劉欣彤 ， 陳孝杰 ， 王玉鳳 ， 鄧 翠 ， 于志亞 ， 張向陽(yáng) ， 張志博 ，劉義明 ， 徐 飛 ， 李 存 ， 李秀波

(1.天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院 ， 天津 西青 300384 ； 2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所 ，國(guó)家飼料中藥物基準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室 ， 北京 海淀 100081 ； 3. 新鄉(xiāng)學(xué)院生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院 ， 河南 新鄉(xiāng) 453000 ；4. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 ， 黑龍江 哈爾濱 150030)

奶牛乳房炎(Bovine mastitis)是由多種病原微生物侵入泌乳奶牛乳腺組織所引發(fā)的一種持續(xù)性炎癥反應(yīng)，是泌乳奶牛最常見的疾病，也是造成奶牛畜牧養(yǎng)殖業(yè)和奶牛乳品生產(chǎn)業(yè)損失最嚴(yán)重的疾病[1]。該病流行于世界各地，發(fā)病率高且防治困難。引起奶牛乳房炎的微生物種類有很多，如細(xì)菌、真菌、病毒、支原體等，以細(xì)菌感染較常見，主要包含大腸埃希菌、葡萄球菌、鏈球菌和沙門菌等[2]。當(dāng)奶?；加腥榉垦讜r(shí)，其產(chǎn)奶量及乳制品質(zhì)量均會(huì)顯著降低，不僅影響奶牛的健康，還會(huì)降低養(yǎng)殖效益并增加奶牛治療成本，甚至?xí)捎诳股貫E用催生多重耐藥超級(jí)細(xì)菌[3]。

大腸桿菌(Escherichiacoli，E.coli)又稱大腸埃希菌，廣泛存在于環(huán)境中，雖然大部分大腸桿菌為動(dòng)物腸道的正常寄生菌之一，但也有一小部分為重要的條件性致病菌，是奶牛乳房炎的細(xì)菌檢測(cè)中重要的環(huán)境病原菌[4-5]。20世紀(jì)中期，有學(xué)者認(rèn)識(shí)到一些特殊血清型的大腸桿菌對(duì)嬰兒和幼畜(禽)有致病性，常引起嚴(yán)重腹瀉、腎炎、敗血癥等，導(dǎo)致畜禽生長(zhǎng)發(fā)育緩慢，生產(chǎn)能力下降，甚至死亡，給畜牧養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[6-7]。

本研究對(duì)全國(guó)重點(diǎn)區(qū)域規(guī)模化奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)健康奶樣和臨床乳房炎奶樣進(jìn)行細(xì)菌學(xué)分離，并對(duì)牛奶源大腸桿菌分離株進(jìn)行體外藥物敏感性試驗(yàn)，以了解牛奶源大腸桿菌的分離率和藥物敏感性，提高藥物治療效率，避免同種藥物多次使用造成的耐藥性，為獸醫(yī)臨床合理有效地使用抗菌藥物提供臨床參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株 大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922，購(gòu)自廣東省微生物所(廣東環(huán)凱微生物科技有限公司)。

1.1.2 主要試劑與培養(yǎng)基 乙二胺四乙酸(EDTA)、二甲基甲酰胺(DMF)、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、硼酸、冰醋酸、無(wú)水乙醇、丙三醇，均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；氫氧化鈉，購(gòu)自北京化工廠；Tris Base，購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；腦心浸液肉湯(BHI broth)、MH肉湯(MH broth)、LB肉湯(LB broth)、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基(EMB)、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基(Macconkey agar)、水解酪蛋白瓊脂(MH agar)、LB瓊脂(Luria-Bertani agar)，均購(gòu)自青島海博生物技術(shù)有限公司。

1.1.3 抗菌藥物 氨芐西林(Ampicillin，AMP)、頭孢他啶(Ceftazidime，CAZ)、頭孢曲松(Ceftriaxone，CRO)、頭孢噻肟(Cefotaxime，CTX)、頭孢西丁(Cefoxitin，F(xiàn)OX)、阿米卡星(Amikacin，AMK)、安普霉素(Apramycin，APR)、慶大霉素(Gentamycin，GEN)、新霉素(Neomycin，NEO)、鏈霉素(Streptomycin，STR)、多西環(huán)素(Doxycycline，DOX)、氯霉素(Chloramphenicol，CHL)、氟甲砜霉素(Florfenicol，F(xiàn)FC)、多黏菌素E(Colistin，CL)、亞胺培南(Imipenem，IMP)、美羅培南(Meropenem，MEM)、環(huán)丙沙星(Ciprofloxacin，CIP)、恩諾沙星(Enrofloxacin，ENR)，均購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

1.1.4 試驗(yàn)儀器 超凈工作臺(tái)，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司產(chǎn)品；TC-96/G/H(b)C型PCR儀，杭州博日科技有限公司產(chǎn)品；SQ810C型立式高壓滅菌鍋，廈門和譜儀器有限公司產(chǎn)品；DHP-9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱，北京利康達(dá)圣科技有限公司產(chǎn)品；ZWYR-D2403型恒溫振蕩器，上海智城分析儀器制造有限公司產(chǎn)品；臺(tái)式高速離心機(jī)，德國(guó)Eppendorf公司產(chǎn)品；DK-8D三孔電熱恒溫水浴鍋，上海島韓實(shí)業(yè)有限公司產(chǎn)品；電子分析天平，北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；電子天平Y(jié)P202N，菁海儀器(上海)有限公司產(chǎn)品。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品采集 2017—2018年，從全國(guó)11個(gè)奶牛重點(diǎn)養(yǎng)殖區(qū)域的52個(gè)規(guī)?；翀?chǎng)共采集牛奶樣本2 309份。依照GB 4789.1—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 總則》進(jìn)行樣本采集。采集完成后，低溫條件下運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室。

1.2.2 菌株分離 將牛奶樣本接種于腦心浸液肉湯，37 ℃恒溫增菌，過(guò)夜培養(yǎng)16～24 h后用接種環(huán)挑取培養(yǎng)物劃線接種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)16～24 h，然后挑取伊紅美藍(lán)瓊脂上黑紫色、圓形、隆起、光滑且對(duì)光觀察具有金屬光澤的單個(gè)疑似大腸桿菌菌落，于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上進(jìn)行純化培養(yǎng)，將純化的大腸桿菌于LB瓊脂培養(yǎng)基上涂板增菌，保存于30%甘油肉湯中，-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 藥敏試驗(yàn) 嚴(yán)格按照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(Clinicai and Laboratory Standards Institute，CLSI)推薦的細(xì)菌藥物敏感性試驗(yàn)紙片法與稀釋法執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。采用瓊脂稀釋法對(duì)牛奶源大腸桿菌進(jìn)行抗微生物的藥物敏感性試驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 菌株分離 從2 309份牛奶樣品中分離出687株大腸桿菌，總分離率為29.75%。分離純化菌株在伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)培養(yǎng)特性、菌體形態(tài)、菌落特征及革蘭染色和生化鑒定特性均符合大腸桿菌的特征；同時(shí)采用16S rRNA PCR進(jìn)行分子生物學(xué)輔助鑒定。其中2017年從17個(gè)牧場(chǎng)的811份牛奶樣本中分離鑒定到252株大腸桿菌，分離率為31.07%；2018年從35個(gè)牧場(chǎng)的1 498份牛奶樣本中分離鑒定出435株大腸桿菌，分離率為29.04%。京津冀魯區(qū)域牛奶中大腸桿菌的分離率為18.60%～34.86%，其中北京地區(qū)分離率最高，其次是天津地區(qū)及河北地區(qū)，山東地區(qū)分離率最低；東北地區(qū)分離率相似(遼寧地區(qū)24.55%、吉林地區(qū)24.14%)；上海、貴陽(yáng)等其他地區(qū)分離率差異較大，貴陽(yáng)地區(qū)最高(52.99%)，上海地區(qū)最低(9.29%)。2017—2018年全國(guó)重點(diǎn)區(qū)域規(guī)?；翀?chǎng)牛奶源大腸桿菌分離率見圖1。

圖1 2017—2018年重點(diǎn)區(qū)域規(guī)?；翀?chǎng)牛奶源大腸桿菌分離率Fig.1 Prevalence of E.coli in milk samples collected during 2017—20181：北京; 2：天津; 3：河北; 4：山東; 5：遼寧; 6：吉林; 7：上海; 8：貴陽(yáng); 9：成都; 10：寧夏; 11：石河子1：Beijing; 2：Tianjin; 3：Hebei; 4：Shandong; 5：Liaoning; 6：Jilin; 7：Shanghai; 8：Guiyang; 9：Chengdu; 10：Ningxia； 11：Shihezi

2.2 藥敏試驗(yàn)

2.2.1 牛奶源大腸桿菌對(duì)18種抗菌藥物的耐藥結(jié)果 對(duì)分離純化獲得的大腸桿菌菌株進(jìn)行臨床抗菌藥物敏感性試驗(yàn)，結(jié)果顯示，2017年分離到的252株大腸桿菌，對(duì)氨芐西林及多西環(huán)素的耐藥率高，分別為40.98%和36.63%，其次是頭孢曲松(31.28%)、鏈霉素(29.23%)、頭孢噻肟(22.50%)、氟甲砜霉素(22.42%)和氯霉素(19.26%)，對(duì)人醫(yī)臨床非常重要的2類藥物多黏菌素和美羅培南未發(fā)現(xiàn)耐藥或耐藥率極低，分別為0.47%和0；2018年分離到的435株大腸桿菌，對(duì)氨芐西林及鏈霉素的耐藥率高，分別為25.74%和19.59%，其次是頭孢曲松(18.00%)、頭孢噻肟(17.08%)和多西環(huán)素(14.35%)，而亞胺培南和美羅培南未發(fā)現(xiàn)耐藥；其中18種抗菌藥物的耐藥率均未超過(guò)50.00%。牛奶源大腸桿菌菌株對(duì)18種抗菌藥物的藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 679株牛奶源大腸桿菌對(duì)18種抗菌藥物的敏感性試驗(yàn)Table 1 Antimicrobial susceptibility of 679 E. coli isolates to 18 antibiotics (%)

2.2.2 2017—2018年重點(diǎn)區(qū)域牛奶源大腸桿菌對(duì)18種抗菌藥物的耐藥結(jié)果 對(duì)分離純化獲得的大腸桿菌菌株進(jìn)行臨床抗菌藥物敏感性試驗(yàn)，結(jié)果顯示，在樣品采集的11個(gè)奶牛重點(diǎn)養(yǎng)殖區(qū)域中，上海、貴陽(yáng)、寧夏3個(gè)地區(qū)奶牛源大腸桿菌耐藥性最嚴(yán)重，上海地區(qū)牧場(chǎng)大腸桿菌對(duì)氨芐西林耐藥率達(dá)88.89%，其次是貴陽(yáng)58.82%；京津冀區(qū)域中以β-內(nèi)酰胺類藥物(氨芐西林49.08%，頭孢曲松32.07%，頭孢噻肟27.73%)、鏈霉素(22.84%)、多西環(huán)素(23.47%)和氯霉素類(7.33%)耐藥為主，在這3個(gè)區(qū)域中天津地區(qū)大腸桿菌耐藥最嚴(yán)重(氨芐西林耐藥達(dá)80.65%)，其次是河北地區(qū)奶牛牧場(chǎng)，北京牧場(chǎng)最輕，河北地區(qū)阿米卡星耐藥率5.71%；遼寧和吉林地區(qū)牛奶源大腸桿菌耐藥譜相似，耐藥率最高的5類藥物均為氨芐西林(30.82%)、頭孢曲松(25.40%)、頭孢噻肟(23.54%)、鏈霉素(20.14%)和多西環(huán)素(16.41%)；山東地區(qū)牛奶源大腸桿菌對(duì)臨床18種抗菌藥物耐藥率較低，耐藥率最高為環(huán)丙沙星，僅20.00%，其次是氨芐西林(17.50%)和恩諾沙星(15.00%)；成都區(qū)域?qū)εＤ淘创竽c桿菌耐藥率最高的幾類藥物分別是鏈霉素(26.92%)、氨芐西林(19.23%)和慶大霉素(17.31%)，其中頭孢西丁耐藥程度在11個(gè)區(qū)域中最高，達(dá)到13.46%，高于上海地區(qū)的11.11%和貴陽(yáng)地區(qū)的10.00%；新疆石河子地區(qū)在11個(gè)地區(qū)奶牛牧場(chǎng)中，耐藥率最低，介于0～14.29%，鏈霉素耐藥率最高(14.29%)，遠(yuǎn)低于上海(44.44%)、寧夏(37.50%)、吉林(29.17%)和天津地區(qū)(29.03%)的耐藥率。

碳青霉烯類(亞胺培南、美羅培南)和多黏菌素類藥物在11個(gè)地區(qū)牛奶源大腸桿菌中均未檢測(cè)到耐藥性[北京地區(qū)的多黏菌素(0.76%)除外]；氨基糖苷類藥物的阿米卡星和安普霉素除個(gè)別牧場(chǎng)外(河北地區(qū)阿米卡星5.71%、寧夏地區(qū)安普霉素6.25%)，均處于極低耐藥水平，極低于同類藥物的慶大霉素、新霉素和鏈霉素的耐藥率。重點(diǎn)區(qū)域規(guī)?；翀?chǎng)大腸桿菌分離株對(duì)18種抗菌藥物的藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果見表2和圖2。

圖2 2017—2018年重點(diǎn)區(qū)域規(guī)模化牧場(chǎng)679株牛奶源大腸桿菌對(duì)18種抗菌藥物的敏感性試驗(yàn)Fig.2 Antimicrobial susceptibility of 679 E. coli isolates to 18 antibiotics during 2017—2018AMP：氨芐西林; CAZ：頭孢他啶; CRO：頭孢曲松; CTX：頭孢噻肟; FOX：頭孢西丁; AMK：阿米卡星; APR：安普霉素; GEN：慶大霉素; NEO：新霉素; STR：鏈霉素; DOX：多西環(huán)素; CHL：氯霉素; FFC：氟甲砜霉素; CL：多黏菌素E; IMP：亞胺培南; MEM：美羅培南; CIP：環(huán)丙沙星; ENR：恩諾沙星AMP：Ampicillin; CAZ：Ceftazidime; CRO：Ceftriaxone; CTX：Cefotaxime; FOX：Cefoxitin; AMK：Amikacin; APR：Apramycin; GEN：Gentamycin; NEO：Neomycin; STR：Streptomycin; DOX：Doxycycline; CHL：Chloramphenicol; FFC：Florfenicol; CL：Colistin; IMP：Imipenem; MEM：Meropenem; CIP：Ciprofloxacin; ENR：Enrofloxacin

表2 2017—2018年重點(diǎn)區(qū)域規(guī)?；翀?chǎng)679株牛奶源大腸桿菌對(duì)18種抗菌藥物的敏感性試驗(yàn)Table 2 Antimicrobial susceptibility of 679 E. coli isolates to 18 antibiotics during 2017—2018 (%)

3 討論

隨著奶牛乳房炎致病菌的耐藥性逐漸加重，臨床上使用抗菌藥物的防治效果也越來(lái)越差，且同一種屬的不同菌株對(duì)不同的抗菌藥物的敏感性也存在極大的差異[8]。牛奶中抗菌藥物的殘留不僅會(huì)導(dǎo)致乳制品質(zhì)量下降，還會(huì)危及人類健康[9]。所以，正確的抗菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)該地區(qū)養(yǎng)殖戶以及臨床獸醫(yī)合理用藥具有重要的參考價(jià)值，并可降低對(duì)人類健康的危害[10]。因此，本研究對(duì)牛奶源大腸桿菌進(jìn)行了分離鑒定和藥敏試驗(yàn)。

本研究從牛奶樣品中共分離出687株菌株，通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察、革蘭染色、生化特性分析及分子生物學(xué)方法對(duì)其進(jìn)行綜合鑒定，均為大腸桿菌。分離鑒定結(jié)果顯示，貴陽(yáng)地區(qū)的分離率最高，為52.99%，說(shuō)明該地區(qū)大腸桿菌引起的奶牛乳房炎最為嚴(yán)重。京津冀魯區(qū)域中，北京地區(qū)的分離率最高，可能與經(jīng)濟(jì)交通發(fā)達(dá)有關(guān)。東北區(qū)域的分離率相似，可能與氣候和地理環(huán)境相似有關(guān)。上海地區(qū)的分離率最低，為9.29%，說(shuō)明該地區(qū)大腸桿菌引起的奶牛乳房炎的防治效果較好，其奶牛場(chǎng)環(huán)境衛(wèi)生與奶牛飼養(yǎng)管理方面俱佳，有效防控了奶牛乳房炎的發(fā)生和流行。石河子地區(qū)屬于典型的溫帶大陸性氣候，溫差較大，日照時(shí)間充足，這為大腸桿菌傳播提供了有利的條件，因此本研究中該地區(qū)大腸桿菌的分離率高居第2位，為37.57%。成都地處四川盆地，屬于亞熱帶季風(fēng)性濕潤(rùn)氣候、氣候溫和、雨量豐沛，有利于大腸桿菌的生長(zhǎng)繁殖，因此本研究中該地區(qū)大腸桿菌的分離率也高達(dá)35.37%。

本研究對(duì)687株大腸桿菌進(jìn)行18種抗菌藥物的敏感性試驗(yàn)分析，結(jié)果表明大腸桿菌對(duì)臨床上使用的抗菌藥物均產(chǎn)生了不同程度的耐藥，尤其對(duì)氨芐西林、鏈霉素及多西環(huán)素的耐受性最高，其可能是由于該奶牛場(chǎng)長(zhǎng)期使用上述常規(guī)抗生素或此菌株由牛場(chǎng)外傳入引起奶牛發(fā)病，在傳入之前已經(jīng)對(duì)上述常規(guī)抗生素產(chǎn)生耐藥性。而對(duì)多黏菌素、亞胺培南和美羅培南的耐受性極低甚至無(wú)耐受性，該試驗(yàn)結(jié)果基本能反映目前全國(guó)重點(diǎn)區(qū)域?qū)Σ糠挚咕幍哪退幮郧闆r。因此，在治療因感染大腸桿菌而致的奶牛乳房炎時(shí)，應(yīng)選用經(jīng)藥敏試驗(yàn)確證為高效的2～3種敏感藥物，按療程和足夠的劑量交替治療，減少抗生素殘留和耐藥性的危害，降低奶牛乳房炎的治療成本[11]。

徐繼英等[12](2012年)的研究結(jié)果中，國(guó)內(nèi)7個(gè)省、市、自治區(qū)部分地區(qū)乳樣中大腸桿菌的分離率低于本試驗(yàn)，且對(duì)阿米卡星、慶大霉素和氯霉素的耐藥性高于本試驗(yàn)；張連梅等[13](2013年)報(bào)道的寧夏地區(qū)奶樣中大腸桿菌的分離率低于本試驗(yàn)寧夏地區(qū)的分離率；余婷等[14](2013年)對(duì)寧夏地區(qū)奶牛場(chǎng)分離出大腸桿菌的耐藥性進(jìn)行分析，結(jié)果顯示對(duì)氨芐西林、頭孢噻肟、鏈霉素、慶大霉素、多西環(huán)素和多黏菌素的耐藥性高于本試驗(yàn)，而對(duì)恩諾沙星和環(huán)丙沙星的耐藥率低于與本試驗(yàn)；孫芳芳等[15](2014年)報(bào)道的沈陽(yáng)地區(qū)奶牛場(chǎng)奶樣大腸桿菌的分離率與本試驗(yàn)遼寧地區(qū)大致相同，其中氨芐西林與鏈霉素的耐藥率與本試驗(yàn)遼寧地區(qū)基本相同，而慶大霉素與環(huán)丙沙星的耐藥率與本試驗(yàn)遼寧地區(qū)有一定差異；賈林軍等[16](2014年)對(duì)新疆地區(qū)的奶樣進(jìn)行了分離鑒定，大腸桿菌的分離率為9.5%，低于本試驗(yàn)新疆地區(qū)，其中對(duì)氨芐西林、慶大霉素和鏈霉素耐藥率高于本試驗(yàn)新疆地區(qū)；劉春杰等[17](2014年)研究結(jié)果顯示，吉林奶牛場(chǎng)的乳樣分離率為24%，與本試驗(yàn)吉林地區(qū)基本相同，且對(duì)環(huán)丙沙星的低耐藥率與本試驗(yàn)吉林地區(qū)基本相同，而對(duì)氨芐西林和慶大霉素的耐藥率與本試驗(yàn)吉林地區(qū)有一定差異；楊淑華等[18](2015年)報(bào)道的遼寧地區(qū)奶牛場(chǎng)采集的乳樣中大腸桿菌的分離率為20.26%，與本試驗(yàn)遼寧地區(qū)基本相同；薛梅等[19](2015年)對(duì)山東省奶牛場(chǎng)采集的奶樣進(jìn)行分離鑒定，大腸桿菌的分離率為16.32%，與本試驗(yàn)山東地區(qū)基本相同，且對(duì)頭孢噻肟的低耐藥率與本試驗(yàn)山東地區(qū)基本相同，而對(duì)鏈霉素、阿米卡星和恩諾沙星的耐藥率高于本試驗(yàn)山東地區(qū)；許丹丹等[20](2015年)從新疆石河子地區(qū)奶牛場(chǎng)采集的313份奶樣中分離出16株大腸桿菌，分離率為5.11%，低于本試驗(yàn)新疆地區(qū)，且對(duì)慶大霉素、氨芐西林、鏈霉素的耐藥率高于本試驗(yàn)新疆地區(qū)；姚偉等[21]等(2016年)報(bào)道的遼寧地區(qū)某大型奶牛場(chǎng)采集的奶樣中大腸桿菌分離率為76%(57/75)，遠(yuǎn)高于本試驗(yàn)遼寧地區(qū)，且對(duì)慶大霉素的低耐藥率與本試驗(yàn)遼寧地區(qū)相同，而對(duì)氨芐西林、多西環(huán)素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星的耐藥率高于本試驗(yàn)遼寧地區(qū)；楊彩霞等[22](2016年)的研究結(jié)果表明，遼寧地區(qū)16家規(guī)模化奶牛場(chǎng)采集奶樣中大腸桿菌的分離率為55.63%，高于本試驗(yàn)遼寧地區(qū)，且對(duì)氨芐西林、鏈霉素、氯霉素和多西環(huán)素的耐藥率與本試驗(yàn)遼寧地區(qū)基本一致，而對(duì)多黏菌素的高耐藥率與本試驗(yàn)遼寧地區(qū)相反；高曉偉等[23](2016年)從吉林長(zhǎng)春地區(qū)采集的231份奶樣中分離出54株大腸桿菌，分離率為23.37%，與本試驗(yàn)吉林地區(qū)基本相同，且對(duì)鏈霉素、環(huán)丙沙星的耐藥率與本試驗(yàn)吉林地區(qū)基本相同，而對(duì)多西環(huán)素、慶大霉素的耐藥性與本試驗(yàn)吉林地區(qū)有一定差異；張倩等[11](2016年)報(bào)道的新疆石河子地區(qū)規(guī)?；?chǎng)的85份奶樣中分離出大腸桿菌27株，占31.76%，與本試驗(yàn)新疆地區(qū)基本相同，且對(duì)阿米卡星、恩諾沙星、氟甲砜霉素的耐藥率與本試驗(yàn)石河子地區(qū)基本相同，而對(duì)氨芐西林、多黏菌素的耐藥率高于本試驗(yàn)石河子地區(qū)；王雪梅等[24](2017年)對(duì)四川成都地區(qū)采集的奶樣進(jìn)行分離鑒定，大腸桿菌分離率為14.16%，低于本試驗(yàn)成都地區(qū)，且對(duì)鏈霉素的耐藥率低于與本試驗(yàn)成都地區(qū)，而對(duì)頭孢噻肟和慶大霉素的耐藥率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于本試驗(yàn)四川地區(qū)；李寧等[25](2018年)的研究結(jié)果顯示，遼寧地區(qū)采集的89份奶樣中分離出25株大腸桿菌，分離率28.09%，與本試驗(yàn)遼寧地區(qū)基本相同，且對(duì)頭孢噻肟的耐藥性與本試驗(yàn)遼寧地區(qū)基本相同，而對(duì)頭孢西丁、阿米卡星、慶大霉素、亞胺培南及環(huán)丙沙星的耐藥率均高于與本試驗(yàn)遼寧地區(qū)。

由此可見，不同地區(qū)大腸桿菌的分離率存在不同程度的差異，這不僅與奶牛場(chǎng)環(huán)境衛(wèi)生、奶牛飼養(yǎng)管理和用藥習(xí)慣等有關(guān)系，還與氣候和地理環(huán)境等有直接關(guān)系。因此，應(yīng)加強(qiáng)奶牛的飼養(yǎng)管理，改善牛舍及周圍環(huán)境衛(wèi)生，保持牛舍通風(fēng)干燥且定期清洗牛舍和對(duì)牛舍進(jìn)行滅菌消毒。此外，要定期對(duì)奶牛進(jìn)行檢查，對(duì)久治不愈的臨床型乳房炎患牛應(yīng)淘汰。同時(shí)應(yīng)規(guī)范擠奶程序，做好擠奶用具的消毒工作，防止擠奶過(guò)程中的微生物感染。