度增高會(huì)使心肌細(xì)胞受到嚴(yán)重的損傷。因此，本文通過高濃度葡萄糖(HG)誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷并予ASP干預(yù)，探討ASP在HG誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷中的作用，期望為臨床診治DCM提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 細(xì)胞株及血清培養(yǎng)基

H9C2細(xì)胞株購自美國(guó)ATCC(Catalog No:CRL1730)；胎牛血清購自天津海碩源科技有限公司；DMEM/f12培養(yǎng)基購自美國(guó)Hyclone公司。

1.2 藥品及試劑

ASP購自上海強(qiáng)耀生物科技有限公司，葡萄糖購自美國(guó)SIGMA公司，乳酸脫氫酶(LDH)及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)檢測(cè)試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，SOD兔多克隆抗體購自武漢博士德生物工程有限公司，GSH-PX兔多克隆抗體購自杭州華安生物技術(shù)有限公司，GAPDH鼠多克隆抗體購自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)分組及方法

2.1 HG誘導(dǎo)心肌損傷模型的建立

將H9C2細(xì)胞均勻接種于100 mm的細(xì)胞培養(yǎng)板上，隨機(jī)分為Ctrl組和HG組，HG組設(shè)立不同的葡萄糖濃度組，每組細(xì)胞培養(yǎng)基的葡萄糖終濃度分別為20、30、40、50和60 mmol·L-1，處理24 h后，通過MTS檢測(cè)H9C2的存活率，收集細(xì)胞上清液檢測(cè)LDH活力，確定最適合的葡萄糖濃度，建立HG誘導(dǎo)損傷模型，以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.2 ASP對(duì)細(xì)胞活力的影響觀察

將H9C2細(xì)胞均勻接種于96孔板上，當(dāng)細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)板80%后將細(xì)胞隨機(jī)分為Ctrl組、HG組(50 mmol·L-1)、Ctrl+ASP(20 nmol·L-1)組和HG+ASP組，用葡萄糖濃度為50 mmol·L-1的完全培養(yǎng)基對(duì)HG組和HG+ASP組進(jìn)行處理36 h，Ctrl組和Ctrl+ASP組則用葡萄糖濃度為5.5 mmol·L-1完全培養(yǎng)基同步處理36 h；36 h后將各組培養(yǎng)基均換成正常葡萄糖濃度的完全培養(yǎng)基；除Ctrl組和HG組外，其余2組分別加入20 nmol·L-1的ASP繼續(xù)培養(yǎng)24 h，處理結(jié)束后通過CCK8檢測(cè)細(xì)胞存活率，觀察細(xì)胞活性變化。

2.3 ASP對(duì)LDH活性、MDA含量、SOD和GSH-PX活性的影響觀察

2.3.1 LDH活性檢測(cè)

將細(xì)胞均勻接種于100 mm培養(yǎng)皿中，同上分組處理后，取各組上清液進(jìn)行檢測(cè)，LDH活性檢測(cè)采用微板法，首先實(shí)驗(yàn)設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔和對(duì)照孔，在空白孔里面加入25 μL的雙蒸水、標(biāo)準(zhǔn)孔里面加入25 μL濃度為0.2 μmol·mL-1的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液，測(cè)定孔和對(duì)照孔里面則先分別加入5 μL的雙蒸水后，再根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組的不同分別加入20 μL樣本，隨后在所有孔內(nèi)加入25 μL的基質(zhì)緩沖液，最后單獨(dú)在測(cè)定孔中加入5 μL輔酶，混勻，置于37 ℃的水浴鍋中溫浴15 min；隨后在所有孔里面分別加入25 μL 2,4-二硝基苯肼，混勻，放在37 ℃的水浴鍋中反應(yīng)15 min；結(jié)束后在各孔中加入250 μL 0.4 mmol·L-1的NaOH溶液，混勻，室溫放置5 min，將各孔溶液轉(zhuǎn)移100 μL至96孔板中并將96孔板置于酶標(biāo)儀上，設(shè)置檢測(cè)波長(zhǎng)為450 nm，得到吸光度值后，根據(jù)吸光度值計(jì)算出各組活性。

2.3.2 MDA含量測(cè)定

收集各組上清液后采用TBA法進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管和對(duì)照管，按照實(shí)驗(yàn)及分組要求，取離心管標(biāo)記好后，首先在空白管中加100 μL的無水乙醇，標(biāo)準(zhǔn)管中加入與空白管等量的濃度為10 nmol·L-1的標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定管和對(duì)照管根據(jù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組的不同分別加入與空白管等量的樣本，然后在所有管中加入100 μL蛋白澄清劑，顛倒混勻后，在所有管中加入酸緩沖液3 mL，在對(duì)照管中加50%的冰醋酸1 mL，空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管則分別加入1 mL的TBA顯色劑。最后將離心管蓋上蓋，用針在蓋上扎一小孔，混合并搖勻后，放在95 ℃的水浴鍋中反應(yīng)40 min，取出用凈水沖洗冷卻降溫，然后放在離心機(jī)中離心，條件為3500 r·min-1，時(shí)間10 min，離心結(jié)束后取上層，設(shè)置條件于532 nm處、1 cm光徑，用二蒸水調(diào)零后，檢測(cè)各管吸光度值。根據(jù)吸光度值計(jì)算各組MDA含量。

2.3.3 SOD活性測(cè)定

收集各分組上清后進(jìn)行SOD活性測(cè)定，實(shí)驗(yàn)設(shè)置對(duì)照孔、對(duì)照空白孔、測(cè)定孔、測(cè)定空白孔，取96孔板。首先對(duì)照空白孔與對(duì)照孔同步處理加入20 μL蒸餾水，測(cè)定孔和測(cè)定空白孔也是同步處理，按細(xì)胞分組的不同加入20 μL待測(cè)樣本；隨后對(duì)照孔和測(cè)定孔同步處理各自加入20 μL酶工作液，對(duì)應(yīng)的對(duì)照空白孔和測(cè)定空白孔也是同步處理加入20 μL酶稀釋液。所有孔顛倒混勻后，分別各自加入200 μL的底物應(yīng)用液，混勻后，放在37 ℃的烘箱里孵育20 min，取出96孔板置于酶標(biāo)儀中450 nm處檢測(cè)吸光度值。根據(jù)所檢測(cè)出的各組吸光度值計(jì)算出各組SOD活性。

2.3.4 GSH-PX活性測(cè)定

實(shí)驗(yàn)分為酶促反應(yīng)和顯色反應(yīng)兩部分。首先酶促反應(yīng)部分，各分組準(zhǔn)備酶管和非酶管，先在所有管中加入0.2 mL 1 mmol·L-1的GSH溶液，并在酶管中加入0.1 mL待測(cè)樣本，重懸混勻后，將所有管放在37 ℃的水浴鍋中反應(yīng)5 min，反應(yīng)結(jié)束后在所有管中加入0.1 mL稀釋了100倍后的貯備液，充分混勻后，37 ℃水浴鍋反應(yīng)5 min后在所有管中加入2 mL沉淀劑，并單獨(dú)在非酶管中加入0.1 mL待測(cè)樣本，充分混勻后，設(shè)置離心機(jī)條件為3500 r·min-1，離心10 min，收取各管上層清液1 mL做顯色反應(yīng)；根據(jù)試劑盒實(shí)驗(yàn)說明書顯色反應(yīng)部分設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、非酶管、酶管，先在空白管里加入1 mL GSH標(biāo)準(zhǔn)品的溶劑應(yīng)用液，標(biāo)準(zhǔn)管中則加入1 mL濃度為20 μmol·L-1的GSH標(biāo)準(zhǔn)液，非酶管和酶管加入酶促反應(yīng)的上層清液1 mL，隨后在所有的管中依次分別加入緩沖液1 mL和顯色劑250 μL還有穩(wěn)定劑50 μL。最后充分重懸混勻，常溫靜置15 min后，置于412 nm、1 cm光徑比色杯，用蒸餾水調(diào)零后，檢測(cè)各管OD值，根據(jù)OD度值計(jì)算各個(gè)分組的GSH-PX活性。

2.4 Western blotting檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)SOD和GSH-PX表達(dá)

按上述處理方法處理好細(xì)胞后，棄去培養(yǎng)基后用PBS清洗細(xì)胞表面2次，用現(xiàn)配的裂解液(RIPA裂解液：PMSF=100∶1)裂解細(xì)胞15 min，每隔5 min 搖一下細(xì)胞培養(yǎng)皿，確保裂解液充分接觸細(xì)胞表面，最后收集培養(yǎng)皿表面混合物并于4 ℃離心收集上清液得到細(xì)胞總蛋白，提取蛋白后通過BCA蛋白定量法檢測(cè)各分組的蛋白濃度，將提取到的總蛋白溶于上樣緩沖溶液中煮沸10 min，用9%的SDS-PAGE進(jìn)行電泳分離，隨后進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，將目的條帶濕轉(zhuǎn)到適宜的PVDF膜上，濕轉(zhuǎn)結(jié)束后將PVDF膜放入濃度為8%的脫脂牛奶中并在室溫條件下?lián)u床封閉2 h，封閉結(jié)束后用TBST清洗PVDF膜表面牛奶，最后把PVDF膜依次放入稀釋好的對(duì)應(yīng)的一抗中(稀釋倍數(shù)為1∶1000)，并置于4 ℃冰箱孵育過夜。次日將膜取出用TBST清洗，將PVDF膜放入相應(yīng)的二抗(稀釋倍數(shù)為 1∶2000)中，室溫置于搖床上2 h，TBST洗膜6次，每次7 min，最后用ECL化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測(cè)，將PVDF膜放置于Bio-Rad化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)儀中進(jìn)行顯影。最終圖片在Image-J軟件上進(jìn)行灰度值分析，將所得SOD和GSH-PX蛋白帶的灰度值分別除以對(duì)應(yīng)組β-actin的灰度值后，在Excel表中進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2.5 qRT-PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)SOD和GSH-PX mRNA的水平

將細(xì)胞均勻接種于60 mm培養(yǎng)板中，經(jīng)前期細(xì)胞分組處理后，棄去上清液，用PBS清洗細(xì)胞表面2次，采用Trizol法提取各組細(xì)胞的RNA，隨后將提取到的RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。1)殘留gDNA的去除體系為16 μL，4×2-Step gDNA Erase-Out Mix 4 μL，模板RNA 1 μg，42 ℃反應(yīng)2 min；2)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系為20 μL，5×ToloScript qRT EasyMix 4 μL，gDNA去除反應(yīng)液16 μL，37 ℃反應(yīng)15 min，85 ℃反應(yīng)5 s。通過qRT-PCR檢測(cè)SOD、GSH-PX mRNA的水平，PCR擴(kuò)增體系為20 μL，其中cDNA為2 μL，上下游引物各0.4 μL，2×SYBR Green qPCR Master Mix 10 μL，PCR循環(huán)數(shù)為40，95 ℃預(yù)變性15 min，95 ℃變性15 s，65 ℃退火15 s,72 ℃延伸30 s。

2.6 熒光法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平

將細(xì)胞均勻接種于六孔板上，經(jīng)前期處理后，采用活性氧檢測(cè)試劑盒，先將DCFH-DA和無血清細(xì)胞培養(yǎng)基按1∶1000的比例稀釋好后，從孵箱中取出處理好的細(xì)胞培養(yǎng)板，棄去細(xì)胞培養(yǎng)基，用PBS沖洗細(xì)胞表面后加入稀釋好的DCFH-DA，然后將細(xì)胞培養(yǎng)板放回孵箱孵育30 min，取出PBS清洗，吸凈PBS加入抗熒光淬滅劑，置于熒光倒置顯微鏡下觀察并計(jì)算出各組相對(duì)熒光強(qiáng)度(倍數(shù))。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 HG誘導(dǎo)心肌細(xì)胞的損傷模型

MTS檢測(cè)結(jié)果顯示：HG組葡萄糖處理濃度為20和30 mmol·L-1時(shí)細(xì)胞活力分別為(95.74±3.2)%和(89.7±5.3)%，與Ctrl組(5.5 mmol·L-1)相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；當(dāng)HG組葡萄糖濃度為40 mmol·L-1時(shí)細(xì)胞活力為(84.07±3.5)%，下降了15%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HG組葡萄糖濃度分別為50和60 mmol·L-1時(shí)，細(xì)胞活力分別為(66.77±5)%和(59.33±5)%(P<0.001)。LDH活性觀察結(jié)果顯示：當(dāng)葡萄糖處理濃度為5.5 mmol·L-1時(shí)，LDH為(83.33±10)U·L-1；當(dāng)葡萄糖處理濃度為50 mmol·L-1時(shí)，LDH為(108±4.5)U·L-1，LDH上升明顯(P<0.05)。提示，當(dāng)葡萄糖處理濃度為50 mmol·L-1時(shí)，細(xì)胞活力下降(P<0.001)和LDH活性升高(P<0.05)，表明HG誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷模型建立成功，可采用該模型進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。見圖1。

***P<0.001、*P<0.05與5.5 mmol·L-1比較，ns：P>0.05。圖1 不同葡萄糖濃度對(duì)細(xì)胞活力和LDH活性的影響(n=3)

3.2 ASP對(duì)HG誘導(dǎo)細(xì)胞活力的影響

CCK8檢測(cè)結(jié)果顯示：HG組和HG+ASP組細(xì)胞活力分別為(55.45±3.4)%和(61.61±4.8)%。與HG組相比，HG+ASP組細(xì)胞活力顯著升高，升高了6.5%(P<0.05)。見圖2。

#P<0.05，***P<0.001,ns：P>0.05。圖2 ASP對(duì)HG誘導(dǎo)的細(xì)胞活力影響(n=3)

3.3 ASP對(duì)LDH、SOD和GSH-PX活性以及MDA含量的影響

HG組的LDH活性為(114±7.5)U·L-1、MDA含量為(1.52±1.0)nmol·L-1、SOD活性為(11.13±0.75)U·mL-1、GSH-PX活性為(4.36±1.36)nmol·min-1·mL-1，HG+ASP組的LDH活性為(96±5.5)U·L-1、MDA含量為(1.12±0.21)nmol·L-1、SOD活性為(12.98±0.3)U·mL-1、GSH-PX活性為(27.78±1.08)nmol·min-1·mL-1。與HG組相比，HG+ASP組的SOD(P<0.05)、GSH-PX(P<0.05)的活性明顯上升，LDH活性(P<0.001)、MDA含量(P<0.001)顯著下降。見圖3。

###P<0.001,#P<0.05，***P<0.001,*P<0.05,ns：P>0.05。圖3 ASP對(duì)LDH、SOD和GSH-PX活性以及MDA含量的影響(n=3)

3.4 ASP對(duì)心肌細(xì)胞內(nèi)SOD和GSH-PX表達(dá)的影響

與Ctrl組比較，Ctrl+ASP組SOD和GSH-PX蛋白的表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而HG組的SOD蛋白表達(dá)量比Ctrl組降低了10%，GSH-PX降低了20%(P<0.01)；與HG組相比，HG+ASP組的SOD蛋白表達(dá)量上升43%，GSH-PX蛋白表達(dá)量上升86%(P<0.01)。見圖4。

3.5 ASP對(duì)心肌細(xì)胞內(nèi)SOD和GSH-PX mRNA水平的影響

qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與Ctrl相比，HG組的SOD mRNA水平表達(dá)量降低10%，GXH-PX mRNA水平表達(dá)量降低25.7%(P<0.05，P<0.001)，Ctrl+ASP組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與HG組比較，HG+ASP組的SOD mRNA水平增加11.8%，GSH-PX mRNA水平增加9%(P<0.05)。見圖5。

3.6 ASP對(duì)HG誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響

從熒光圖片和熒光強(qiáng)度分析結(jié)果可知，與Ctrl組相比，Ctrl+ASP組ROS水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而HG組ROS水平增加546%(P<0.001)；與HG組相比，HG+ASP組ROS含量下降62.8%(P<0.05)。表明，HG可顯著增加細(xì)胞內(nèi)ROS水平，而ASP可以顯著降低ROS水平。見圖6。

A—D為各組的熒光圖片(×100)，A：Ctrl組；B：Ctrl+ASP組；C：HG組；D：HG+ASP組。E為各組的相對(duì)熒光強(qiáng)度分析圖，###P<0.001，***P<0.001，ns：P>0.05。

4 討論

糖尿病是一種很常見的代謝性疾病，其主要特征為慢性高血糖，可導(dǎo)致細(xì)胞運(yùn)輸和利用葡萄糖的功能障礙[15]。慢性高血糖癥，會(huì)引發(fā)一系列長(zhǎng)期的并發(fā)癥，最終導(dǎo)致心力功能障礙/衰竭或心肌病[16]。DCM很容易導(dǎo)致糖尿病患者發(fā)生心力衰竭[4]。而氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡是DCM發(fā)生和進(jìn)展的最重要因素[16]。氧化應(yīng)激是指機(jī)體遭受到刺激之后，機(jī)體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生與沉積過多的氧化中間產(chǎn)物，這會(huì)導(dǎo)致機(jī)體的氧化功能失衡(伴或不伴抗氧化能力下降)。有研究[17-18]表明，機(jī)體內(nèi)的血糖含量增高可直接誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，它通過增加機(jī)體內(nèi)游離脂肪酸和生長(zhǎng)因子的水平，進(jìn)一步導(dǎo)致底物的供應(yīng)和利用以及鈣穩(wěn)態(tài)和脂質(zhì)代謝異常；除此以外，它還會(huì)進(jìn)一步促進(jìn)ROS的大量產(chǎn)生和釋放，從而誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，造成基因表達(dá)異常，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)錯(cuò)誤和心肌細(xì)胞凋亡。本研究主要通過HG(50 mmol·L-1)作用H9C2細(xì)胞來模擬機(jī)體HG環(huán)境下的心肌，CCK8檢測(cè)細(xì)胞活力和檢測(cè)細(xì)胞LDH活性結(jié)果顯示，高濃度葡萄糖可以造成H9C2細(xì)胞損傷。

ASP可以調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物體內(nèi)的血糖平衡，其在禁食狀態(tài)下產(chǎn)生后轉(zhuǎn)移到肝臟，進(jìn)一步激活G蛋白-cAMP-PKA信號(hào)通路以促進(jìn)肝臟釋放葡萄糖進(jìn)入血液，從而調(diào)節(jié)血糖[7]。有研究[18]發(fā)現(xiàn)大多數(shù)2型糖尿病患者分泌ASP的時(shí)候沒有節(jié)律性，這有可能是導(dǎo)致糖尿病發(fā)生的原因。有研究[19]表明ASP可通過上調(diào)Spartin通路抑制HG或高血糖誘導(dǎo)糖尿病小鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞(CMECs)的氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而改善糖尿病小鼠心肌微血管內(nèi)皮損傷。本研究發(fā)現(xiàn)用濃度為20 nmol·L-1的ASP處理細(xì)胞后，可以逆轉(zhuǎn)HG誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞活力下降和LDH活性升高，說明ASP對(duì)HG造成的H9C2細(xì)胞損傷具有改善作用；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，ASP處理組細(xì)胞上清液中的MDA含量降低、SOD和GSH-PX活性升高，并且細(xì)胞中SOD和GSH-PX的蛋白和mRNA的表達(dá)均出現(xiàn)顯著性升高，ASP處理組細(xì)胞中ROS的生成也減少。因此推斷ASP是通過增加細(xì)胞活性，促進(jìn)氧自由基的清除來保護(hù)心肌細(xì)胞免受葡萄糖的損害。

綜上，本研究主要通過HG誘導(dǎo)建立心肌細(xì)胞體外損傷模型，模擬糖尿病心肌損傷，心肌損傷時(shí)會(huì)引起一系列氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞活力下降、ROS穩(wěn)態(tài)失衡和部分炎癥因子釋放，通過ASP干預(yù)治療可以降低部分氧化應(yīng)激從而達(dá)到減弱HG導(dǎo)致的心肌損傷。這也為DCM防治提供了一種新的可能。