王寧，紀(jì)昌春，萬鵬，畢宇峰

（1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，咸陽(yáng) 710046；2.陜西省中醫(yī)醫(yī)院針灸康復(fù)醫(yī)院，西安 710003）

腹瀉型腸易激綜合征（IBS-D）是由多種原因引起的一種功能性腸道疾病，人群發(fā)病率約占總腸易激綜合征40.83%[1]，且病程長(zhǎng)、難治愈、易復(fù)發(fā)，嚴(yán)重的導(dǎo)致患者生活質(zhì)量下降。然而目前IBS-D的病因及發(fā)病機(jī)制尚未明確，治療上西醫(yī)通常使用止瀉劑、解痙藥、益生菌等對(duì)癥治療為主，目前尚缺乏特效藥物治療[2-3]。中醫(yī)以其獨(dú)特的理論體系及診療方法對(duì)于臨床治療IBS-D的療效優(yōu)勢(shì)日益凸顯，而辨證論治是其良好療效的根本保障。近年來，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)中醫(yī)治療本病的作用機(jī)制不斷深入，建立病證結(jié)合動(dòng)物模型是中醫(yī)研究IBS-D的核心所在。目前，已有學(xué)者采用多種方法構(gòu)建IBS-D病證結(jié)合動(dòng)物模型。

1 腹瀉型腸易激綜合征多因素聯(lián)合動(dòng)物模型的建立及相關(guān)評(píng)價(jià)指標(biāo)

1.1 IBS-D多因素聯(lián)合動(dòng)物模型的建立 IBS-D動(dòng)物模型大多選擇SD大鼠，其次從Wistar大鼠，小鼠，豚鼠和兔子中選擇。關(guān)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的性別，一些文獻(xiàn)僅限于雄性或雌性，而另一些則根據(jù)雌雄各半的比例選擇動(dòng)物。腹瀉和內(nèi)臟高敏感是IBS-D的動(dòng)物模型具備的兩大主要特征。目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)運(yùn)用較多的造模方法有：采用冰番瀉葉、辣素、大黃水煎液等藥物以導(dǎo)瀉；乙酸等化學(xué)藥物灌腸刺激；急、慢性應(yīng)激；母嬰分離法和直結(jié)腸球囊擴(kuò)張法[4-5]等。化學(xué)藥品（如：乙酸等）灌腸刺激及急慢性應(yīng)激均會(huì)造成內(nèi)臟高敏感性和情緒應(yīng)激障礙的雙重作用。母嬰分離和新生兒直腸球囊擴(kuò)張刺激的方法模擬了早期負(fù)面生活事件引起的心理壓力，形成的內(nèi)臟高敏反應(yīng)可以持續(xù)到成年。近年來在上述的多種造模方法中，目前多數(shù)學(xué)者應(yīng)用多因素復(fù)合法制備IBS-D動(dòng)物模型，其中應(yīng)激反應(yīng)聯(lián)合其他方法是IBS-D最為常用的造模方法。王一程等[6]研究發(fā)現(xiàn)母嬰分離聯(lián)合束縛應(yīng)激+冰水應(yīng)激+夾尾應(yīng)激3種應(yīng)激方式建立的IBS-D模型，能較好的復(fù)制出IBS-D腹瀉、內(nèi)臟高敏感和心理抑郁的情況。Shan等[7]采用一種新型方式即慢、急性結(jié)合應(yīng)激（CAS）成功復(fù)制IBS-D大鼠模型。韓亞飛等[8]采用球囊直腸刺激+冰醋酸灌腸+夾尾刺激+0.5 g/mL的番瀉葉濃縮劑（給藥體積為20 mL/kg）灌胃成功制備IBS-D模型。張濤等[9]研究發(fā)現(xiàn)束縛應(yīng)激+夾尾刺激+0.25%辣素灌胃，持續(xù)2周制備的IBS-D大鼠模型與IBS-D患者較為相似，因其具備腹瀉頻次和內(nèi)臟敏感性增加、肥大細(xì)胞表達(dá)升高等特點(diǎn)，且該方法簡(jiǎn)單易行，認(rèn)為值得推廣應(yīng)用。

目前還有文獻(xiàn)提出當(dāng)給藥劑量和濃度及急、慢性束縛應(yīng)激的刺激量和周期不合適時(shí)，均不能穩(wěn)定地誘導(dǎo)出IBS-D模型。周天然等[10]研究發(fā)現(xiàn)慢性束縛應(yīng)激的刺激量為束縛2 h/d且持續(xù)束縛14 d，才能復(fù)制出較成熟的IBS-D模型。此外，該研究在束縛應(yīng)激中使用了創(chuàng)新性的束縛器材——用醫(yī)用彈性網(wǎng)狀繃帶來束縛大鼠。馬曉玲等[11]在采用慢性束縛應(yīng)激+特殊飲食制備IBS-D大鼠模型的時(shí)效及量效關(guān)系中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)束縛時(shí)間在1 h以上，飼料中乳糖比例＞30%，連續(xù)造模7～14 d時(shí)可成功制備出IBS-D模型。此外，趙妍等[12]研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)用0.3 g/mL番瀉葉灌胃+束縛時(shí)間1 h制備出的IBS-D模型在內(nèi)臟敏感性及腹瀉指數(shù)上具有一定的優(yōu)勢(shì)。張北華等[13]在比較幾種不同IBS-D大鼠造模方法時(shí)發(fā)現(xiàn)：新生期母子分離+4.5 g/kg番瀉葉灌胃或高乳糖飼料飼養(yǎng)所致大鼠模型可模擬IBS-D的主要臨床特征，認(rèn)為其是較為理想的造模方法。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)4%的醋酸溶液、外源性5-HT等方法造模時(shí)有一定的缺陷，難以與IBS-D模型的特征相一致。

綜上所述，上述復(fù)合因素復(fù)制的動(dòng)物模型比較接近臨床患者的表現(xiàn)，也較為成熟，是目前國(guó)內(nèi)外比較認(rèn)可的造模方法。但在病因和發(fā)病機(jī)制的多因素化、復(fù)雜化和個(gè)體特殊化等方面存在一定的局限性，并且藥物的濃度及給藥藥量、應(yīng)激時(shí)間等都會(huì)影響IBS-D模型的制備。

1.2 疾病模型的評(píng)價(jià) 目前對(duì)于IBS-D疾病模型的評(píng)估主要是對(duì)其兩大主要特征（腹瀉和內(nèi)臟高敏感性）的評(píng)價(jià)。其中，腹瀉可采用布里斯托bristol大便分級(jí)法、腹瀉指數(shù)、一定時(shí)間內(nèi)動(dòng)物的排便粒數(shù)、糞便含水量及糞便積分等作為評(píng)價(jià)方法。布里斯托bristol大便分級(jí)是評(píng)估大便形態(tài)最簡(jiǎn)單、有效的工具。腹瀉指數(shù)在評(píng)價(jià)不成形糞便時(shí)具有優(yōu)勢(shì)；一定時(shí)間內(nèi)的排便粒數(shù)反映了動(dòng)物大便的頻率；糞便含水量的估算則需要先稱原大便重量，然后用特有設(shè)備烘干大便稱其干重，最后通過計(jì)算公式得出結(jié)果。該方法雖比較繁瑣，但相對(duì)客觀；大便積分將大便次數(shù)和性狀結(jié)合在一起，是根據(jù)糞便性狀分別賦予不同的數(shù)值，并結(jié)合大便粒的數(shù)量進(jìn)行計(jì)算的，該方法操作簡(jiǎn)便。腹壁肌電活動(dòng)、腹壁撤退反射（AWR）等方法可進(jìn)行評(píng)估內(nèi)臟敏感性的增加。此外，結(jié)合結(jié)腸組織學(xué)觀察，其病理變化應(yīng)與功能性腸病的特點(diǎn)相一致[6-13]。

2 IBS-D證候模型研究概況

隨著近年來研究的深入，構(gòu)建IBS-D病證結(jié)合模型的方法主要是基于西醫(yī)IBS-D模型再結(jié)合相關(guān)致病因素制備。根據(jù)中醫(yī)的病因病機(jī)采取化學(xué)藥物、物理和機(jī)械刺激3種方法，或制備特殊飲食，或模擬相關(guān)外界環(huán)境等來使原有動(dòng)物狀態(tài)及身體條件發(fā)生變化，表現(xiàn)出與相關(guān)證型相符合的癥狀和體征，從而構(gòu)建出證型和疾病兼具的模型。目前諸多學(xué)者已成功制備出肝郁脾虛證、脾腎陽(yáng)虛證和脾胃濕熱證等IBS-D動(dòng)物模型。

2.1 肝郁脾虛證的IBS-D動(dòng)物模型的建立及評(píng)價(jià)

2.1.1 肝郁脾虛證的IBS-D動(dòng)物模型的建立 肝郁脾虛的IBS-D模型與其他證候的模型相比，它更加完整和成熟。中醫(yī)認(rèn)為本型IBS-D的病因主要與情志等因素密切相關(guān)，病機(jī)主要為肝氣疏泄失職，氣郁太過則犯脾，繼則脾失運(yùn)化而致泄瀉。故肝郁脾虛證IBS-D動(dòng)物模型在復(fù)制出IBS-D疾病模型的同時(shí)還要多從情志、飲食、化學(xué)及物理刺激等致病因素來使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝氣不舒，脾失健運(yùn)，從而導(dǎo)致其出現(xiàn)胃腸動(dòng)力紊亂及焦慮抑郁等肝郁脾虛癥狀。近年來，諸多學(xué)者建立肝郁脾虛證IBS-D模型大多采用兩個(gè)因素以上的方式聯(lián)合制備，常采用藥物導(dǎo)瀉以及應(yīng)激反應(yīng)等方式。在藥物刺激方面多選擇影響脾胃功能而致瀉的中藥或是化學(xué)藥品，如番瀉葉、大黃、冰醋酸等。羅丹妮等[14]結(jié)合脾虛及肝郁兩點(diǎn)因素，選用0.3 g/mL的番瀉葉浸劑按10 mL/kg的劑量灌胃+慢性不可預(yù)知輕度應(yīng)激，連續(xù)2周成功制備出IBS-D模型。其中采用的慢性不可預(yù)知輕度應(yīng)激是一種常用的抑郁、焦慮造模方式，且具有導(dǎo)致內(nèi)臟高敏感性及情緒應(yīng)激性障礙的雙重作用，從而產(chǎn)生類似肝郁的表現(xiàn)，并以番瀉葉浸劑導(dǎo)瀉產(chǎn)生脾虛類似癥狀，復(fù)制出IBS-D肝郁脾虛型病證癥結(jié)合大鼠模型。鐘毅等[15]同樣采用番瀉葉（濃度：0.4 g/kg；給藥體積：0.1 mL/kg）灌胃+饑飽失常（隔日喂食）+強(qiáng)迫游泳法（溫度：22～25℃，水深70 cm，游泳至頭沒入水下≥10 s未浮出）連續(xù)2周復(fù)制出肝郁脾虛證IBS-D大鼠模型。張北華[16]選取番瀉葉水煎劑（4.5 g/kg）灌胃1周+母子分離+慢性束縛應(yīng)激3周，成功制備肝郁脾虛證IBS-D大鼠模型。郭軍雄等[17]認(rèn)為0.4 g/mL番瀉葉劑按4g/（kg·d）灌胃法聯(lián)合傳統(tǒng)束縛應(yīng)激法連續(xù)進(jìn)行2周復(fù)建的模型可能存在免疫平衡漂移。

此外，葉曉梅等[18]采用乙酸灌腸+夾尾激怒+束縛應(yīng)激法，連續(xù)造模3周，復(fù)制了肝郁脾虛型IBS大鼠模型。還有文獻(xiàn)報(bào)道[19]采用“精神刺激+飲食失常+過度疲勞”方法復(fù)制出肝郁脾虛型IBS-D動(dòng)物模型。具體方法是：利用冷水（11±1）℃游泳至精疲力竭（頭沒入水下 5 s）；禁食、禁水 24 h；高溫（45℃）烤箱15 min；夾尾5 min；30 V電壓電擊5 s后，間歇5 s，共電擊180 s；以上6種刺激，每天隨機(jī)選擇一種刺激再結(jié)合自制鐵籠束縛1 h，共循環(huán)3個(gè)周期成功制備出肝郁脾虛型IBS-D動(dòng)物模型。

2.1.2 肝郁脾虛型特征的評(píng)價(jià)方法 肝郁脾虛證患者表現(xiàn)為：腹痛、腹瀉、急躁易怒、情緒低落，或善太息等。因此可通過借鑒焦慮抑郁癥的評(píng)價(jià)方法對(duì)中醫(yī)肝郁證IBS-D模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。常用的評(píng)價(jià)方法有：1）一般狀態(tài)觀察：通過大鼠皮毛變化（毛發(fā)凌亂、弓背蜷縮等）、對(duì)外界刺激反應(yīng)遲鈍、精神心理狀態(tài)情況等來評(píng)價(jià)。2）相關(guān)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)：如模型鼠內(nèi)臟敏感性增加、糖水偏愛度增加，高架十字迷宮、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)水平和垂直運(yùn)動(dòng)降低等。此外，脾主運(yùn)化，脾失健運(yùn)則出現(xiàn)不思飲食，便溏等癥狀，因此從體重變化、飲食較少、大便不成形等狀態(tài)、大便頻次、腹瀉指數(shù)等指標(biāo)進(jìn)行脾虛癥狀評(píng)價(jià)[14-22]。

2.2 脾腎陽(yáng)虛證的IBS-D動(dòng)物模型的建立及評(píng)價(jià)

2.2.1 脾腎陽(yáng)虛證的IBS-D動(dòng)物模型的建立 中醫(yī)認(rèn)為先天不足、病后體虛、飲食失宜及感受外邪等因素均可致脾腎陽(yáng)虛，從而出現(xiàn)雞鳴瀉，腹部冷痛等一系列脾腎陽(yáng)虛的癥狀。脾腎陽(yáng)虛型IBS-D在臨床中十分常見。目前脾腎陽(yáng)虛型IBS-D模型主要是基于中醫(yī)基礎(chǔ)理論指導(dǎo)，以物理、化學(xué)因素為主，結(jié)合苦寒瀉下傷陽(yáng)等飲食失調(diào)、勞倦過度及驚恐傷腎等來模擬中醫(yī)的致病因素，選用幾種因素復(fù)合制備脾腎陽(yáng)虛證模型。如劉佳星等[23]結(jié)合腎陽(yáng)虛和脾陽(yáng)虛兩點(diǎn)因素，采用0.2 g/kg腺嘌呤灌胃28 d+10 mL/kg的冰番瀉葉水浸劑灌胃14 d成功制備出脾腎陽(yáng)虛型IBS-D大鼠模型。史海霞等[24]采用母嬰分離3周聯(lián)合1 g/mL番瀉葉水煎液按10 mL/kg灌胃4周，制備出脾腎陽(yáng)虛型IBS-D大鼠模型后，并通過腹壁撤退反射、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)等指標(biāo)評(píng)估IBS-D模型大鼠成功制備。此外，譚瑋璐[25]采用每日2次以200%番瀉葉濃縮溶液按20 mL/kg灌胃，再聯(lián)合束縛應(yīng)激，共14 d制備出IBS-D大鼠模型后，用溫腎健脾法附子理中湯劑治療后發(fā)現(xiàn)此湯藥可改善腸道免疫功能、保持免疫穩(wěn)態(tài)從而達(dá)到治療效果。此模型的建立在一定程度上體現(xiàn)IBS-D動(dòng)物模型的特點(diǎn)，但筆者認(rèn)為在該研究過程中并未描述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在中醫(yī)證候脾腎陽(yáng)虛方面的變化，而是僅僅憑借實(shí)驗(yàn)指標(biāo)推斷出附子理中湯對(duì)IBS-D癥狀有所改善。因此有必要進(jìn)一步研究脾腎陽(yáng)虛證IBS-D的造模，完善相應(yīng)的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，以期縮小模型與中醫(yī)臨床表現(xiàn)實(shí)際的差距。

2.2.2 脾腎陽(yáng)虛型特征的評(píng)價(jià)方法 脾腎陽(yáng)虛證患者多表現(xiàn)為五更瀉，腹部冷痛，四肢發(fā)涼，怕冷、乏力、腰膝酸軟等癥狀，因此對(duì)中醫(yī)脾腎陽(yáng)虛證動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)首先可通過其宏觀體征進(jìn)行評(píng)估——脾腎陽(yáng)虛大鼠常表現(xiàn)為大便稀軟不成形，體溫下降、怕冷、自主活動(dòng)減少、反應(yīng)慢、弓背蜷縮、體毛枯疏、體重減輕等。其次，還可通過實(shí)驗(yàn)指標(biāo)、相關(guān)理化指標(biāo)等方面進(jìn)行評(píng)價(jià)。如負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)及曠場(chǎng)試驗(yàn)，可反映脾腎陽(yáng)虛大鼠自主活動(dòng)能力的下降。此外，如尿D-木糖排泄率或血清D-木糖含量等理化指標(biāo)可測(cè)定大鼠的吸收功能，從而客觀反應(yīng)脾的生理功能；血漿中環(huán)磷酸腺苷、磷酸鳥苷以及24 h尿17-羥類固醇含量是公認(rèn)的反映腎陽(yáng)虛證特異性病理變化的指標(biāo)[24-27]。

2.3 脾胃濕熱證的IBS-D動(dòng)物模型的建立及評(píng)價(jià)

2.3.1 脾胃濕熱證的IBS-D動(dòng)物模型的建立 中醫(yī)認(rèn)為脾胃濕熱證的IBS-D多因感受濕熱之邪，或過食肥甘厚膩所致腸腑傳化失常，而發(fā)生泄瀉。目前，關(guān)于脾胃濕熱型IBS-D模型相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道較少，其模型主要是在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)疾病動(dòng)物模型基礎(chǔ)上給予內(nèi)、外致病因素等制備，牛曉玲等[28]分別從外在和內(nèi)在濕熱兩方面制備此模型，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于高溫潮濕的環(huán)境中以模擬外界濕度，并且給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物高脂肪、高糖分等飲食方法以損傷脾胃從而制備脾胃濕熱的IBS-D模型。具體方法為：SD大鼠經(jīng)歷2周母嬰分離后，再給予普通飼料+12%豬油+8%蜂蜜混合喂養(yǎng)并每日按2 mL/kg劑量灌服一次大黃水煎液，連續(xù)1周，第4周進(jìn)行直腸內(nèi)氣囊擴(kuò)張并將大鼠置入的濕熱環(huán)境（T：32±2℃、相對(duì)濕度90%～95%）中，1 h/次，2次/d；第5周進(jìn)行夾尾和束縛應(yīng)激連續(xù)進(jìn)行14 d，第7周停止造模。

2.3.2 脾胃濕熱證IBS-D特征的評(píng)價(jià)方法 脾胃濕熱證患者其表現(xiàn)為瀉下急迫，大便溏滯不爽，肛門灼熱不適，口干、口苦或口臭，舌紅，苔黃膩，脈滑數(shù)等臨床特點(diǎn)。但根據(jù)動(dòng)物癥狀辨別的可行性，可通過觀察一般狀態(tài)進(jìn)行評(píng)價(jià)：在模型動(dòng)物后期，體質(zhì)量降低，無精打采，毛發(fā)松散粗糙，自由活動(dòng)減少，大便時(shí)干時(shí)塘等作為觀察指標(biāo)。

3 展望

IBS-D根據(jù)疾病表現(xiàn)屬于中醫(yī)“泄瀉”“腹痛”等范疇，根據(jù)《腸易激綜合征中醫(yī)診療專家共識(shí)意見（2017）》確定IBS-D包括脾虛濕阻、脾腎陽(yáng)虛、寒熱錯(cuò)雜、肝郁脾虛和脾胃濕熱5個(gè)中醫(yī)證型。然而，并未隨著證型分布的增加而構(gòu)建出新增的病證結(jié)合的IBS-D動(dòng)物模型。近年來脾虛濕阻和寒熱錯(cuò)雜等證型的病人臨床上也較多見，但目前研究卻很少涉及，因此有必要建立脾虛濕阻和寒熱錯(cuò)雜的病證結(jié)合的IBS-D模型，以深入了解本病的發(fā)病機(jī)理。此外，在已知的IBS-D動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，目前許多學(xué)者已經(jīng)意識(shí)到制備病證結(jié)合模式下動(dòng)物模型時(shí)存在疾病與證候關(guān)聯(lián)性不強(qiáng)，所選動(dòng)物與疾病人群體質(zhì)不符，缺乏病證結(jié)合動(dòng)物模型評(píng)價(jià)體系的問題，尤其是在模型評(píng)價(jià)方面，目前對(duì)于如舌苔、脈象這類不易得到又而與中醫(yī)的辨證、診斷密切相關(guān)的宏觀觀察指標(biāo)，該如何提取、檢測(cè)以及建立相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)是今后動(dòng)物模型研究中應(yīng)該努力的方向。其次，模型應(yīng)用中也存在忽視模型的周期性，忽視造模給藥的濃度及藥量等對(duì)動(dòng)物模型影響的問題。這些也是十分需要解決的問題，值得進(jìn)一步研究。綜上所述，IBS-D動(dòng)物模型的發(fā)展方向其中之一是病證結(jié)合方法的應(yīng)用。對(duì)于不同的病因病機(jī)、證候等特點(diǎn)，需要不斷完善IBS-D的模型，并且需要不斷探索、修正。只有要經(jīng)過大量而深入的實(shí)踐檢驗(yàn)，才能真正地推動(dòng)中醫(yī)藥研究IBS-D的不斷進(jìn)步。