劉潔瑩，陳曉銘（.廣東醫(yī)科大學，廣東湛江 524023；2.廣東醫(yī)科大學附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科，廣東湛江 52400）

甲狀腺癌是內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，在全球最常見的惡性腫瘤中排名第8 位[1]，發(fā)病率呈上升趨勢，其中甲狀腺乳頭狀癌（PTC）發(fā)病率最高，占80%～ 85%[2]，晚期PTC 患者的5 年生存率僅為59%[3]。DNA 突變（如BRAFV600E 突變）、非編碼RNA（ncRNA）均參與PTC 的發(fā)生和發(fā)展[4‐6]。環(huán)狀RNA（circular RNA，circRNA）呈共價環(huán)狀結(jié)構(gòu)，沒有5'‐3'極性與多聚腺苷酸尾[7]，因而具有更長的半衰期，更能抵抗RNA 降解[8]。circRNA 根據(jù)連接模式和組成分為9 種類型，其中外顯子circRNA、內(nèi)含子circRNA 及外顯子-內(nèi)含子circRNA 最具代表性[9]。circRNA 具有充當miRNA 海綿、與RNA 結(jié)合蛋白相互作用、調(diào)節(jié)可變剪接和轉(zhuǎn)錄、被翻譯成蛋白質(zhì)/肽等功能[10]，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起調(diào)控作用，有望成為新的腫瘤標志物和治療靶點[11]。本文就circRNA 在PTC 中的差異表達譜、生物學功能以及臨床意義進行綜述。

1 circRNA 在PTC 中的差異表達譜

目前，RNA 測序和基因表達微列陣技術(shù)已被廣泛應用于構(gòu)建circRNA 差異表達譜。Peng 等[12]對18個甲狀腺樣本（6 個PTC 組織、6 個匹配的癌旁組織和 6 個良性甲狀腺疾病組織）進行微陣列分析，發(fā)現(xiàn)PTC 中有88 個表達上調(diào)的circRNAs 及10 個表達下調(diào)的circRNAs。而相對于良性甲狀腺疾病，PTC 中有129 個表達上調(diào)的circRNAs 及226 個表達下調(diào)的circRNAs。其中，有12 個表達上調(diào)circRNAs 和4 個表達下調(diào)的circRNAs 重疊。Ren 等[13]使用circRNA 微陣列在PTC 組織中鑒定出206 個上調(diào)的circRNAs 和177個下調(diào)的circRNAs。Zhang 等[14]通過RNA 測序構(gòu)建了PTC 的circRNA 差異表達譜，并通過體外細胞實驗證實沉默circTIAM1 可以抑制PTC 細胞的遷移、增殖和凋亡。Ye 等[15]通過微陣列分析檢測circRNA 在5對PTC 組織和正常組織中的相對表達，共篩選出1137個顯著差異表達的circRNAs，其中678 個circRNAs 顯著高表達，459 個circRNAs 顯著低表達。通過對比，我們發(fā)現(xiàn)不同研究者構(gòu)建的circRNA 差異表達譜并不完全一致，原因可能是：選擇的檢測方法不同，微陣列需基于預先設計的標記探針與目標cDNA 序列進行雜交，而RNA 測序可直接對cDNA 鏈進行測序；使用的微列陣芯片不同，不同的芯片包含的探針不同；選擇的PTC組織樣本具有個體差異及腫瘤分期不同。同時被不同檢測方法或者不同芯片證實差異表達的circRNA 失調(diào)的可能性更大，在更多PTC 樣本及細胞系中差異表達的circRNA 亦然。

2 circRNA 在PTC 中的生物學功能

癌細胞在腫瘤進展的過程中會發(fā)生很多特征性改變，這些改變包括促進血管生成、獨立于外源性生長促進或生長抑制信號進行增殖、逃避凋亡以及侵犯周圍組織并遠處轉(zhuǎn)移等[16]。而circRNA 可能與這些細胞生物學特征有關(guān)。Xue 等[17]發(fā)現(xiàn)circPRMT5 在PTC 組織和細胞系中顯著高表達，沉默CircPRMT5 可抑制PTC細胞增殖、侵襲和遷移，同時誘導細胞凋亡。Wang等[18]通過體外功能實驗證實，過表達circ‐ITCH 可抑制PTC 細胞增殖和侵襲，并促進細胞凋亡。Mao 等[19]發(fā)現(xiàn)沉默circRPS28 可抑制PTC 細胞的活力及細胞的遷移、侵襲能力，減低集落形成數(shù)，降低傷口愈合率及提升細胞的凋亡能力。Long 等[20]發(fā)現(xiàn)過表達hsa_circ_0007694 可在體外促進PTC 細胞的凋亡并抑制增殖、侵襲和遷移，還可以在體內(nèi)抑制腫瘤生長。Cai 等[21]發(fā)現(xiàn)circBACH2 是一種致癌因子，沉默circBACH2抑制PTC 細胞的增殖、遷移和侵襲。綜上，不難看出circRNA 在PTC 中既可以作為致癌因子，也可以作為抑癌因子，不同差異表達的circRNA 在PTC 的生物學功能不盡相同。

3 circRNA 在PTC 中的臨床意義

3.1 circRNA 水平與PTC 臨床病理特征的關(guān)系

hsa_circRNA_007148[13]、circFOXM1[15]、circBACH2[21]、circ_0006156[22]、hsa_circ_0058124[23]、hsa_circ_0004458[24]、circ_0008274[25]、circZFR[26]和circ_0067934[27]的表達水平與腫瘤大小、TMN 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移等臨床特征呈正相關(guān)，而hsa_circRNA_047771[13]、circ‐ITCH[18]和hsa_circ_0137287[28]則與之相反。綜上分析，差異表達的circRNA 與PTC 的臨床病理特征具有相關(guān)性，circRNA 有可能是PTC 預后的影響因素或相關(guān)標志物。但在不同的研究中腫瘤大小分組的方法并不相同，且較為單一，如circ_0006156和circ_0067934 與腫瘤大小>1 cm 相關(guān)[22，27]，hsa_circ_0058124 和hsa_circ_0137287 與腫瘤大小>2 cm 相關(guān)[23，28]，circFOXM1[15]與腫瘤大小>3 cm 相關(guān)，而hsa_circ_0004458 與腫瘤大小≥3cm 相關(guān)[24]，這也可能是circRNA 與PTC 相關(guān)性研究中異質(zhì)性較大的原因之一。故此，在circRNA 表達水平與PTC 臨床病理特征關(guān)系的研究中，根據(jù)TMN 分期或者腫瘤的特征作進一步亞組分析可能更為合理。

3.2 circRNA 作為PTC 診斷的生物標志物

目前，甲狀腺乳頭狀癌的診斷涉及血清學、影像學和病理學等檢查，其中病理診斷是金標準，但仍有多達30% 的甲狀腺結(jié)節(jié)無法通過病理學檢查明確診斷[29]，因此探索敏感性及特異性更高的生物標志物具有重大意義。近年來的研究表明，circRNA 有望成為PTC 診斷的生物標志物。有研究通過接收者操作特征曲線（ROC 曲線）探索circRNA 作為 PTC 潛在生物標志物的診斷價值，發(fā)現(xiàn)circBACH2 的ROC 曲線下面積（AUC）為0.863（95%CI=0.777～0.949，P<0.001）[21]、circ_0006156 的AUC 為0.891（95%CI=0.820～0.961，P<0.001）[22]、hsa_circ_ IPCEF1 的AUC 為0.801（95%CI=0.711～0.891，P<0.001）[30]、hsa_circ_0002111的AUC 為0.833（95%CI=0.771～0.894，P<0.001）[31]。此外，Shi 等[32]研究發(fā)現(xiàn)在PTC 患者中兩種circRNA（circRAPGEF5 和hsa_circ_0058124）表達水平的組合與PTC 的發(fā)生獨立相關(guān)，表明它們可以作為該疾病的新診斷生物標志物。迄今為止，circRNA 作為PTC 診斷生物標志物的研究仍處于早期階段，在circRNA 被視為臨床應用的生物標志物之前，仍需更深入的研究。

3.3 circRNA 在預測PTC 預后中的作用

與其他非編碼RNA 一樣，circRNA 可能是PTC預后的潛在預測因子。Kaplan‐Meier 生存曲線分析顯示，circ_0006156 低表達PTC 患者的總生存期（Overall survival，OS）明顯長于circ_0006156 高表達患者（P<0.05）[22]。與circ_0006156 相似，circBACH2低表達的PTC 患者具有相對較長的OS（P<0.05）[21]。再者，PTC 患者中circZFR 的表達水平與不良預后呈正相關(guān)[26]，而circ_0067934 高表達的PTC 患者生存率較低[27]。此外，Cox 比例風險回歸模型分析表明，circ_0067934[27]是影響預后的獨立危險因素（RR=4.385,95%CI=1.087～17.544，P=0.038）。但由于生存分析有限，無法明確circRNA 對預后的預測作用。因此，在后續(xù)的研究中，有必要通過觀察circRNA 與PTC 復發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系以及進行長期隨訪研究來闡明circRNA 在預測PTC 預后中的作用。

4 展望

越來越多的研究表明，circRNA 在PTC 的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，但目前的研究存在一些局限性，如circRNA 命名方式不統(tǒng)一、PTC 的樣本量和組織學類型有限、臨床實踐應用相關(guān)研究屈指可數(shù)等。但隨著識別和篩選技術(shù)的發(fā)展、在線數(shù)據(jù)庫的改進及研究者的不懈探索，circRNA 仍有望被廣泛應用于PTC 的診斷、監(jiān)測和治療。