朱曉斌 綜述；朱敏，張俊萍 審閱[山西醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院（山西白求恩醫(yī)院 山西醫(yī)學(xué)科學(xué)院 同濟(jì)山西醫(yī)院）腫瘤中心，山西 太原030032]

近年來(lái)，針對(duì)CTLA-4、PD-1 和PD-L1 的6 種ICI已被美國(guó)FDA批準(zhǔn)。然而，ICI治療在實(shí)體瘤患者中的總體有效率通常僅20%～40%[1]，聯(lián)合使用免疫檢查點(diǎn)阻滯劑和激活劑可能會(huì)提高應(yīng)答率和反應(yīng)的持久性。TIGIT家族受體是一組免疫球蛋白超家族受體，與NECL家族配體相互作用，是潛在的癌癥免疫治療靶點(diǎn)[2]。家族成員包括TIGIT、CD226（也被稱(chēng)為DNAM-1）和CD112R（PVRIG）等[3]。這些受體和配體之間的復(fù)雜相互作用決定了TIL 的活性。本文對(duì)TIGIT、CD226 和CD112R 在癌癥免疫學(xué)中的功能及免疫治療研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 TIGIT

1.1 TIGIT的生物學(xué)特性

TIGIT是一種共抑制性免疫球蛋白受體，在效應(yīng)和記憶性CD4+T 和CD8+T 細(xì)胞、Treg 細(xì)胞、濾泡輔助T細(xì)胞和NK細(xì)胞表面表達(dá)。TIGIT由一個(gè)胞外免疫球蛋白可變區(qū)、一個(gè)Ⅰ型穿膜區(qū)和一個(gè)短胞內(nèi)區(qū)組成，其中含有一個(gè)ITIM 和一個(gè)免疫球蛋白酪氨酸尾（immunogl obulin tail tyrosine，ITT）樣基序[4]。TIGIT有CD155、CD112 和CD113 三種配體都屬于凝集素（nectin）和Necl 分子家族，該家族主要介導(dǎo)細(xì)胞黏附、細(xì)胞極化，還可作為皰疹和脊髓灰質(zhì)炎病毒的受體發(fā)揮作用（詳見(jiàn)表1）[2,5]。與CD226 相比，TIGIT 以高親和力結(jié)合CD155，以低親和力結(jié)合CD112[6]。這些配體主要表達(dá)于DC、T細(xì)胞、B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞表面，也表達(dá)于非造血組織，如腎臟、神經(jīng)系統(tǒng)和腸道[7]。

表1 與TIGIT家族受體相互作用的Nectin和Nectin樣分子

1.2 TIGIT的促癌作用

惡性腫瘤TIL 中的TIGIT 表達(dá)明顯升高。在小鼠模型中，多發(fā)性骨髓瘤（MM）的進(jìn)展與CD8+T細(xì)胞上TIGIT的高水平表達(dá)有關(guān)，TIGIT+CD8+T細(xì)胞在抗CD3/CD28/CD2 或骨髓瘤抗原刺激下表現(xiàn)為功能紊亂的表型，增殖減少、不能產(chǎn)生細(xì)胞因子。臨床研究中，許多惡性腫瘤，包括NSCLC、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（HNSCC）、結(jié)直腸癌（CRC）、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM）、胃癌、肝癌、MM、急性髓系白血?。ˋML）和濾泡性淋巴瘤（FL）的T 細(xì)胞的TIGIT 都高表達(dá)。表達(dá)TIGIT的CD8+TIL處于耗竭狀態(tài)，其特征是高表達(dá)抑制性免疫檢查點(diǎn)受體，如PD-1、LAG-3、T細(xì)胞免疫球蛋白和TIM-3，且增殖和產(chǎn)生細(xì)胞因子的能力受損[8-9]。據(jù)癌癥患者的免疫監(jiān)測(cè)中積累的數(shù)據(jù)分析[10-16]發(fā)現(xiàn)，TIGIT 在T 細(xì)胞和NK 細(xì)胞中的表達(dá)升高，通常與癌癥的進(jìn)展與轉(zhuǎn)移有關(guān)。最近有研究[17]用IHC 技術(shù)檢測(cè)TIGIT 在結(jié)腸癌患者中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)TIGIT 高表達(dá)患者的總體存活率顯著降低。因此，TIGIT有可能是一種新的腫瘤預(yù)后標(biāo)志物。

1.3 TIGIT的免疫抑制機(jī)制

1.3.1 細(xì)胞外機(jī)制

1.3.1.1 DC 細(xì)胞與TIGIT DC 作為APC，對(duì)T 細(xì)胞及NK細(xì)胞的激活至關(guān)重要。BLAKE等研究[18]發(fā)現(xiàn)，CD155 表達(dá)在DC 上，TIGIT 與CD155 相互作用后，表達(dá)CD155 的DC 可能成為耐受DC，其抗原提呈功能受到抑制、共刺激分子表達(dá)減少、免疫抑制因子IL-10 分泌增多、促炎細(xì)胞因子IL-12 的產(chǎn)生減少，從而抑制T細(xì)胞的激活、增殖與活化。

1.3.1.2 Treg細(xì)胞與TIGIT TIGIT在小鼠體內(nèi)的一部分天然Treg細(xì)胞和人類(lèi)的大多數(shù)Treg細(xì)胞中高度表達(dá)。TIGIT+Treg 細(xì)胞可上調(diào)許多Treg 細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)，包括FOXP3、IKZF2、nrp-1、CTLA-4、PD-1和LAG-3。TIGIT+Treg 細(xì)胞也能抑制前炎癥Th1 和Th17，但不能抑制Th2 型T 細(xì)胞反應(yīng)[19-20]。TIGIT 誘導(dǎo)Treg 細(xì)胞表達(dá)效應(yīng)分子纖維蛋白樣蛋白2（fibrinogen-like protein 2，F(xiàn)gl2）,效應(yīng)T細(xì)胞發(fā)生增殖抑制[21]。

1.3.1.3 NK 細(xì)胞與TIGIT 表達(dá)TIGIT 的NK 細(xì)胞會(huì)抑制小鼠和人NK細(xì)胞脫顆粒、細(xì)胞因子的產(chǎn)生以及表達(dá)CD155 的腫瘤細(xì)胞的NK 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用[22]。SARHAN 等[23]研究發(fā)現(xiàn)，CD155+MDSC 可以作用于TIGIT+NK細(xì)胞，降低ZAP70/Syk和ERK1/2的磷酸化，從而降低其殺細(xì)胞能力。

1.3.2 細(xì)胞內(nèi)機(jī)制 除了作為DC及NK細(xì)胞的調(diào)節(jié)因子外，TIGIT 可直接抑制T 細(xì)胞與NK 細(xì)胞。（1）CD226是一種共刺激受體，該受體直接參與T細(xì)胞和NK細(xì)胞對(duì)腫瘤的識(shí)別。當(dāng)TIGIT表達(dá)缺失或低表達(dá)時(shí)，CD226 與PVR 結(jié)合可誘導(dǎo)CD226 上酪氨酸322（Y322）磷酸化，從而激活T 細(xì)胞內(nèi)信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)。PVR 與TIGIT 的結(jié)合力大于CD226，當(dāng)TIGIT 與CD226 同時(shí)表達(dá)時(shí)，PVR 優(yōu)先與TIGIT 結(jié)合，TIGIT位于胞質(zhì)的尾部被磷酸化，導(dǎo)致CD226 發(fā)生去磷酸化來(lái)抑制T 細(xì)胞的抗腫瘤免疫反應(yīng)[24]。（2）除了阻止CD226信號(hào)外，TIGIT還可以通過(guò)其尾部直接傳遞抑制信號(hào)。當(dāng)TIGIT 與PVR 結(jié)合，ITT 基序被磷酸化，并與生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白2（growth factor receptorbound protein 2，Grb2）結(jié)合，隨后招募含SH2 的肌醇磷酸酶-1（SHIP-1），可抑制磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）和MAPK 信號(hào)通路，并下調(diào)NK 細(xì)胞的殺傷活性[25]。（3）β-arrestin 2 與磷酸化的TIGIT 結(jié)合可通過(guò)ITT 樣基序介導(dǎo)SHIP-1的募集，并損害腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6（TRAF6）的自動(dòng)泛素化，從而抑制NF-κB 的激活和IFN-γ的產(chǎn)生[26]。（4）小鼠T細(xì)胞的全基因組微陣列分析表明，TIGIT 參與通過(guò)下調(diào)TCR 的表達(dá)以及參與TCR和CD28信號(hào)傳遞的其他幾個(gè)分子來(lái)直接抑制T細(xì)胞的激活[27]。

1.4 靶向TIGIT免疫治療

由于TIGIT在限制抗腫瘤反應(yīng)中的核心作用，且與腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，阻斷TIGIT可能是治療腫瘤的一種潛在的治療方法。

1.4.1 臨床前研究 在結(jié)腸癌小鼠模型中，使用抗TIGIT的單克隆抗體治療后，發(fā)現(xiàn)腫瘤體積較小且小鼠總存活率明顯提高[28]。該研究還發(fā)現(xiàn)，表達(dá)CD107a、TNF、IFN-γ 和CD226 的腫瘤浸潤(rùn)性NK 細(xì)胞的頻率高于對(duì)照組，表明阻斷TIGIT后逆轉(zhuǎn)了腫瘤浸潤(rùn)性NK細(xì)胞的耗竭。研究人員還在敲除NK細(xì)胞的黑色素模型中使用抗TIGIT 單抗，發(fā)現(xiàn)即使在CD8+T細(xì)胞存在的情況下抗腫瘤免疫反應(yīng)也會(huì)消失，表明在沒(méi)有NK 細(xì)胞的情況下，僅阻斷TIGIT 對(duì)CD8+T 細(xì)胞的阻斷不足以建立有效的抗腫瘤免疫。該研究還發(fā)現(xiàn)，無(wú)論單用抗TIGIT 或者抗PD-1 單抗或者聯(lián)合治療，NK 細(xì)胞的缺失導(dǎo)致表達(dá)IFN-γ 或TNF的腫瘤浸潤(rùn)性CD8+T細(xì)胞的水平較低，表明NK細(xì)胞可能促進(jìn)CD8+T細(xì)胞的浸潤(rùn)，證明了NK細(xì)胞的重要性。

為了闡明抗TIGIT 抗體在抗腫瘤反應(yīng)中的作用機(jī)制，HAN 等[29]使用MC38 和CT26 腫瘤模型首先鑒定了不同抗體亞型及治療方案對(duì)抗腫瘤反應(yīng)的影響，實(shí)驗(yàn)證明mIgG2a 在用抗TIGIT 抗體誘導(dǎo)抗腫瘤反應(yīng)方面具有顯著的同型優(yōu)勢(shì)，且抗PD-1 和抗TIGIT：mIgG2a 的聯(lián)合治療比抗TIGIT：mIgG2a 單獨(dú)治療的療效更顯著。其次，該研究結(jié)果表明，mIgG2a同型抗體的特異性受體為FcγRIV，表達(dá)FcγRⅣ的髓樣細(xì)胞（CD11b+）不僅存在于脾中，也存在于腫瘤中。抗TIGIT的Fc部分與FcγR的結(jié)合在抗腫瘤免疫反應(yīng)中至關(guān)重要。最后，研究還發(fā)現(xiàn)，TIGIT在TME中的表達(dá)水平高于外周，而且TME 中含有許多表達(dá)Fcγ受體的髓樣細(xì)胞，IgGFc 與FcγR 結(jié)合可激活髓系細(xì)胞，導(dǎo)致抗原提呈功能增強(qiáng)以及趨化因子（如CXCL9、CXCL10 和MIP-1α 等）和細(xì)胞因子（如IL-23、IL-27、IL-12 和TNF-α 等）分泌增強(qiáng)。CHOW 等[30]證明了CXCL9、-10、-11/CXCR3 軸對(duì)于抗PD-1 治療療效的重要性，還發(fā)現(xiàn)當(dāng)抗體攜帶功能性Fc 時(shí)，CXCL9、-10、-11/CXCR3軸在抗TIGIT治療中比在抗PD-1治療更為重要。

HANSEN 等[31]用重組小鼠TIGIT 四聚體免疫TIGIT2/2 小鼠，制備了小鼠抗TIGIT 單克隆抗體1B4，該研究測(cè)試了TIGIT 阻斷抗體1b4 在MC38 結(jié)腸癌小鼠的療效，發(fā)現(xiàn)只有抗TIGIT 聯(lián)合抗PD-1 共阻滯組中的CD4+TIL 分泌IFN-γ 增加，CD8+TIL 產(chǎn)生IFN-γ、TNF-α 和IL-2 增加。PD-1 和TIGIT 的聯(lián)合阻斷顯著增強(qiáng)了腫瘤浸潤(rùn)T 細(xì)胞的功能。COM902 是一種完全人源性抗TIGIT 鉸鏈穩(wěn)定的IgG4 單克隆抗體，可以特異性地與人和小鼠TIGIT結(jié)合，并破壞TIGIT 與PVR 的結(jié)合，小鼠嵌合型COM902 與抗PVRIG 或抗PD-L1 抗體連聯(lián)合治療可顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)并提高兩種同基因小鼠腫瘤模型的存活率。放射治療在誘導(dǎo)免疫原性抗腫瘤反應(yīng)的同時(shí)，也存在一定的免疫抑制屏障，GRAPIN 等[32]首次將放射治療和抗TIGIT 結(jié)合起來(lái)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)聯(lián)合抗TIGIT和抗PD-L1（9/10只小鼠完全應(yīng)答）時(shí)，放療3×8 Gy的抗腫瘤效果非常明顯，可使CT26皮下腫瘤小鼠的治愈率達(dá)到90%。ZUO 等[33]構(gòu)建了編碼TIGIT單鏈抗體（TIGIT ScFv）的溶瘤病毒Vv-scFv-TIGIT，研究了其在幾種小鼠皮下腫瘤模型和一種腹水腫瘤模型中的抗腫瘤效果，結(jié)果表明，瘤內(nèi)注射VV-scFv-TIGIT 導(dǎo)致TME 發(fā)生從“冷”狀態(tài)到“熱”狀態(tài)的轉(zhuǎn)變。VV-scFv-TIGIT 與抗PD-1 聯(lián)合治療可以提高對(duì)腫瘤的治療療效。

1.4.2 臨床研究 目前，近10 株具有不同IgG 亞型或突變形式的人源性抗TIGIT單抗已進(jìn)入臨床試驗(yàn)。近來(lái)一些研究結(jié)果顯示了選擇合適的Fc片段結(jié)晶區(qū)作為治療性抗體的重要性。到目前為止，批準(zhǔn)的人類(lèi)治療性IgG 抗體屬于IgG1、IgG2 或IgG4 亞類(lèi)。研究[34]表明，抗體Fc 區(qū)與Fcγ 受體（FcγRs）結(jié)合可誘導(dǎo)多種免疫調(diào)節(jié)功能，包括ADCC作用、補(bǔ)體依賴(lài)性細(xì)胞毒作用和抗體依賴(lài)性細(xì)胞吞噬作用。但是，抗TIGIT 單抗的Fc 結(jié)構(gòu)域在臨床前模型中未能發(fā)揮任何抗腫瘤作用，可能是由于其對(duì)瘤內(nèi)表達(dá)TIGIT 的Treg細(xì)胞的耗竭活性喪失所致，這被認(rèn)為是抗TIGIT單抗介導(dǎo)抗腫瘤作用的一個(gè)潛在機(jī)制；但是，目前尚不清楚抗TIGIT 單抗的抗腫瘤效應(yīng)是否依賴(lài)于Treg細(xì)胞耗竭[35]。

Etigilimab（OMP-313M32）是OncoMed制藥公司研制的抗TIGIT單抗。Eitgilimab抑制了由人類(lèi)造血干細(xì)胞重組的小鼠模型中患者來(lái)源的黑色素瘤的生長(zhǎng)[5]。在Ⅰ期劑量遞增研究（NCT031119428）中，etigilimab 作為單一藥物或與nivolumab（抗PD-1 單抗）聯(lián)合治療各種晚期或轉(zhuǎn)移性實(shí)體惡性腫瘤，對(duì)其安全性和藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了測(cè)試，盡管Ⅰa期試驗(yàn)取得了成功，且在20 mg/kg以下的劑量下，eitgilimab耐受性良好，但由于各種原因該臨床試驗(yàn)停止。

Vibostolimab（MK-7684）是一種人源化IgG1 單克隆抗體，可與TIGIT結(jié)合并阻斷其與其配體CD112和CD155的相互作用。在晚期實(shí)體腫瘤患者的Ⅰ期研究（NCT02964013）中，評(píng)估了遞增劑量的vibostolimab 單一療法或cibostolimab 聯(lián)合PD-1 抑制劑pembrolizumab 的安全性和有效性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在cibostolimab 聯(lián) 合pembrolizumab 人 群 中，ORR 為26%，疾病控制率達(dá)到51%，顯示出良好的耐受性和抗腫瘤活性[36]。

Tiragolumab（MTIG7192A 和 RG6058）是Genentech/Roche 公司開(kāi)發(fā)的結(jié)合TIGIT 的全人抗體 。PD-L1/TIGIT 雙重阻斷（atezolizumab/tiragolumab）與單獨(dú)PD-L1 阻斷作為PD-L1 陽(yáng) 性NSCLC 患者的一線(xiàn)治療相比，提供了更好的臨床益處，改善了ORR 和無(wú)進(jìn)展存活率，盡管毒性特征相似。這項(xiàng)研究包括135 名NSCLC 患者，其中atezolizumab 聯(lián)合tiragolumab 的客觀緩解率（ORR）為37%，而atezolizumab和安慰劑的ORR為21%。在PD-L1+腫瘤（腫瘤比例評(píng)分>50%）中，atezolizumab聯(lián)合Tiragolumab 的ORR 為66%，而atezolizumab 和安慰劑的ORR 為24%。目前，tiragolumab 聯(lián)合atezolizumab 與安慰劑聯(lián)合atezolizumab 治療未經(jīng)治療的局部晚期、不能切除或轉(zhuǎn)移性PD-L1 選擇的NSCLC 患者的Ⅲ期，隨機(jī)，雙盲比較研究（NCT04294810）已招募500人，預(yù)計(jì)將在2022年8月結(jié)束試驗(yàn)。

由Arcus Bioscience公司開(kāi)發(fā)的AB154已經(jīng)開(kāi)始了Ⅰ期臨床試驗(yàn)（NCT03628677），評(píng)估AB154 作為單一療法或與AB122（抗PD-1）聯(lián)合治療晚期實(shí)體腫瘤的安全性、藥代動(dòng)力學(xué)、藥效學(xué)和初步療效。期待未來(lái)療效穩(wěn)定、風(fēng)險(xiǎn)較低的抗TIGIT的聯(lián)合方案投入使用。

2 CD226

2.1 CD226的生物學(xué)特性

CD226，又稱(chēng)為T(mén) 細(xì)胞特異性激活抗原1（TLisA1）或血小板和T 細(xì)胞抗原1（PTA-1），是免疫球蛋白超家族的成員。CD226 廣泛表達(dá)于免疫細(xì)胞，包括T細(xì)胞、NK細(xì)胞和單核細(xì)胞。CD226是一種穿膜型糖蛋白，由3個(gè)結(jié)構(gòu)域組成。胞外區(qū)包括2個(gè)免疫球蛋白V樣結(jié)構(gòu)域和8個(gè)N-連接的糖蛋白位點(diǎn)。CD226 分子包膜外的第一個(gè)結(jié)構(gòu)域是其識(shí)別配體、黏附、免疫突觸形成和細(xì)胞毒作用的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。胞內(nèi)區(qū)含有4個(gè)酪氨酸殘基和1個(gè)絲氨酸殘基。CD226的配體有CD155 和CD112，當(dāng)CD226 與其配體結(jié)合時(shí)，CD226分子定向移動(dòng)到細(xì)胞膜上的脂筏上，并招募細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子，如PTK和PKC，這些分子在四個(gè)殘基上磷酸化從而激活細(xì)胞(37)。

2.2 CD226的抑癌作用

CD226 的表達(dá)下調(diào)與患者的生存率降低及腫瘤的進(jìn)展相關(guān)[37-39]。JIN 等[40]研究發(fā)現(xiàn)，與CD226loCD 8+TIL 相比，CD226hiCD8+TIL 在荷4T1 或MC38 移植瘤的小鼠體內(nèi)表達(dá)更多的Ki-67和效應(yīng)細(xì)胞因子IFN和TNF，且顯示出更多的多功能性。研究[40]進(jìn)一步總結(jié)了腎癌、大腸癌或NSCLC 患者以及健康獻(xiàn)血者（共48 例）的CD226loCD8+T 細(xì)胞的特征：（1）CD226loCD8+TIL高表達(dá)TIGIT、PD-1、TIM-3和LAG-3；（2）CD226 表達(dá)下調(diào)與CD8+T 細(xì)胞的進(jìn)行性分化有關(guān)；（3）CD226loCD8+T細(xì)胞對(duì)抗原特異性刺激的反應(yīng)性較差；對(duì)胰腺導(dǎo)管腺癌（PDAC）患者的免疫監(jiān)測(cè)研究顯示，mFOLFIRINOX化療誘導(dǎo)外周血CD8+T細(xì)胞表面CD226 表達(dá)上調(diào)，與TIGIT 或PD-1 阻斷后抗原特異性CD8+T 細(xì)胞反應(yīng)呈正相關(guān)，提示高表達(dá)CD226hi的CD8+T 細(xì)胞可能改善抗TIGIT 或抗PD-1治療的反應(yīng)。

JIN 等[41]通過(guò)研究TIGIT 及其競(jìng)爭(zhēng)共刺激受體CD226在不同臨床狀態(tài)（包括初治、未緩解和完全緩解）的AML 患者中的表達(dá)，分析發(fā)現(xiàn)初治AML 患者γδT 細(xì)胞表面TIGIT 和CD226 分布不平衡，CD226+γδT細(xì)胞減少、TIGIT+γδT細(xì)胞增加，化療完全緩解的AML患者TIGIT-CD226+γδT細(xì)胞恢復(fù)正常。此外還發(fā)現(xiàn)，高表達(dá)TIGIT+CD226-AML 患者較非M3-AML患者的總生存率較低，因此，CD226有可能為一個(gè)新的預(yù)后免疫生物標(biāo)志物，但是需要更多大量臨床試驗(yàn)證明。

2.3 CD226的抑癌機(jī)制

CD226 促進(jìn)NK 細(xì)胞激活的信號(hào)通路已被廣泛研究。首先，CD226通過(guò)相應(yīng)的配體結(jié)合到脂筏上，并通過(guò)肌動(dòng)蛋白等結(jié)合到肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架上。在免疫突觸形成過(guò)程中，CD226傳遞激活信號(hào)，隨后誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原1（LFA-1）聚集。其次，LFA-1與ICAM-1 結(jié)合促進(jìn)CD226 的構(gòu)象變化，招募Fyn，使CD226 的Y319 殘基磷酸化。CD226 在Y319位的磷酸化可在激動(dòng)劑單抗與CD226 結(jié)合時(shí)激活NK細(xì)胞中的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）和AKT，從而發(fā)揮NK 細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。CD226WT 或CD226Y322A 在人CD8+T 細(xì)胞中的外源性表達(dá)表明，PVR誘導(dǎo)的CD226在Y322的磷酸化是下游信號(hào)激活所必需的，包括ERK、p38 和AKT 以及相應(yīng)的T細(xì)胞反應(yīng)。最后，CD226 下游的信號(hào)級(jí)聯(lián)導(dǎo)致淋巴細(xì)胞胞質(zhì)蛋白2（LCP2）和VaV 鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換因子1（Vav1）的磷酸化，從而實(shí)現(xiàn)NK 細(xì)胞的脫顆粒和鈣動(dòng)員[24]。

2.4 CD226的調(diào)控機(jī)制

Eomes 是一種關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，用于調(diào)節(jié)CD8+記憶性T細(xì)胞和Tex細(xì)胞的動(dòng)態(tài)平衡[42]。WEULERSSE等[43]利用小鼠和人的樣本進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)CD226的丟失是一種腫瘤免疫逃避策略，部分原因是Eomes轉(zhuǎn)錄因子驅(qū)動(dòng)所導(dǎo)致的CD226 表達(dá)下調(diào)。利用HD 患者外周血和初診MM患者骨髓CD226-和CD226+CD8+T細(xì)胞表達(dá)Eomes進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，Eomes過(guò)度表達(dá)的小鼠脾臟中CD226-CD8+T 細(xì)胞的百分比高于對(duì)照小鼠。來(lái)自CD8+T 細(xì)胞異位或內(nèi)源性Eomes 的染色質(zhì)免疫沉淀測(cè)序（ChIP-SEQ）數(shù)據(jù)顯示，在CD226 的一個(gè)可訪問(wèn)的內(nèi)含子區(qū)域有明確的Eomes結(jié)合位點(diǎn)，表明Eomes可能能夠直接與CD226基因的調(diào)控元件相互作用，導(dǎo)致CD226的下調(diào)，但是仍需要進(jìn)一步研究Eomes是否直接調(diào)節(jié)CD226。研究[44]發(fā)現(xiàn)，所有表達(dá)Eomes的T細(xì)胞都不會(huì)失去CD226的表達(dá)，這表明可能還有其他因素調(diào)節(jié)CD226的轉(zhuǎn)錄。

WEULERSSE 等[43]還發(fā)現(xiàn)，PVR 缺陷型腫瘤TIL上CD226 的表達(dá)高于WT 腫瘤。攜帶CD226Y319F突變的小鼠CD226hiCD8+TIL 的水平升高，與抗腫瘤反應(yīng)的增強(qiáng)相關(guān)。與PVR結(jié)合可誘導(dǎo)CD226表面表達(dá)降低，這依賴(lài)于CD226Y319磷酸化。E3泛素連接酶Casitas B系淋巴瘤原癌基因-b（Cbl-b）可能參與泛素化依賴(lài)的CD226 降解。然而，需要進(jìn)一步闡明Y319 或Y322 的CD226 磷酸化在調(diào)節(jié)T 細(xì)胞激活中的作用，因?yàn)檫@些結(jié)果與以前的研究結(jié)果(40)相沖突。

2.5 靶向CD226免疫治療

為驗(yàn)證CD226在T細(xì)胞中的內(nèi)在作用，有研究[45]對(duì)C57BL/6 小鼠進(jìn)行CD226 基因滅活后發(fā)現(xiàn)，抗PD-1 和抗GITR 聯(lián)合治療不再具有任何抗腫瘤作用或生存益處，這表明CD226 對(duì)于聯(lián)合治療的抗腫瘤作用必不可少?？笴D226 激動(dòng)劑單抗證明了CD226Y322磷酸化在CD8+T細(xì)胞反應(yīng)中的功能重要性，單抗可誘導(dǎo)CD226Y322 磷酸化。注射CD226 激動(dòng)型單抗可激活功能失調(diào)的CD226loCD8+Tem細(xì)胞對(duì)抗原刺激的反應(yīng)，從而增加對(duì)TIGIT 阻斷的反應(yīng)性[40]。WANG 等[45]認(rèn)為聯(lián)合應(yīng)用TIGIT 阻滯劑和激動(dòng)型抗CD226 可以增強(qiáng)抗原特異性CD8+T 細(xì)胞反應(yīng)，但是CD226 的激活與TIGIT 阻斷的療效之間的關(guān)聯(lián)需要在大量臨床試驗(yàn)中得到證實(shí)。研究[46]發(fā)現(xiàn)，抗PD-1免疫治療不能恢復(fù)CD226表達(dá)缺失的TIL的效應(yīng)功能，不僅證實(shí)CD226 提供的信號(hào)在抗PD-1 療效中的重要性，而且表明依賴(lài)于Eomes 或CD155 誘導(dǎo)的CD226丟失是主要的腫瘤免疫逃逸機(jī)制。該發(fā)現(xiàn)提供了新的免疫治療思路，即保留或提高CD226的表達(dá)可能是提高免疫治療療效的一種有用的策略。

3 CD112R

3.1 CD112R的生物學(xué)特性

CD112R，又稱(chēng)為PVRIG，是一種抑制性免疫檢查點(diǎn)受體，表達(dá)于CD4+T 細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞、NKT 細(xì)胞和NK 細(xì)胞。CD112R 是一種單一穿膜蛋白，由一個(gè)胞外IgV結(jié)構(gòu)域、一個(gè)穿膜結(jié)構(gòu)域和一個(gè)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域組成。CD112R胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域具有一個(gè)類(lèi)似ITIM 的基序，可能是酪氨酸磷酸酶的潛在對(duì)接位點(diǎn)。CD112R 與Nectin-2（CD112）的結(jié)合重新招募SHP1和SHP2，從而觸發(fā)T 細(xì)胞中TCR/CD28 信號(hào)的抑制[48]。CD112R 優(yōu)先表達(dá)于T 細(xì)胞，抑制T 細(xì)胞受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。有研究[47-48]進(jìn)一步證實(shí)CD112 是CD112R的高親和力配體，廣泛表達(dá)于抗原提呈細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞上。CD112R與CD226競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合CD112，破壞CD112R-CD112相互作用可增強(qiáng)T細(xì)胞應(yīng)答。

3.2 CD112R在免疫治療中的作用

臨床前研究：一項(xiàng)研究[49]表明，PVRIG 是一種抑制性T 細(xì)胞受體，以PVRL2 依賴(lài)的方式抑制CD8+T細(xì)胞的抗原特異性活性。該研究將PMEL-1 PVRIG-/-PMEL-1CD8+T 細(xì)胞經(jīng)多肽刺激后與組成性表達(dá)PVRL2 的B16-F10/MHGP-100 細(xì)胞共培養(yǎng)，檢測(cè)T 細(xì)胞功能。結(jié)果顯示，與野生型PMEL-1 CD8+T細(xì)胞比較，PMEL-1 TCR-PVRIG-/-小鼠的CD8+T細(xì)胞脫顆粒和產(chǎn)生效應(yīng)細(xì)胞因子（IFN-γ和TNF-α）的能力顯著增強(qiáng)。該研究還發(fā)現(xiàn)，PVRIG 的拮抗抗體與抗PD-L1抗體聯(lián)合使用可減少小鼠腫瘤生長(zhǎng)，提高總存活率?？傊?，MURTER 等[49]使用臨床前腫瘤模型提供了體內(nèi)概念證據(jù)，即靶向PVRIG 結(jié)合額外的免疫檢查點(diǎn)（如PD-1）是治療癌癥的一種潛在療法。

臨床研究：CD112R 在卵巢癌、腎癌、肺癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、胃癌、頭頸部癌、膀胱癌、結(jié)直腸癌和前列腺癌患者的腫瘤浸潤(rùn)性CD8+T、CD4+T 和NK細(xì)胞上均有表達(dá)[3]。值得注意的是，肺癌患者的CD4+和CD8+TIL 上CD112R 的表達(dá)均高于來(lái)自鄰近正常組織的T 細(xì)胞。用拮抗型單抗抑制CD112R 與CD112的結(jié)合可增加肺癌、卵巢、子宮內(nèi)膜、頭頸部或腎癌患者TIL 分泌IFN-γ 或IL-2 等細(xì)胞因子[3]。研究[22]發(fā)現(xiàn)，CD112R 阻斷劑與TIGIT 阻斷劑在體外協(xié)同使用可以增強(qiáng)人NK 細(xì)胞觸發(fā)的抗體依賴(lài)的細(xì)胞對(duì)乳腺癌細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用。Ⅰa/Ⅰb期臨床試驗(yàn)（NCT03667716）評(píng) 估CD112R 抑制劑COM701（compugen）單獨(dú)或與nivolumab 聯(lián)合治療NSCLC、卵巢癌及乳腺癌的安全性、耐受性、藥代動(dòng)力學(xué)與臨床療效。

4 小 結(jié)

綜上所述，免疫球蛋白超家族中的TIGIT、CD112R及CD226通過(guò)與不同配體結(jié)合發(fā)揮重要的作用。目前的研究熱點(diǎn)集中在對(duì)免疫系統(tǒng)的作用，以及如何重新激活免疫系統(tǒng)發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)。TIGIT及CD112R與配體結(jié)合后，通過(guò)不同作用抑制T細(xì)胞或NK細(xì)胞的活性發(fā)揮促腫瘤作用。而CD226與其配體結(jié)合后通過(guò)復(fù)雜信號(hào)通路發(fā)揮抗腫瘤免疫反應(yīng)，但TME中存在復(fù)雜因素抑制CD226的表達(dá)，因此，進(jìn)一步靶向抑制性受體（TIGIT 及CD112R），同時(shí)維持該家族中的激活受體CD226，是目前最新的研究熱點(diǎn)。多項(xiàng)臨床試驗(yàn)正在評(píng)估各種抗TIGIT單抗單用或聯(lián)合不同ICI治療不同類(lèi)型癌癥患者的療效，期待能夠取得良好的臨床成果。CD226的抑制腫瘤效應(yīng)已被認(rèn)可，需要研發(fā)新的策略來(lái)阻止CD226下調(diào)或通過(guò)TIL增強(qiáng)其表達(dá)。關(guān)于CD112R聯(lián)合PD-1或TIGIT阻斷是否能在體外增強(qiáng)人類(lèi)T細(xì)胞的增殖和功能，發(fā)揮抗腫瘤免疫反應(yīng)，臨床研究結(jié)果值得期待。TIGIT家族受體是一組免疫球蛋白超家族受體，在腫瘤免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要的作用。隨著人們對(duì)TIGIT家族受體的逐步認(rèn)識(shí)及相關(guān)藥物抗體的研發(fā)，針對(duì)其的免疫治療也將會(huì)取得長(zhǎng)足的進(jìn)步。