劉鳳蓮， 丁志芳

（江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院檢驗科，江蘇 鎮(zhèn)江 212000）

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種慢性、系統(tǒng)性自身免疫性疾病，主要病理特征為對稱性、侵蝕性關(guān)節(jié)炎[1-2]，發(fā)病率為0.5%～1.0%[3]。目前，RA的診斷除依靠臨床癥狀、X線檢查外，還需結(jié)合血清學(xué)指標(biāo)。有研究結(jié)果顯示，血清抗突變型瓜氨酸波形蛋白（mutated citrullinated vimentin，MCV）IgG抗體與RA患者病情活動程度及影像學(xué)改變密切相關(guān)[4]。及時、準(zhǔn)確、高效地檢測抗MCV IgG抗體濃度對于RA的早期篩查及疾病活動度監(jiān)測至關(guān)重要。目前，針對臨床化學(xué)定量分析的方法學(xué)評價已較為成熟，但酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）屬于免疫學(xué)檢測方法，有不同于臨床化學(xué)定量分析的特點。因此，本研究參考美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）相關(guān)文件[5-9]和我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 494—2017[10]，對江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院檢驗科引進(jìn)的Alegria全自動自身免疫分析儀及配套試劑（ELISA）組成的檢測系統(tǒng)（簡稱Alegria系統(tǒng)）定量檢測抗MCV IgG抗體進(jìn)行性能驗證。

1 材料和方法

1.1 樣本來源

收集2019年1—3月江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院檢驗科檢測抗MCV IgG抗體且符合實驗要求的樣本，制備混合血清。同時收集20份健康體檢者血清樣本。所有樣本均按要求離心分離血清后置于-20 ℃保存待用。所有樣本均無明顯溶血、脂血、黃疸等。

1.2 儀器與試劑

Alegria全自動自身免疫分析儀（德國ORGENTEC公司）及配套抗MCV IgG抗體測定試劑盒（ELISA）、校準(zhǔn)品。由于每個檢測條均自帶質(zhì)控孔，因此每次測試只要儀器報告“passed”，即可判定質(zhì)控合格。每次檢測時只有質(zhì)控通過方可判定測定結(jié)果有效。

1.3 性能驗證

1.3.1 精密度驗證 根據(jù)CLSI EP15-A2文件[7]要求，對高值[（500±40）U/mL]樣本、低值[（40±5）U/mL]樣本連續(xù)重復(fù)測20次，用于評估批內(nèi)精密度[用變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）表示]；每天對高、低值樣本重復(fù)檢測4次，連續(xù)檢測5 d，用于評估批間精密度（CV）。如精密度符合廠商聲明（CV≤10%），則驗證通過。

1.3.2 正確度驗證 參考CLSI EP15-A2文件[7]要求，每天重復(fù)測定2次高值（300 U/mL）、低值（40 U/mL）定值標(biāo)準(zhǔn)品，連續(xù)測定5 d，計算檢測結(jié)果的x、s及驗證區(qū)間。

1.3.3 線性范圍驗證 參考CLSI EP6-A文件[8]要求，取高值[（500±40）U/mL，標(biāo)記為H]和低值[（40±5）U/mL，標(biāo)記為L]混合血清各1份，按照5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H的比例配成6個系列濃度樣本（標(biāo)記為S1～S6）。分別對S2、S4進(jìn)行10次檢測，計算x，根據(jù)公式計算低值樣本和高值樣本的預(yù)期濃度值：L=（3×S2-S4）/10；H=（2×S4-S2）/5。按比例關(guān)系計算其他樣本的預(yù)期濃度值。將6個系列濃度樣本隨機(jī)重復(fù)檢測5次，計算x，作為各自的實測值。以預(yù)測值為橫坐標(biāo)、實測值為縱坐標(biāo)繪圖，進(jìn)行回歸分析，計算各樣本預(yù)期值與實測值的相對偏移，相對偏移（%）=（預(yù)測值-實測值）/預(yù)測值×100%。如結(jié)果滿足r2≥0.99且相對偏移＜15%，則線性范圍驗證通過。

1.3.4 參考區(qū)間驗證 參考CLSI C28-A3文件[9]要求，選取江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院健康體檢者20名，其中男10名、女10名，年齡21～76歲。嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，采用Alegria系統(tǒng)檢測抗MCV IgG抗體。如檢測結(jié)果有≤10%在廠商聲明的參考區(qū)間外，則參考區(qū)間驗證通過。

2 結(jié)果

2.1 精密度驗證結(jié)果

Alegria系統(tǒng)檢測高、低值樣本的批內(nèi)CV分別為6.50%、4.39%，批間CV分別為7.32%、5.42%，均低于廠商聲明的精密度（CV≤10%），精密度驗證通過。見表1。

表1 精密度驗證結(jié)果

2.2 正確度驗證結(jié)果

低值定值標(biāo)準(zhǔn)品的實測值為40.71 U/mL，s為1.01 U/mL，驗證區(qū)間為37.43～43.99 U/mL；高值定值標(biāo)準(zhǔn)品的實測值為289.78 U/mL，s為4.36 U/mL，驗證區(qū)間為275.63～303.93 U/mL。高、低值定值標(biāo)準(zhǔn)品的驗證區(qū)間均包含定值，且相對差值均＜15%，正確度驗證通過。

2.3 線性范圍驗證結(jié)果

線性回歸方程為Y=1.027X-5.17（r2=0.993），實測值與預(yù)期值的相對偏移均＜15%，廠商聲明的線性范圍（89.2～726.6 U/mL，r2≥0.95）驗證通過。見表2、圖1。

表2 6份系列濃度樣本檢測結(jié)果

圖1 Alegria系統(tǒng)檢測抗MCV IgG抗體的線性擬合曲線

2.4 參考區(qū)間驗證結(jié)果

20名健康體檢者的血清抗MCV IgG抗體檢測結(jié)果僅有1名超出廠商聲明的參考區(qū)間（0～20 U/mL），參考區(qū)間驗證通過。

3 討論

檢測系統(tǒng)良好的性能是保證檢驗結(jié)果準(zhǔn)確的前提[11]。本研究參考CLSI相關(guān)文件[5-9]和我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 494—2017[10]，對Alegria系統(tǒng)檢測抗MCV IgG抗體的精密度、正確度、線性范圍及參考區(qū)間進(jìn)行了驗證。結(jié)果顯示，Alegria系統(tǒng)檢測抗MCV IgG抗體高、低值樣本的批內(nèi)精密度分別為6.50%、4.39%，批間精密度分別為7.32%、5.42%，符合廠商聲明的精密度要求。高、低值定值標(biāo)準(zhǔn)品的驗證區(qū)間均包含定值，且相對差值均＜15%，正確度驗證通過。線性回歸方程為Y=1.027X-5.17（r2=0.993），實測值與預(yù)期值的相對偏移＜15%，廠商聲明的線性范圍（89.2～726.6 U/mL）驗證通過。20名健康體檢者的血清抗MCV IgG抗體檢測結(jié)果僅有1名超出廠商聲明的參考區(qū)間（0～20 U/mL），參考區(qū)間驗證通過。

Alegria系統(tǒng)與其他自身免疫項目檢測系統(tǒng)相比，具有以下幾大優(yōu)勢：（1）檢測項目廣，可檢測包括抗MCV IgG抗體在內(nèi)的80余種免疫學(xué)項目；（2）自帶溫控溫育系統(tǒng)，穩(wěn)定性、重復(fù)性均較好；（3）通量高，90 min可檢測30份不同的樣本；（4）樣本用量少，靈敏度和抗干擾能力均較強(qiáng)[12]。

綜上所述，Alegria系統(tǒng)檢測抗MCV IgG抗體的精密度、正確度、線性范圍、參考區(qū)間均符合要求，具有良好的檢測性能，可用于臨床檢測。