孫潔，蔣士卿

1.焦作市婦幼保健院，河南 焦作 454000； 2.河南中醫(yī)藥大學(xué)，河南 鄭州 450046

新型冠狀病毒肺炎(corona virus disease 2019，COVID-19)，簡稱“新冠肺炎”，是由一種新型冠狀病毒導(dǎo)致的嚴(yán)重傳染性疾病，目前正在全球范圍內(nèi)暴發(fā)。從臨床情況來看，該疾病具有傳播速度快、傳染性強(qiáng)、無特定易感人群等特點(diǎn)，且無特效藥物可用。在臨床治療過程中，西醫(yī)主要以對癥支持治療為主，針對高熱、咳嗽、肺部CT異常、氧飽和率低、甚至呼吸困難等癥狀，做出維持水、電解質(zhì)與酸堿平衡，氧療與呼吸支持，抗病毒，抗細(xì)菌的治療等。中醫(yī)認(rèn)為新冠肺炎是疫毒閉肺證，病因主要是感受疫癘之氣和正氣虧虛兩方面，表現(xiàn)為高熱、或身熱不退或往來寒熱，咳嗽痰少、或有黃痰，煩躁，胸憋悶，氣促，舌質(zhì)紅或紫暗，舌苔黃燥，脈滑數(shù)。中醫(yī)藥在治療COVID-19時(shí)具有一定優(yōu)勢，尤其是在救治危重型患者方面，大大提高了患者的好轉(zhuǎn)率、治愈率，改善了重型、危重型患者預(yù)后較差的狀況。祛肺毒一號方(生曬參30 g，荊芥15 g，金銀花 15 g，玄參15 g，連翹30 g，皂角刺 10 g，杏仁 10 g，露蜂房10 g，甘草6 g)具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、清熱解毒、止咳祛痰平喘的功效，在定點(diǎn)醫(yī)院收治的重型/危重型新冠肺炎患者中取得了良好的臨床治療效果[1]，但由于該方的活性物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制尚未明確，使其在抗新冠病毒使用和推廣等方面都受到了一定的限制。

分子對接技術(shù)利用計(jì)算機(jī)模擬藥物分子與蛋白質(zhì)相互作用的結(jié)合過程，預(yù)測藥物分子和靶點(diǎn)的結(jié)合方式和親和力，可用于藥物的分子機(jī)制研究[2]。新冠肺炎病毒是一種正鏈病毒，RNA直接附著于宿主細(xì)胞核糖體上，翻譯出大分子蛋白，并迅速被蛋白水解酶降解[3]。2019-nCoV 冠狀病毒3CL水解酶(2019-nCoV 3CL Mpro)常被認(rèn)為是理想的抗SARS-CoV藥物篩選靶標(biāo)[4]。因此，本研究以 2019-nCoV 3CL Mpro作為抗新冠肺炎病毒的靶蛋白進(jìn)行祛肺毒一號方成分的篩選，并利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)從分子水平探究了祛肺毒一號方治療新冠肺炎的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制，旨在為中醫(yī)藥治療新冠肺炎的研究和祛病毒一號方的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 小分子數(shù)據(jù)庫的建立祛肺毒一號方由生曬參、荊芥、金銀花、玄參、連翹、皂角刺、杏仁、露蜂房、甘草9味中藥組成。采用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(traditional chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform，TCMSP)檢索祛肺毒一號方組方中藥的化學(xué)成分。露蜂房的化學(xué)成分未在TCMSP數(shù)據(jù)庫中檢索到，故通過查閱文獻(xiàn)[5-7]進(jìn)行搜集。以類藥性(drug likeness，DL)≥0.18及口服生物利用度(oral bioavailability，OB)≥30%為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選，將所得的化學(xué)成分建立小分子數(shù)據(jù)庫。

1.2 分子對接及驗(yàn)證采用Chem 3D軟件構(gòu)建小分子數(shù)據(jù)庫中化學(xué)成分的三維分子結(jié)構(gòu)，并利用MM2分子力學(xué)方法優(yōu)化。從結(jié)構(gòu)生物信息學(xué)研究合作實(shí)驗(yàn)室蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(research collaboratory for structural bioinformatics protein data bank，RCSB PDB，http：//www.rcsb.org)中下載2019-nCoV 3CL Mpro的三維結(jié)構(gòu)，利用Autodocktools 1.5.6工具刪除晶體中的結(jié)晶水，并為蛋白添加氫原子和gasteiger電荷。采用AutoDock 4.2程序進(jìn)行分子對接[8]，評價(jià)祛肺毒一號方中的化學(xué)成分與2019-nCoV 3CL Mpro的結(jié)合活性。對接的活性位點(diǎn)參數(shù)如下：盒子坐標(biāo)為(-9.732，11.403，68.639)，盒子三維的格點(diǎn)數(shù)為(40，55，40)，采用拉馬克遺傳算法，其他參數(shù)采用默認(rèn)設(shè)置。為了驗(yàn)證autodock程序?qū)Ρ狙芯矿w系對接的可靠性，將靶蛋白復(fù)合物6LU7的原有配體抽離，再重新對接到靶蛋白的活性口袋，并計(jì)算對接后配體的構(gòu)象與原始晶體結(jié)構(gòu)中配體構(gòu)象的均方根偏差值(root-mean-square deviation，RMSD)。一般認(rèn)為當(dāng)RMSD值≤2.0?時(shí)，該對接方法可以較好地重現(xiàn)配體受體原來的結(jié)合模式，表明對接參數(shù)設(shè)置合理[9]。

1.3 “活性成分-疾病”交集靶點(diǎn)篩選以 -9 kcal·mol-1為篩選標(biāo)準(zhǔn)對對接的化合物進(jìn)行篩選，并將篩選出的化合物導(dǎo)入SwissTargetPrediction(http：//www.swisstargetprediction.ch/)數(shù)據(jù)庫[10]預(yù)測化合物的作用靶點(diǎn)。以“novel coronavirus”為關(guān)鍵詞，在人類基因數(shù)據(jù)庫(the human gene database，GeneCards，https：//www.genecards.org/)[11]、美國國立生物技術(shù)信息中心(national center for biotechnology information，NCBI，https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)數(shù)據(jù)庫[12]以及CTD(http：//ctdbase.org/)數(shù)據(jù)庫[13]進(jìn)行疾病相關(guān)靶點(diǎn)檢索。其中CTD的數(shù)據(jù)以“inference score”進(jìn)行中位值篩選以獲得相關(guān)性更強(qiáng)的靶點(diǎn)。將篩選出的藥物靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)輸入韋恩圖制作軟件venny 2.1，交集靶點(diǎn)即為藥物作用于疾病的靶點(diǎn)。

1.4 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(protein - protein interaction，PPI)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用是認(rèn)識生命活動(dòng)基本規(guī)律、探索疾病發(fā)生發(fā)展和防治的重要途徑。將活性成分作用于疾病的靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING 11.0(https：//string-db.org/)數(shù)據(jù)庫[14]，將生物種類設(shè)定為“Homo sapiens”，設(shè)置可信度>0.9，最終獲得蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖。采用拓?fù)浞治龊途垲惙治龊Y選得到關(guān)鍵靶點(diǎn)及核心基因。

1.5 富集分析將藥物作用于疾病的靶點(diǎn)基因?qū)隓AVID(https：//david.ncifcrf.gov/)數(shù)據(jù)庫，進(jìn)行基因本體(gene ontology，GO)功能富集分析和京都基因與基因組百科全書(kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)信號通路富集分析，將富集結(jié)果導(dǎo)入Omi share Tools(http：//www.omicshare.com/tools/index.php/)繪制對應(yīng)的柱形圖及高級氣泡圖。

1.6 “中藥活性成分—疾病—通路—靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建將祛肺毒一號方治療COVID-19的靶點(diǎn)與活性成分進(jìn)行映射關(guān)聯(lián)，得到“活性成分-靶點(diǎn)”關(guān)聯(lián)表，與PPI網(wǎng)絡(luò)共同導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件，構(gòu)建“中藥活性成分-疾病-通路-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)。

2 結(jié)果

2.1 祛肺毒一號方化學(xué)成分的篩選通過檢索 TCMSP 數(shù)據(jù)庫與文獻(xiàn)查找篩選出祛肺毒一號方的化學(xué)成分，其中人參22個(gè)、荊芥11個(gè)、金銀花23個(gè)、玄參9個(gè)、連翹23 個(gè)、皂角刺11個(gè)、杏仁19個(gè)、露蜂房53個(gè)、甘草92個(gè)，刪除重復(fù)及未報(bào)道結(jié)構(gòu)的成分，最終得到220個(gè)化合物。

2.2 分子對接方法可靠性驗(yàn)證靶蛋白(PDB ID：6LU7)是2019-nCoV 3CL Mpro和化合物N3的復(fù)合物[15]，兩者的結(jié)合能ΔGbinding=-9.40 kcal·mol-1。將靶蛋白原始晶體結(jié)構(gòu)中配體構(gòu)象與對接后配體的構(gòu)象疊合可以明顯看出，對接后的配體構(gòu)象與原始晶體結(jié)構(gòu)中的配體構(gòu)象基本重合，且N3對接前后的RMSD值均為0.82?，表明本對接方法及對接參數(shù)設(shè)置合理，可信度高。見圖1。

注：圖中玫紅色為靶點(diǎn)蛋白(飄帶模型)；金色為原始配體；藍(lán)色為對接后的配體

2.3 祛肺毒一號方活性成分篩選當(dāng)ΔGbinding<0時(shí)，表明配體分子與受體分子可以自發(fā)結(jié)合，ΔGbinding越低，則配體和受體的結(jié)合越穩(wěn)定。按照ΔGbinding≤-6 kcal·mol-1、-7 kcal·mol-1、-8 kcal·mol-1、-9 kcal·mol-1的標(biāo)準(zhǔn)分析對接結(jié)果發(fā)現(xiàn)，祛肺毒一號方的220種化學(xué)成分的占比分別為84.6%、73.35%、48.8%、15.1%，其中人參、連翹及露蜂房中具有較低結(jié)合能的化學(xué)成分占比較高。以ΔGbinding≤-9 kcal·mol-1為標(biāo)準(zhǔn)篩選得到33個(gè)活性成分，且與2019-nCoV 3CL Mpro結(jié)合能較低的前5位成分分別是化合物109：(2S)-2-[4-hydroxy-3-(3-methylbut-2-enyl)phenyl]-8，8-dimethyl-2，3-dihydropyrano[2，3-f]chromen-4-one；化合物78：xambioona；化合物26：菠菜甾醇；化合物141：3，22-dihydroxy-11-oxo-delta(12)-oleanene-27-alpha-methoxycarbonyl-29-oic acid；化合物110：euchrenone。這些化合物與靶蛋白的關(guān)鍵氨基酸殘基不但能夠形成氫鍵，還能形成疏水等作用，占據(jù)靶蛋白的活性位點(diǎn)，使靶蛋白2019-nCoV 3CL Mpro失活。見表1，圖2。

表1 祛肺毒一號方中篩選出的33個(gè)活性成分

注：表示疏水相互作用；----表示氫鍵作用；A：化合物109；B：化合物26；C：化合物141；D：化合物178；E：化合物110

2.4 多配體—單靶點(diǎn)對接中藥成分復(fù)雜，在治療疾病的過程中，往往可以通過多途徑、多靶點(diǎn)協(xié)同發(fā)揮作用[16]。中藥多成分多靶點(diǎn)協(xié)同作用網(wǎng)絡(luò)中存在多成分單靶點(diǎn)疊加作用，可實(shí)現(xiàn)中藥的科學(xué)配伍，提高療效[17]。為了驗(yàn)證祛肺毒一號方中是否存在多成分同時(shí)作用，選擇結(jié)合能最低的3個(gè)化合物依次對接到靶蛋白2019-nCoV 3CL Mpro的活性口袋，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3個(gè)化合物不僅可以與靶蛋白直接建立相互作用，且3個(gè)化合物之間存在π-σ和π-π相互作用，使3個(gè)化合物形成穩(wěn)定的體系，共同作用于靶蛋白，即化合物109先進(jìn)入靶蛋白的活性口袋，與氨基酸His41、Cys145、His163、His172、Met165、Leu167、Met165、Pro168形成相互作用，之后化合物178進(jìn)入活性口袋內(nèi)部，不僅與氨基酸殘基Ser46之間形成了氫鍵，且與化合物109之間形成了π-π等相互作用；化合物26進(jìn)入活性口袋后，基本占據(jù)了活性口袋出口。3個(gè)化合物協(xié)同作用，靶蛋白活性口袋的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)被完全占據(jù)，有效抑制了靶蛋白的活性。見圖3，表2。

注：(a)3個(gè)活性成分與靶蛋白2019-nCoV 3CL Mpro的結(jié)合圖；(b)、(c)、(d)分別為化合物109、178、26與靶蛋白2019-nCoV 3CL Mpro的相互作用模式圖

表2 3個(gè)活性成分與靶蛋白2019-nCoV 3CL Mpro結(jié)合的ΔGbinding結(jié)果

2.5 祛肺毒一號方治療COVID-19的作用靶點(diǎn)將祛肺毒一號方的33個(gè)活性成分導(dǎo)入SwissTargetPrediction數(shù)據(jù)庫，篩選得到活性成分的作用靶點(diǎn)728個(gè)。采用GeneCards、NCBI、CTD三個(gè)數(shù)據(jù)庫檢索并搜集COVID-19疾病相關(guān)靶點(diǎn)分別791個(gè)、136個(gè)、3 593個(gè)，合并刪重后得到COVID-19疾病相關(guān)靶點(diǎn) 4 165 個(gè)。將33個(gè)祛肺毒一號方活性成分的728個(gè)靶點(diǎn)與4 165個(gè)COVID-19疾病相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行映射，最終得到祛肺毒一號方治療COVID-19的有效靶點(diǎn)347個(gè)。見圖4。

圖4 祛肺毒一號方活性成分靶點(diǎn)與COVID-19疾病靶點(diǎn)韋恩圖

2.6 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)將祛肺毒一號方治療COVID-19的347個(gè)靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫，得到PPI網(wǎng)絡(luò)，該網(wǎng)絡(luò)中有347個(gè)節(jié)點(diǎn)，1 780條邊，平均度值為10.3。導(dǎo)入Cystoscape 3.7.2軟件繪制PPI網(wǎng)絡(luò)圖，圖中節(jié)點(diǎn)顏色和大小根據(jù)度值調(diào)整，面積越大，顏色越深，則度值越大，線條從粗到細(xì)表示邊介數(shù)從大到小。采用NetworkAnalyzer工具進(jìn)行拓?fù)浞治觯远戎?degree)、中介中心性(betweenness centrality)、平均最短路徑長度(average shortest path length)和緊密中心性(closeness centrality)4個(gè)參數(shù)為參考標(biāo)準(zhǔn)，通過degree排序，選取分值大于平均分的基因作為關(guān)鍵靶點(diǎn)，總共篩選出114個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)，使用R 3.6.3軟件繪制出前20個(gè)靶點(diǎn)。通過MCODE模塊[18]進(jìn)行基因簇的分析及核心靶點(diǎn)的篩選，共得到12個(gè)基因簇和11個(gè)核心基因，核心基因?yàn)镃CR1、HCRTR2、MAPK3、BCL2L1、IKBKB、CYP1A2、CDK5、CCNA1、PPARG、PLAU、FLT1。見圖5、圖6，表3。

表3 12個(gè)基因簇的詳細(xì)信息表

圖5 PPI網(wǎng)絡(luò)圖

注：橫坐標(biāo)為靶點(diǎn)的degree值；縱坐標(biāo)為靶點(diǎn)

2.7 GO富集分析與KEGG通路富集分析將347個(gè)祛肺毒一號方治療COVID-19的有效靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫進(jìn)行GO生物功能富集分析和KEGG通路富集分析，以P≤0.05為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選，共富集到GO生物功能3 210條，KEGG信號通路179條。3 210條GO生物功能包括2 871條生物過程(biological process，BP)、230條分子功能(molecular function，MF)及109條細(xì)胞組分 (cell component，CC)，分子功能主要涉及絲氨酸蛋白酶激酶活性、 酪氨酸激酶活性、 磷酸酶活性 、磷酸酶結(jié)合核受體等受體的活性；生物過程主要涉及氧化應(yīng)激反應(yīng)、細(xì)胞對藥物的反應(yīng)、肽基絲氨酸修飾等；細(xì)胞組分主要涉及膜筏、膜微疇、膜區(qū)等。選取179條信號通路中排名前20的通路進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，靶點(diǎn)顯著富集于磷酯酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B，Akt)信號通路、人巨細(xì)胞病毒感染、乙型肝炎、 缺氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia inducible factor-1，HIF-1)信號通路、糖尿病并發(fā)癥中的糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycation end products，AGE)-AGE受體(receptor for AGE，RAGE)信號通路、T細(xì)胞受體信號通路、愛潑斯坦-巴爾病毒感染等通路。見圖7、圖8。

圖7 關(guān)鍵靶點(diǎn)的GO富集分析

圖8 關(guān)鍵靶點(diǎn)的 KEGG通路富集

2.8 “中藥活性成分-疾病-通路-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建采用Cytoscape3.7.2軟件進(jìn)行通路網(wǎng)絡(luò)圖的繪制，以便更直觀地展示中藥活性成分在治療COVID-19過程中多成分、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)。見圖9。

注：藍(lán)色為活性成分；黃色為活性成分作用于疾病的靶點(diǎn)；綠色為最顯著的前20條通路；紅色為疾病，即COVID-19

3 討論

新冠肺炎屬于中醫(yī)疫毒閉肺證，是正虛邪實(shí)的表現(xiàn)。從中醫(yī)角度分析，祛肺毒一號方以大補(bǔ)元?dú)獾娜藚⑴c玄參共同作用達(dá)到補(bǔ)氣養(yǎng)陰的功效，以金銀花、連翹、荊芥、皂角刺協(xié)同使用使清熱解毒能力尤佳，杏仁止咳祛痰平喘，露蜂房攻毒殺蟲、祛風(fēng)，甘草調(diào)和諸藥?，F(xiàn)代藥理研究表明，人參中的活性物質(zhì)具有提高免疫、抗病毒的作用，同時(shí)對呼吸道病毒有抑制作用[19]；金銀花具有抗病毒，治療感染及各種炎癥的藥理作用[20-21]；連翹具有清除內(nèi)毒素、抗炎、增強(qiáng)免疫等藥理作用[22]；荊芥具有抗病毒、解熱鎮(zhèn)痛、抗炎的功效[23]；皂角刺可治療浸潤型肺炎，還具有抗病毒、調(diào)節(jié)免疫力的作用[24-26]；杏仁具有抗肺纖維化、抗高氧誘導(dǎo)肺損傷、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗炎的功效[27]；露蜂房有抗炎、抗菌抗病毒及防治肺纖維化和解熱鎮(zhèn)痛的作用[28]；甘草具有抗炎及免疫抑制作用，同時(shí)具有解毒、抗病毒、鎮(zhèn)咳祛痰、抑菌、抑制氣道平滑肌細(xì)胞增生的作用[29]。

通過分子對接篩選結(jié)果表明，在祛肺毒一號方中有220種活性成分符合OB≥30%且DL≥0.18的篩選標(biāo)準(zhǔn)，其中ΔGbinding≤-6 kcal·mol-1的活性成分達(dá)到總成分的84.6%；ΔGbinding≤-7 kcal·mol-1的活性成分達(dá)到總成分的73.35%；ΔGbinding≤-8 kcal·mol-1的活性成分達(dá)到總成分的48.8%；ΔGbinding≤-9 kcal·mol-1的活性成分達(dá)到總成分的15.1%，共33個(gè)。通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析發(fā)現(xiàn)PIK3R1、Akt、絲裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase 1，MAPK1)、MAPK3可能是核心靶點(diǎn)。網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治鲲@示，祛肺毒一號方治療 COVID-19的過程中涉及多種生物過程、細(xì)胞組分和分子功能，且核心靶點(diǎn)顯著富集于PI3K-Akt信號通路、人巨細(xì)胞病毒感染、乙型肝炎、HIF-1信號通路、糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號通路、T細(xì)胞受體信號通路、愛潑斯坦-巴爾病毒感染通路等多個(gè)通路。PI3K是肺細(xì)胞重要的調(diào)節(jié)酶之一，影響肺組織的生理和病理變化[30]。研究發(fā)現(xiàn)，PI3K不僅可以影響細(xì)胞內(nèi)的酪氨酸激酶、絲/蘇氨酸激酶的活性從而調(diào)控細(xì)胞的生物過程，而且在造成急性肺損傷的過程中起著不可忽視的作用[31]，進(jìn)而導(dǎo)致COVID-19引起急性肺損傷時(shí)炎癥因子的浸潤。MAPK在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，MAPK1、MAPK3兩種激酶激活可調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長、分化、應(yīng)激、炎癥反應(yīng)等病理效應(yīng)[32]，從而加劇炎癥反應(yīng)。冠狀病毒的入侵激活了人巨細(xì)胞病毒感染通路，影響磷酸酶活性和磷酸酶結(jié)合核受體活性，進(jìn)入T細(xì)胞受體信號通路，逃脫P(yáng)D-1/ PD-L1檢查點(diǎn)的檢查，加速了全身免疫系統(tǒng)的損傷。因此推測新冠病毒可能是通過入侵人體，刺激免疫反應(yīng)，啟動(dòng) PI3K-Akt信號通路途徑，促進(jìn)MAPK1、MAPK3等激酶的表達(dá)，導(dǎo)致肺部炎性反應(yīng)，引起急性肺損傷；而祛肺毒一號方可能通過調(diào)節(jié) PI3K-Akt等信號通路起到治療 COVID-19的效果。

通過單配體-單靶點(diǎn)的對接，發(fā)現(xiàn)祛肺毒一號方中化合物109、178、26、141、110對2019-nCoV 3CL Mpro有較強(qiáng)的疏水相互作用，可占據(jù)蛋白的活性位點(diǎn)，抑制蛋白發(fā)揮作用，是祛肺毒一號方發(fā)揮療效的關(guān)鍵成分。通過多配體-單靶點(diǎn)的對接發(fā)現(xiàn)，化合物109、178、26與2019-nCoV 3CL Mpro都有很強(qiáng)的結(jié)合力，導(dǎo)致2019-nCoV 3CL Mpro失活，提示這3種成分可直接有效的發(fā)揮抗病毒作用，且3種成分可在2019- nCoV 3CL Mpro的活性位點(diǎn)協(xié)同作用，共同抑制水解酶的活性，發(fā)揮抑制病毒的作用。

本研究首先采用分子對接方法篩選出祛肺毒一號方對2019-nCoV 3CL Mpro有明顯抑制作用的活性成分，之后利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法進(jìn)一步研究了祛肺毒一號方治療COVID-19的作用機(jī)制。該研究的預(yù)測結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)[19-32]結(jié)果一致，說明本研究方法可靠，結(jié)果可信，為后續(xù)研究提供了一定的參考。