呂建雨 ， 張?jiān)婪?， 彭海馨 ， 王匯鑫 ， 李艷華

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院 ， 黑龍江 哈爾濱 150030)

根據(jù)中醫(yī)理論，黃芪性微溫、味甘，有利水消腫、退腫生肌的功效，《名醫(yī)別錄》、《本草綱目》等中醫(yī)學(xué)著作均認(rèn)為其有補(bǔ)中益氣的作用，藥用歷史悠久。黃芪在臨床上對于治療腹瀉有著很好的療效[1]，在生產(chǎn)養(yǎng)殖中，常常被加入到斷奶豬日糧中使豬腹瀉率顯著降低[2]。生姜性溫，是重要的藥食同源藥材，有祛風(fēng)發(fā)汗、溫中散寒的功效。黃芪搭配生姜對脾胃虛寒型腹瀉有一定治療作用。

腹瀉作為豬群的一種常見癥狀，是指排便次數(shù)增多，明顯超過平時(shí)頻率，糞質(zhì)稀薄，水分增加，伴有腹痛、排便急迫感、里重后急、失禁等癥狀。各個(gè)年齡段的豬均能患病，仔豬的發(fā)病率與死亡率最高，嚴(yán)重影響我國養(yǎng)豬業(yè)的快速發(fā)展，給我國養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大損失。腹瀉屬中醫(yī)“泄瀉”范疇，脾虛是其發(fā)病的主要病機(jī)之一。傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為，腹瀉主要由于濕盛與脾胃功能失調(diào)所致。脾主運(yùn)化、升清，胃主受納、腐熟水谷。脾虛則升清運(yùn)化失職，胃弱則受納腐熟力衰，久及于腎，腎陽不足，則固攝失權(quán)，終導(dǎo)致腸道不固，清濁不分，而病泄瀉[3]。治療上以益氣、健脾為主，有其他兼證則辨證用藥[4]。黃芪有健脾益氣的功效，生姜不僅可以健脾，還可抗菌、驅(qū)寒，兩者配伍使用可補(bǔ)氣健脾，溫中散寒。由于傳統(tǒng)中藥復(fù)方具有多途徑、多成分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，通過現(xiàn)代醫(yī)學(xué)很難闡明芪姜粉治療脾胃虛寒型腹瀉的作用機(jī)制。在系統(tǒng)生物學(xué)、多向藥理學(xué)、計(jì)算生物學(xué)等多學(xué)科技術(shù)快速發(fā)展的基礎(chǔ)上，從整體、系統(tǒng)角度研究藥物機(jī)制的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是近10年提出的藥物研發(fā)新方法，與中藥復(fù)方基本特點(diǎn)相吻合[5]。本試驗(yàn)基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的理論，運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法通過構(gòu)建核心成分—靶點(diǎn)—通路網(wǎng)絡(luò)，從整體、系統(tǒng)的角度上分析芪姜粉治療豬脾胃虛寒型腹瀉的效果和作用機(jī)制，為下一步的深入探究提供參考。

1 材料與方法

1.1 芪姜粉活性成分的篩選 利用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP,http://ibts.hkbu.edu.hk/LSP/tcmsp.php)檢索黃芪和生姜的有效成分，各單味藥的活性成分口服利用度(OB)和類藥性(DL)篩選閾值分別設(shè)置為OB≥30，DL≥0.18[6]。并收集對應(yīng)靶點(diǎn)，將篩選出來的芪姜粉的活性成分信息在Uniprot數(shù)據(jù)庫(https://www.uniprot.org)進(jìn)行校正，檢索條件設(shè)置為“Organism:Susscrofa”，獲取活性成分和其對應(yīng)的靶點(diǎn)。

1.2 芪姜粉—活性成分—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建 整理從Uniprot數(shù)據(jù)庫獲取的活性成分和靶點(diǎn)，利用Cytoscape 3.7.2軟件構(gòu)建芪姜粉—活性成分—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖，分析活性成分和靶點(diǎn)之間的度(Degree)值。

1.3 芪姜粉—腹瀉韋恩圖的構(gòu)建 以腹瀉(Diarrhea)為關(guān)鍵詞在GeneCards數(shù)據(jù)庫與OMIM數(shù)據(jù)庫中檢索與腹瀉相關(guān)的基因，通過Uniprot數(shù)據(jù)庫進(jìn)行校正，物種選擇為豬(Susscrofa)，利用Venny 2.1.0在線作圖工具(https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html)獲得芪姜粉—腹瀉共有靶點(diǎn)的韋恩圖。

1.4 芪姜粉—成分—腹瀉—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建 整理交集靶點(diǎn)和對應(yīng)的活性化合物，利用Cytoscape 3.7.2軟件構(gòu)建芪姜粉—活性成分—腹瀉—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖。

1.5 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建 將交集靶點(diǎn)上傳至String數(shù)據(jù)庫(https://string-db.org)，物種選擇為豬(Susscrofa)，置信度高于0.7，并隱藏游離節(jié)點(diǎn)，導(dǎo)出蛋白相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)圖及互作關(guān)系表。利用Cytoscape 3.7.2對互作關(guān)系表中蛋白連接關(guān)系進(jìn)行分析，根據(jù)Degree值篩選核心基因并通過Excel繪制柱狀圖進(jìn)行可視化。

1.6 基因本體(GO)功能富集注釋分析和京都基因與基因組百科全書(KEGG)通路富集分析 將交集基因上傳至DAVID數(shù)據(jù)庫(https://david.ncifcrf.gov)數(shù)據(jù)庫，設(shè)置物種(Species)為“Susscrofa(豬)”、背景(Background)為“Susscrofa”、標(biāo)識符(Identifier)為“Official gene symbol (官方名稱)”，進(jìn)行 GO功能注釋和KEGG富集分析。篩選P<0.05的富集條目，并根據(jù)P值降序排序，選擇排名前20位的條目通過在線作圖平臺——微生信(http://www.bioinformatics.com.cn/)進(jìn)行富集分析結(jié)果的可視化。

2 結(jié)果

2.1 芪姜粉—活性成分—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建 在TCMSP分別輸入芪姜粉中的2種藥物：黃芪和生姜，一共可以得到352個(gè)活性成分。分別設(shè)置OB≥30，DL≥0.18，得到25個(gè)活性成分(黃芪20個(gè)，生姜5個(gè))，剔除沒有相關(guān)靶點(diǎn)的活性成分并通過Uniprot數(shù)據(jù)庫校正，可篩選出20個(gè)活性成分(黃芪16個(gè)，生姜4個(gè))，并對篩選出來的活性成分進(jìn)行編號。各活性成分詳細(xì)信息見表1。利用這20個(gè)活性成分和對應(yīng)靶點(diǎn)的關(guān)系，通過Cytoscape 3.7.2軟件構(gòu)建“芪姜粉—活性成分—靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖，結(jié)果見圖1。

表1 芪姜粉潛在活性成分Table 1 Potential active components of Qijiang powder

藥物—活性成分—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖分析：圖1中共包含181個(gè)節(jié)點(diǎn)和399條邊，其中包括20個(gè)活性成分節(jié)點(diǎn)、159個(gè)靶基因節(jié)點(diǎn)和2個(gè)中藥節(jié)點(diǎn)。利用“cytoHubba”插件對網(wǎng)絡(luò)圖進(jìn)行拓?fù)浞治?，并根?jù)“Degree(度)”值進(jìn)行排序，Degree值越高代表活性成分或靶點(diǎn)在互作網(wǎng)絡(luò)越重要，拓?fù)浞治鼋Y(jié)果表明，排名前10位的活性成分分別為槲皮素(Quercetin)、山奈酚(Kaempferol)、7-O-甲基異丙醇胺(7-O-methylisomucronulatol)、β-谷甾醇(β-sitosterol)、刺芒柄花素(Formononetin)、豆甾醇(Stigmasterol)、異鼠李素(Isorhamnetin)、3,9-二-O-甲基尼森香豌豆紫檀酚(3,9-di-O-methylnissolin)、美迪紫檀素[(6aR,11aR)-9,10-dimethoxy-6a,11a-dihydro-6H-benzofurano[3,2-c]chromen-3-ol]、毛蕊異黃酮(Calycosin)，各活性成分詳細(xì)信息見表2。

表2 芪姜粉—活性成分—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)中排名前10位的活性化合物信息Table 2 Information on the top 10 active components in the Qijiang powder—active components—target network

圖1 芪姜粉—活性成分—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)Fig.1 Drug—active components—target network of Qijiang powder藍(lán)色菱形：靶基因； 紫色和黃色圓形：分別為黃芪、生姜的活性成分； 紅色正六邊形：黃芪； 綠色正六邊形：生姜；節(jié)點(diǎn)大小與Degree值成正比Blue diamonds: Target genes; Purple and yellow circles: Active components of Astragalus membranaceus and ginger respectively; Red regular hexagon: Astragalus membranaceus; Green hexagonal:Ginger. The node size was proportional to the degree value

排名前10位的靶點(diǎn)分別為前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2(PTGS2)、核受體共激活因子2(NCOA2)、前列腺素內(nèi)過氧化物合酶1(PTGS1)、鈣調(diào)蛋白1(CALM1)、視網(wǎng)膜酸受體(RXRA)、過氧化物酶體增生激活受體γ(PPARG)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(NOS2)、γ-氨基丁酸A受體α1(GABRA1)、Beta-2腎上腺素受體(ADRB2)和黃體酮受體(PGR)，具體結(jié)果見表3。

表3 芪姜粉—活性成分—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)中排名前10位的靶點(diǎn)信息Table 3 Information on the top 10 targets in the Qijiang powder—active components—target network

2.2 芪姜粉化合物與疾病靶點(diǎn)交集Venn圖的構(gòu)建 從GeneCards數(shù)據(jù)庫與OMIM數(shù)據(jù)庫中共檢索到5 403個(gè)腹瀉相關(guān)靶點(diǎn)，將疾病靶點(diǎn)和藥物成分靶點(diǎn)取交集，最終得到130個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)。通過Venny 2.1.0在線作圖工具繪制出芪姜粉—腹瀉共有靶點(diǎn)的韋恩圖，結(jié)果見圖2。

圖2 芪姜粉—腹瀉共有靶點(diǎn)的韋恩圖Fig.2 Venn diagram of mutual target of Qijiang powder—diarrhea

2.3 芪姜粉—活性成分—腹瀉—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建 利用Cytoscape 3.7.2軟件構(gòu)建芪姜粉—活性成分—腹瀉—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖，結(jié)果如圖3所示。在網(wǎng)絡(luò)圖中包括153個(gè)節(jié)點(diǎn)和470條邊，其中腹瀉節(jié)點(diǎn)1個(gè)、藥物節(jié)點(diǎn)2個(gè)、活性成分節(jié)點(diǎn)20個(gè)以及靶蛋白節(jié)點(diǎn)130個(gè)。由圖3可知，藥物、活性成分、腹瀉與關(guān)鍵靶點(diǎn)之間的關(guān)系錯(cuò)綜復(fù)雜，1種有效成分可以作用于多個(gè)靶點(diǎn)，1個(gè)靶點(diǎn)也與多個(gè)有效成分相互作用，符合中藥復(fù)方多途徑、多成分、多靶點(diǎn)共同作用的基本特點(diǎn)，但是單以“Degree”值的大小去判斷活性成分或靶點(diǎn)在治療腹瀉的生物進(jìn)程中是否重要過于片面，需要繼續(xù)深入探究。

圖3 芪姜粉活性成分—腹瀉—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖Fig.3 Active components—diarrhea—target network map of Qijiang powder藍(lán)綠色圓形節(jié)點(diǎn):豬腹瀉相關(guān)靶點(diǎn)； 紫色菱形節(jié)點(diǎn):化合物與豬腹瀉共同靶點(diǎn)； 棕色和綠色正八邊形節(jié)點(diǎn):分別為黃芪、生姜的活性成分；節(jié)點(diǎn)大小與Degree值成正比Blue-green circular nodes:Porcine diarrhea related targets; Purple diamond node:Common target of compound and porcine diarrhea; Brown and green octagonal nodes:Active components of Astragalus membranaceus and ginger respectively. The node size was proportional to the degree value

2.4 芪姜粉在豬體內(nèi)蛋白相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建 利用String數(shù)據(jù)庫構(gòu)建蛋白相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)圖，物種選擇為“Susscrofa”，打分值設(shè)置高于0.7最高置信度，PPI網(wǎng)絡(luò)圖見圖4。將得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行整理排序，并將圖中關(guān)鍵靶點(diǎn)度可視化，如圖5。其中TNF、TP53、IL-8、IL-6等靶點(diǎn)排名靠前，推測可能在芪姜粉治療豬腹瀉的生物進(jìn)程中發(fā)揮較重要的作用。

圖4 芪姜粉—豬腹瀉靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖Fig.4 PPI network diagram of Qijiang powder—porcine diarrheal targets

圖5 芪姜粉抗腹瀉核心靶點(diǎn)柱狀圖Fig.5 Anti-diarrhea targets centered networks of Qijiang powder

2.5 芪姜粉治療豬腹瀉GO功能富集注釋分析及KEGG通路富集分析 將芪姜粉—豬腹瀉PPI網(wǎng)絡(luò)圖中的靶點(diǎn)基因上傳于DAVID數(shù)據(jù)庫，物種選擇為“Susscrofa”，將得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行篩選后(P<0.05)，共得到GO注釋分析條目272個(gè)，其中生物過程(Biological process)條目198個(gè)、分子功能(Molecular function)條目23個(gè)、細(xì)胞組成(Cellular component)條目51個(gè)，將所得GO注釋分析條目根據(jù)P值進(jìn)行降序排序，分別取各組前10位繪制柱狀圖。由圖6可知，生物過程主要涉及RNA聚合酶II啟動子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控(Positive regulation of transcription from RNA polymerase II promoter)、脂多糖介導(dǎo)的信號通路(Lipopolysaccharide-mediated signaling pathway)和腺酸酯環(huán)酶激活腎上腺素受體信號通路(Adenylate cyclase-activating adrenergic receptor signaling pathway)過程比較靠前；分子功能主要涉及細(xì)胞外間隙(Extracellular space)、細(xì)胞核(Nuclear)、細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix)等；細(xì)胞組成主要涉及序列特異性DNA綁定轉(zhuǎn)錄因子(Transcription factor activity,sequence-specific DNA binding)、相同的蛋白質(zhì)結(jié)合(Identical protein binding)、細(xì)胞因子活性(Cytokine activity)等。

圖6 芪姜粉—豬腹瀉GO富集分析Fig.6 GO enrichment analysis of Qijiang powder—porcine diarrhea

對KEGG通路進(jìn)行篩選(P<0.05)，可得到119條通路，按降序排列，將前20條通路可視化為氣泡圖，結(jié)果見圖7。圖中氣泡的大小代表該通路富集到的靶點(diǎn)數(shù)量，氣泡顏色的深淺代表蛋白富集程度的高低。由圖7可知，主要富集條目包括癌癥中通路(Pathways in cancer)、乙型肝炎(Hepatitis B)、美洲錐蟲病[Chagas disease(American trypanosomiasis)]等。

圖7 芪姜粉—豬腹瀉KEGG通路富集分析Fig.7 KEGG pathology enrichment analysis of Qijiang powder—porcine diarrhea

3 討論

傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為，腹瀉隸屬于“泄瀉”范疇，疾病日久不愈，加之失治誤治，患者常表現(xiàn)為脾胃虛寒證[7]。脾胃虛寒型是一種中醫(yī)證型，主要是指脾胃陽氣虛衰，陰寒內(nèi)盛所表現(xiàn)的證候，常有納呆腹脹、脘腹痛、四肢不溫、大便稀溏、小便清長或不利等癥狀表現(xiàn)[8]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論認(rèn)為，腹瀉的發(fā)病機(jī)制常常涉及炎癥、水和電解質(zhì)失衡、胃腸激素分泌、腸黏膜損傷等因素[9]。此外，多種腫瘤也可誘發(fā)腹瀉，腹瀉是腫瘤的一種常見臨床癥狀，腫瘤相關(guān)性腹瀉多為伴隨癥狀，但也有以腹瀉為首發(fā)或突出表現(xiàn)[10]。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分，其整體性、系統(tǒng)性和注重藥物間相互作用的特點(diǎn)與中醫(yī)藥學(xué)的基本特點(diǎn)相吻合。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)提供了一種新型的研究方法，通過大數(shù)據(jù)的分析，將傳統(tǒng)中藥研究和現(xiàn)代藥理學(xué)聯(lián)系在一起，多方面、深層次、系統(tǒng)性的挖掘藥物與機(jī)體之間的關(guān)系，得到越來越多學(xué)者的認(rèn)可，顯著加快中藥現(xiàn)代化、國際化的進(jìn)程[11]。本試驗(yàn)主要通過對芪姜粉—活性成分—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)、芪姜粉—活性成分—腹瀉—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖中拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)的計(jì)算和蛋白相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)圖等進(jìn)一步揭示關(guān)鍵作用靶點(diǎn)、藥效物質(zhì)基礎(chǔ)通路、活性成分和通路。

通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析預(yù)測芪姜粉中發(fā)揮抗腹瀉作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)可能是槲皮素、山奈酚、7-O-甲基異丙醇胺、β-谷甾醇等。槲皮素可以通過抑制小鼠小腸推進(jìn)，減慢小腸蠕動作用，來對腹瀉產(chǎn)生抑制作用[12]。山奈酚作為一種常見的黃酮類化合物，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤的作用[13]。廖美華等[14]發(fā)現(xiàn)，山奈酚是參苓白術(shù)散治療腹瀉型腸易激綜合征(IBS-D)的最核心化合物之一，在干預(yù)IBS-D過程中起到重要的調(diào)控作用。根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)，未檢索到7-O-甲基異丙醇胺的有關(guān)報(bào)道，其藥理作用有待進(jìn)一步研究。β-谷甾醇具有抗腫瘤[15]、抗炎[16]和降低胃黏膜損傷[17]的作用。研究表明，β-谷甾醇對于枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌等胃腸道常見菌群均有較好的抑制作用[18]。馮思敏等[19]發(fā)現(xiàn)，β-谷甾醇通過抑制IL-6和COX-2的表達(dá)來改善葡聚糖酸鈉誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎，抑制腹瀉、體重下降、便血、結(jié)腸縮短、結(jié)腸組織形態(tài)破壞等典型的急性腸炎病癥。綜上可知，槲皮素、山奈酚、β-谷甾醇可能通過抑制炎癥發(fā)生、調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡來治療腹瀉。研究發(fā)現(xiàn)，3種活性成分均有保護(hù)、修復(fù)損傷細(xì)胞的功能[20-22]，對治療腹瀉也有一定的幫助。

通過對活性成分—靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖進(jìn)行分析，其中可能發(fā)揮關(guān)鍵作用的靶點(diǎn)有前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2(PTGS2)、核受體共激活因子2(NCOA2)、前列腺素內(nèi)過氧化物合酶1(PTGS1)、鈣調(diào)蛋白1(CALM1)等。PTGS1和PTGS2是PTGS的2種同工酶，其中PTGS1為結(jié)構(gòu)型，主要參與調(diào)節(jié)正常組織細(xì)胞的多種生理活動[23]；PTGS2為誘導(dǎo)型，通常介導(dǎo)炎癥反應(yīng)[24]以及調(diào)控腫瘤的生成和發(fā)育[25-28]。臨床試驗(yàn)表明，PTGS2可以通過調(diào)節(jié)凋亡抑制基因(Bcl-2)的表達(dá)[25]，對腫瘤產(chǎn)生抑制作用，PTGS2抑制劑也將成為抗腫瘤治療的新方法。NCOA2在生物體內(nèi)涉及發(fā)育、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)和腫瘤發(fā)生等反應(yīng)[27]，NCOA2是乳腺癌治療的潛在靶點(diǎn)，使MAPK/ERK信號級聯(lián)的管制下降，調(diào)控NCOA2的下游目標(biāo)RASEF，顯著抑制不同乳腺癌細(xì)胞系的細(xì)胞增殖。CALM是細(xì)胞內(nèi)Ca2+的主要受體，參與細(xì)胞生長和代謝，在細(xì)胞分裂增殖和腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移中起重要作用[28]。CALM1與骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生也有一定的聯(lián)系[29]。綜合上述可知，這些靶點(diǎn)的功能多集中于炎癥及細(xì)胞凋亡方面，正好切入腹瀉的發(fā)病機(jī)制，其相關(guān)聯(lián)的蛋白以及信號通路調(diào)節(jié)則需要進(jìn)一步分析。

通過對蛋白相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)圖進(jìn)行分析，共篩選出核心靶點(diǎn)20個(gè)，其中腫瘤壞死因子(TNF)、細(xì)胞腫瘤抗原基因(TP53)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)相關(guān)性較高，推測可能在治療豬腹瀉中發(fā)揮較重要的作用。TNF是一種常見的促炎因子，可誘發(fā)炎癥因子的釋放，加重機(jī)體的炎癥反應(yīng)[30]，并且對腫瘤具有直接殺傷或抑制增殖的作用[31]。TP53 是一種廣譜腫瘤抑制基因，其產(chǎn)物為多功能的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，可以發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、細(xì)胞凋亡和 DNA 修復(fù)的作用[32]。IL-6是由單核-巨噬細(xì)胞等分泌的促炎性細(xì)胞因子，對調(diào)節(jié)組織損傷、免疫反應(yīng)和腫瘤生長、轉(zhuǎn)移方面有重要意義[33]。IL-6可以通過損壞腸黏膜屏障功能，使炎性滲出增加，從而引起腹瀉[34]。臨床試驗(yàn)表明，通過降低炎癥因子TNF-α和IL-6 的水平，可以減輕大腸埃希菌感染的哺乳期小型豬的腹瀉程度[35]。IL-8是一種強(qiáng)而有力的中性粒細(xì)胞趨化因子和活化因子，在炎癥反應(yīng)中起更直接的介導(dǎo)作用。張珺等[36]認(rèn)為，血清中IL-8、TNF-α水平可作為反映潰瘍性結(jié)腸炎病變程度和判斷預(yù)后的一個(gè)客觀指標(biāo)。有研究表明，IL-8可通過腫瘤及腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的受體，直接或間接促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增生、新生血管的形成，從而促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移[37]。由此推測，芪姜粉治療腹瀉可能是通過TNF、TP53、IL-6和IL-8等關(guān)鍵靶點(diǎn)抑制機(jī)體的炎癥反應(yīng)及調(diào)控細(xì)胞凋亡來發(fā)揮作用。

由KEGG信號通路的富集分析氣泡圖可知，涉及與癌癥相關(guān)的通路較多，因此推測槲皮素、山奈酚、β-谷甾醇等活性成分與癌癥的發(fā)生有很大關(guān)系，與藥物活性成分聯(lián)系較密切的關(guān)鍵靶點(diǎn)，例如PTGS2、NCOA2、PTGS1、CALM1等，均涉及生物體內(nèi)癌癥的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞凋亡的調(diào)控。由此推測，芪姜粉可能通過PTGS2、NCOA2、PTGS1、CALM1等靶點(diǎn)發(fā)揮抗癌作用。

綜上所述，芪姜粉以槲皮素、山奈酚、7-O-甲基異丙醇胺、β-谷甾醇等藥效物質(zhì)基礎(chǔ)調(diào)控PTGS2、NCOA2、PTGS1、CALM1等癌癥通路的多個(gè)靶點(diǎn)，通過抗炎、調(diào)控細(xì)胞凋亡和保護(hù)損傷細(xì)胞的機(jī)制，發(fā)揮抗腹瀉的作用，體現(xiàn)了中藥多成分、多靶點(diǎn)和整體發(fā)揮作用的特點(diǎn)，為進(jìn)一步深入揭示芪姜粉治療腹瀉的藥理機(jī)制提供了科學(xué)依據(jù)。但是預(yù)測結(jié)果可能與實(shí)際存在偏差，需要進(jìn)行體外試驗(yàn)深入探究，闡明其具體作用機(jī)制。