王 琴，黃 蘭，李 霞，葛 頌

(遵義醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院 牙周科，貴州 遵義 563099)

牙周炎是菌斑引起的發(fā)生于牙周支持組織的免疫炎癥性疾病，可導(dǎo)致附著喪失，牙槽骨吸收，牙齒脫落等臨床癥狀[1]。牙周支持組織炎癥會(huì)導(dǎo)致牙齦上皮通透性增加，微生物、內(nèi)毒素和炎性細(xì)胞因子可能藉此進(jìn)入全身血液循環(huán)，進(jìn)而引發(fā)全身炎癥反應(yīng)[2]。最近研究表明，牙周病與多種腸道疾病的進(jìn)展有關(guān)[3]。牙周病原體的異位定植可導(dǎo)致腸道微生態(tài)失衡和炎癥。與此同時(shí)，牙周病原體的毒力因子會(huì)破壞腸道上皮的物理屏障，使腸道腔的細(xì)菌和代謝物泄漏到血液中。此外，牙周病原體可以直接或間接地調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)并破壞體內(nèi)平衡[4]。

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是最常見(jiàn)的癡呆類(lèi)型，神經(jīng)炎癥在AD神經(jīng)病理變化的進(jìn)展中起著至關(guān)重要的作用[5]。越來(lái)越多的證據(jù)支持牙周炎與AD之間的聯(lián)系[6]。Chen等[1]研究發(fā)現(xiàn)患有牙周炎的病人發(fā)展為AD的風(fēng)險(xiǎn)約增加1.7倍?？谇痪菏Ш鈺?huì)導(dǎo)致腸部菌群改變，并與胃腸道、神經(jīng)系統(tǒng)疾病等多種全身性疾病有關(guān)[7]。腸道菌群失調(diào)可通過(guò)微生物群-腸-腦軸導(dǎo)致神經(jīng)行為變化[8]。然而，牙周炎影響AD的具體機(jī)制還未闡明。本研究旨在通過(guò)分析實(shí)驗(yàn)性牙周炎對(duì)大鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)、回腸組織形態(tài)及occludin表達(dá)水平、血液炎癥因子水平的影響，初步探討牙周炎對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響，繼而推測(cè)牙周炎影響AD的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用8周齡SPF級(jí)雄性SD大鼠30只(遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司)，每籠5只，飼養(yǎng)溫度22～25℃，12 h/12 h晝夜循環(huán)，噪音不超過(guò)60 dB，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，飲食飲水自由，墊料每周更換2次，定期消毒。

1.2 主要試劑與材料 滅菌3-0、5-0縫合絲線(金環(huán),上海)，β-淀粉樣蛋白(β-amyloid，Aβ)25-35(Sigma,美國(guó))，Aβ1-42一抗(Abcam,美國(guó))，閉鎖蛋白(Occludin)一抗(賽維爾,中國(guó))，大鼠白細(xì)胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)、脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒(江萊生物,上海)；BX43正置顯微鏡(Olympus,日本)；Centrifuge5417R 低溫超速離心機(jī)(Eppendorf,德國(guó))；EG1150石蠟包埋機(jī)(Leica,德國(guó))；RM2245 輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)(Leica,德國(guó))；TKY-TKA攤片烤片機(jī)(泰康,湖北)；TopScan行為學(xué)分析系統(tǒng)(Cleversys Inc,美國(guó))。

1.3 方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)分組與動(dòng)物模型建立 適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，按隨機(jī)原則將30只大鼠分為3組：對(duì)照組(C)、牙周炎組(P)、AD模型組(AD)。牙周炎組采用3-0縫合絲線行雙側(cè)上頜第一、二磨牙結(jié)扎，總持續(xù)時(shí)間為8周。每周查看1次結(jié)扎線情況，發(fā)現(xiàn)脫落及時(shí)重扎。牙周結(jié)扎45 d后建立AD模型，術(shù)前大鼠禁食12 h，腹腔注射2%戊巴比妥鈉(30 mg/kg)麻醉后，將大鼠顱平面固定在腦立體定位儀，去除頭部毛發(fā)，碘伏消毒后縱行切開(kāi)至骨面，暴露顱骨后將前囟設(shè)為零點(diǎn)，確定進(jìn)針位點(diǎn)為前囟后1 mm，中線旁開(kāi)1.5 mm，進(jìn)針深度為顱骨下3.5 mm。通過(guò)微量注射器將Aβ25-35(2 μg/μL)注入大鼠雙側(cè)側(cè)腦室(每側(cè)5 μL)，注射完畢后停留5 min，最后緩慢退出注射器，用5-0縫合絲線縫合創(chuàng)口。C組用等量生理鹽水替代Aβ25-35溶液進(jìn)行側(cè)腦室注射。

1.3.2 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) AD模型建立14 d后進(jìn)行為期5 d的Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，水迷宮泳池分為4個(gè)象限，其中第1象限中心放置直徑12 cm的站臺(tái)，泳池水面要求沒(méi)過(guò)站臺(tái)2 cm。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程保持安靜并在暗處進(jìn)行，水溫控制在(22±1)℃。4 d的定向航行實(shí)驗(yàn)中，將大鼠依次從2、3、4象限面朝池壁、頭朝上放入水中，記錄每只大鼠在120 s內(nèi)到達(dá)站臺(tái)的時(shí)間，若120 s內(nèi)未找到站臺(tái)，則用長(zhǎng)棍引導(dǎo)其至站臺(tái)，并停留10 s后再結(jié)束實(shí)驗(yàn)，每次結(jié)束實(shí)驗(yàn)后擦干其身體。最后1 d為空間探索實(shí)驗(yàn)，拆除第1象限的平臺(tái)，將大鼠從任意象限(除目標(biāo)象限)放入水中，對(duì)其120 s內(nèi)在目標(biāo)象限停留時(shí)間及穿越平臺(tái)次數(shù)進(jìn)行記錄。利用TopScan行為學(xué)分析系統(tǒng)自動(dòng)計(jì)算出大鼠在目標(biāo)象限停留時(shí)間百分比。

1.3.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死與取材 大鼠5 d水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，自然喂養(yǎng)1 d，麻醉后腹腔下靜脈取血，4℃過(guò)夜后，3 000 r/min、4℃離心10 min，上清-80℃保存?zhèn)溆?。取出頜骨，各組隨機(jī)選取3只用4%多聚甲醛固定1 d后，脫鈣液脫鈣，常規(guī)脫水，蠟塊包埋；剩下頜骨進(jìn)行修整并去除周?chē)浗M織，用PBS清洗干凈后室溫保存。取出末端回腸組織2 cm，PBS沖洗后，4%多聚甲醛固定1 d，常規(guī)脫水，蠟塊包埋。同時(shí)，取出大腦，PBS清洗后，低溫快速分離海馬組織，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.4 牙周炎模型檢測(cè) HE染色：牙槽骨蠟塊切成厚度為4 μm切片，自動(dòng)染色機(jī)染色后晾干，中性樹(shù)脂封片。亞甲藍(lán)染色：去除頜骨軟組織，1%亞甲藍(lán)染液染色數(shù)秒后流水沖洗。晾干后用體式顯微鏡掃描，測(cè)量并記錄上頜第二磨牙頰、腭側(cè)釉牙骨質(zhì)界至牙槽嵴頂?shù)木嚯x(Cemento-enamel junction to alveolar bone crest，CEJ-ABC)，每側(cè)記錄近中、中央、遠(yuǎn)中3處位點(diǎn)，取平均值作為牙槽骨吸收量。

1.3.5 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)測(cè)定大鼠血清中IL-6、LPS水平 標(biāo)準(zhǔn)孔中按濃度梯度加入50 μL標(biāo)準(zhǔn)品，樣本孔中加入樣本稀釋液50 μL，所有孔加入酶標(biāo)劑，貼上封板膜，在37℃烘箱中放置60 min。撕掉封板模后甩去液體，吸水紙拍干，每孔加入適量洗滌劑靜置30 s后甩去，洗滌重復(fù)5次。將反應(yīng)底物混合溶液A、B依次加入每孔中，封板膜覆蓋避光，37℃烘箱中放置30 min。每孔加入終止液50 μL，使用酶標(biāo)儀測(cè)量吸光度。

1.3.6 回腸組織形態(tài) 回腸組織蠟塊切成厚度為5 μm切片，自動(dòng)染色機(jī)染色后晾干，中性樹(shù)脂封片。為評(píng)估腸道屏障的完整性，隨機(jī)選擇在100×放大鏡下HE染色的切片圖像。采用Image-Pro Plus軟件測(cè)量腸絨毛高度、腸隱窩深度，并計(jì)算腸絨毛高度與隱窩深度比值，以評(píng)價(jià)腸道絨毛的形態(tài)學(xué)特征。根據(jù)以往的研究，腸絨毛高度定義為腸絨毛頂端至相關(guān)腸隱窩口的距離，腸隱窩深度定義為腸隱窩口至其基底的距離[9]。

1.3.7 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)回腸occludin表達(dá) 回腸組織蠟塊切成厚度為5 μm切片，脫蠟后枸櫞酸鹽微波修復(fù)8 min，3%過(guò)氧化氫室溫孵育15 min，山羊血清封閉20 min，甩去山羊血清后滴加兔抗occludin多克隆抗體，4℃過(guò)夜后滴加二抗，室溫孵育20 min，顯色，流水沖洗終止反應(yīng)。蘇木素復(fù)染，1%鹽酸-酒精分化2 s，梯度脫水，晾干后封片。通過(guò)Image-Pro Plus軟件進(jìn)行光密度值分析。

1.3.8 免疫印跡法檢測(cè)海馬Aβ1-42表達(dá) 取30 mg海馬組織剪碎，加入裂解液400 μL，冰上裂解15 min后研磨，將勻漿于12 000 r/min、4℃離心15 min，取少量上清BCA法定量，剩余上清儲(chǔ)存于-80℃冰箱。根據(jù)測(cè)量蛋白濃度，于蛋白原液中加入蛋白上樣緩沖液及PBS，高溫變性10 min。取10 μL蛋白電泳分離，采用半干轉(zhuǎn)法將蛋白樣品轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯膜上。5%脫脂牛奶室溫下?lián)u床封閉2 h后添加Aβ1-42一抗(1∶1 000)，4℃過(guò)夜孵育。TBST洗膜后添加相應(yīng)二抗(1∶5 000)，37℃孵育1 h，曝光劑顯色。以β-actin為內(nèi)參蛋白，采用Imagelab軟件進(jìn)行灰度值分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(Mean±SEM)表示。Morris水迷宮逃避潛伏期實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用重復(fù)測(cè)量方差分析，其他實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)組間比較使用單因素方差分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型建立 HE結(jié)果顯示C、AD組表現(xiàn)為正常牙周組織，牙齦上皮完整，結(jié)合上皮位置正常，牙槽骨未見(jiàn)吸收。P組上頜第二磨牙結(jié)合上皮向根方遷移，附著喪失，溝內(nèi)上皮出現(xiàn)潰瘍、壞死，部分增生呈網(wǎng)眼狀，牙槽嵴頂降低(見(jiàn)圖1)。

A:×40；B:×200。圖1 牙槽骨HE染色

各組牙槽骨亞甲藍(lán)染色后，經(jīng)體視顯微鏡記錄后牙牙槽骨的吸收程度，結(jié)果表明P組上頜第二磨牙牙槽骨吸收較C、AD組嚴(yán)重(P<0.05)；AD組與C組牙槽骨吸收程度相似(P>0.05，見(jiàn)圖2)。

A:牙槽骨亞甲藍(lán)染色；B:牙槽骨吸收量；*:與C組比較， P <0.05；+:與 P組比較， P <0.05；n=4。圖2 牙槽骨亞甲藍(lán)染色及統(tǒng)計(jì)結(jié)果

2.2 實(shí)驗(yàn)性牙周炎對(duì)大鼠空間記憶能力的影響 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明各組大鼠平均逃避潛伏期隨著訓(xùn)練增加而逐日變短。圖3A結(jié)果顯示，第3、4天P組及AD組逃避潛伏期明顯長(zhǎng)于C組(P<0.05)。在第5天的空間探索實(shí)驗(yàn)中，與C組相比，P組及AD組目標(biāo)象限停留百分比及穿越平臺(tái)次數(shù)均下降(P<0.05，見(jiàn)圖3B、C)。

A:平均逃避潛伏期；B:目標(biāo)象限停留百分比；C:穿越平臺(tái)次數(shù);*:與C組比較， P <0.05；n=6～9。圖3 水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 實(shí)驗(yàn)性牙周炎對(duì)大鼠血清IL-6、LPS濃度的影響 血清IL-6濃度，P組、AD組高于C組(P<0.05，見(jiàn)圖4A)；血清LPS濃度，P組高于C、AD組(P<0.05，見(jiàn)圖4B)。

A:血清IL-6濃度；B:血清LPS濃度；*:與 C組比較， P <0.05；+:與 P組比較， P<0.05；n=6。圖4 實(shí)驗(yàn)性牙周炎對(duì)大鼠血清IL-6、LPS濃度的影響

2.4 實(shí)驗(yàn)性牙周炎對(duì)回腸絨毛組織形態(tài)的影響 HE結(jié)果顯示：C組腸絨毛呈指狀未見(jiàn)水腫，結(jié)構(gòu)正常。P組、AD組腸絨毛變粗變鈍，粘膜層可見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(見(jiàn)圖5A)。與C組相比，P組、AD組腸絨毛高度(Intestinal villus height，V)降低(P<0.05，見(jiàn)圖5B)；3組腸隱窩深度(Intestinal crypt depth，C)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見(jiàn)圖5C)；與C組相比，P組、AD組腸絨毛高度與隱窩深度之比(V/C)降低(P<0.05，見(jiàn)圖5D)。

A:腸部HE染色；B:腸絨毛高度；C:腸隱窩深度；D:絨毛高度與隱窩深度比值；*:與 C組比較，P <0.05；n=6。圖5 實(shí)驗(yàn)性牙周炎對(duì)回腸絨毛組織形態(tài)的影響

2.5 實(shí)驗(yàn)性牙周炎對(duì)回腸occludin表達(dá)的影響 顯微鏡下觀察回腸組織中occludin蛋白的表達(dá)，腸黏膜上皮層和腺體中棕黃色為陽(yáng)性表達(dá)。occludin位于胞膜和靠近胞膜的胞漿中。與C組相比，P組、AD組occludin蛋白表達(dá)降低(P<0.05，見(jiàn)圖6)。

A:回腸免疫組織化學(xué)染色(×200)；B:平均光密度值統(tǒng)計(jì)結(jié)果；*:與 C組比較，P <0.05;+:與P組比較，P<0.05；n=3。圖6 實(shí)驗(yàn)性牙周炎對(duì)回腸occludin表達(dá)的影響

2.6 實(shí)驗(yàn)性牙周炎對(duì)海馬Aβ1-42含量的影響 與C相比，P組及AD組Aβ1-42表達(dá)增加(P<0.05)。與P組相比，AD組Aβ1-42表達(dá)增加(P<0.05，見(jiàn)圖7)。

A:大鼠海馬Aβ1-42蛋白表達(dá)情況；B:大鼠Aβ1-42蛋白表達(dá)統(tǒng)計(jì)結(jié)果； *:與 C組比較，P<0.05；+:與 P組比較，P<0.05；n=3。圖7 實(shí)驗(yàn)性牙周炎對(duì)大鼠海馬Aβ1-42含量的影響

3 討論

牙周炎是由于菌斑微生物的改變以及炎癥介質(zhì)的釋放，最終導(dǎo)致牙周結(jié)締組織附著破壞和牙槽骨吸收的炎癥性疾病。模擬動(dòng)物牙周炎的各種方法中，結(jié)扎誘導(dǎo)是最常用的模型。絲線結(jié)扎可導(dǎo)致菌斑堆積，發(fā)生類(lèi)似于臨床中觀察到的附著喪失和骨吸收等癥狀。本研究對(duì)上頜第一、二磨牙進(jìn)行結(jié)扎處理2個(gè)月，經(jīng)HE染色及亞甲藍(lán)染色結(jié)果表明，P組較C組有更嚴(yán)重的牙槽骨吸收等病理改變，證實(shí)大鼠牙周炎模型構(gòu)建成功。AD組與C組相比，在牙槽骨吸收方面無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。然而，臨床上AD患者通常表現(xiàn)出更嚴(yán)重的牙周炎，這在一定程度上是合理的，因?yàn)樵诎V呆進(jìn)展過(guò)程中，患者認(rèn)知能力和自我管理的能力將逐漸喪失。本研究中AD組未見(jiàn)明顯的牙槽骨吸收，可能與造模時(shí)間有關(guān)。

AD主要的病理特征是細(xì)胞外Aβ沉積形成老年斑(Senile plaque,SP)和細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)元纖維纏結(jié)(Neurofibrillary tangles,NFT)的形成[10]。Aβ25-35是Aβ完整肽鏈的關(guān)鍵片段，可以產(chǎn)生相同的神經(jīng)毒性效應(yīng)[11]。已有研究表明雙側(cè)海馬或側(cè)腦室注射Aβ25-35可以誘導(dǎo)大鼠出現(xiàn)AD學(xué)習(xí)記憶障礙，該模型已被廣泛應(yīng)用于AD研究[12]。本研究通過(guò)腦部雙側(cè)側(cè)腦室注射Aβ25-35誘導(dǎo)大鼠AD模型來(lái)研究牙周炎對(duì)學(xué)習(xí)記憶功能障礙的影響。Aβ是細(xì)胞外沉積物，主要由錯(cuò)誤折疊的Aβ1-40和Aβ1-42組成。本研究AD組與C組相比，海馬Aβ1-42表達(dá)水平顯著增加，這與Aβ25-35誘導(dǎo)大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙并伴隨較高的Aβ1-42蛋白水平的報(bào)道相一致[13]。并且，水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示AD組與C組相比，在目標(biāo)象限停留的百分比及穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少。這些研究結(jié)果說(shuō)明AD模型建立成功。

IL-6在AD中的記憶和代謝失調(diào)中具有核心作用[14]。一項(xiàng)薈萃分析指出，與對(duì)照組相比，輕度認(rèn)知障礙和AD患者的腦脊液和血漿中IL-6均升高[15]。同樣，本研究中，與C組相比，AD組IL-6水平升高。此外，與C組相比，P組IL-6水平升高。牙齦卟啉單胞菌是牙周炎公認(rèn)致病菌之一，LPS是其主要毒力因子。腸道作為下消化道的一部分，與口腔有著密切的聯(lián)系。在腸道中，LPS被認(rèn)為是導(dǎo)致腸道屏障功能障礙的主要刺激物[16]。本研究發(fā)現(xiàn)P組LPS水平較C組、AD組增加，說(shuō)明牙周炎可導(dǎo)致外周血液IL-6及LPS水平升高。

腸道物理屏障主要由腸上皮細(xì)胞和緊密連接組成。occludin是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的緊密連接蛋白，對(duì)于維持腸上皮屏障的穩(wěn)態(tài)是必需的[17]。在患有克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎等涉及腸道通透性障礙疾病的臨床研究中以及在腸道炎癥疾病的動(dòng)物模型中都可以觀察到腸組織occludin表達(dá)顯著降低，這表明它在維持屏障完整性中具有關(guān)鍵作用[18-19]。此外，腸道絨毛高度、隱窩深度、V/C是腸道健康的指標(biāo)，常用于評(píng)估腸道形態(tài)功能的完整性。隱窩基底部存在腸干細(xì)胞，其增殖分化后可遷移至絨毛，以替換損傷的腸上皮細(xì)胞，隱窩深度增加是腸上皮受損的標(biāo)志[20]。若損傷的腸上皮過(guò)多，更新不足以修復(fù)則會(huì)導(dǎo)致腸絨毛高度降低。據(jù)報(bào)道，動(dòng)物早期斷奶應(yīng)激對(duì)腸屏障功能有破壞作用，其典型的病理表現(xiàn)為腸絨毛高度降低及隱窩深度增加[21]。本研究發(fā)現(xiàn)與C組相比，P組、AD組腸絨毛高度、V/C、occludin表達(dá)水平顯著降低，表明P組、AD組腸道屏障受損。越來(lái)越多的人認(rèn)識(shí)到促炎細(xì)胞因子，例如白細(xì)胞介素-1β、IL-6和腫瘤壞死因子-α等也參與了調(diào)節(jié)腸道屏障，它們可導(dǎo)致腸黏膜緊密連接的通透性增加[22]。促炎細(xì)胞因子的過(guò)度釋放通過(guò)誘導(dǎo)腸形態(tài)損傷、減少腸部緊密連接、促進(jìn)上皮細(xì)胞凋亡和阻止上皮恢復(fù)等不同的機(jī)制在導(dǎo)致腸屏障功能障礙中起著至關(guān)重要的作用[23]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)腹腔注射LPS會(huì)導(dǎo)致小鼠回腸絨毛高度降低[9]。因此，本研究中腸部HE及免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示P組發(fā)生與AD組類(lèi)似的腸粘膜屏障受損，可能是牙周炎導(dǎo)致腸道外周血液中的促炎細(xì)胞因子IL-6、LPS濃度增高所致。本研究發(fā)現(xiàn)AD組大鼠腸黏膜屏障受損，與Shukla等[24]研究發(fā)現(xiàn)AD轉(zhuǎn)基因模型小鼠相較于非轉(zhuǎn)基因小鼠表現(xiàn)出腸道屏障功能受損的結(jié)果一致。

本研究水迷宮實(shí)驗(yàn)中，與C組相比，P組逃避潛伏期延長(zhǎng)，目標(biāo)象限停留百分比及穿越平臺(tái)次數(shù)下降，說(shuō)明P組大鼠認(rèn)知行為能力顯著下降，發(fā)生與AD類(lèi)似的行為學(xué)改變。并且，相較于C組，P組海馬Aβ1-42表達(dá)水平增加。這些結(jié)果表明牙周炎可導(dǎo)致大鼠認(rèn)知障礙。腸-腦軸是指腸道微生物群和中樞神經(jīng)系統(tǒng)之間復(fù)雜的雙向相互作用，涉及代謝、內(nèi)分泌、神經(jīng)和免疫等途徑，對(duì)維持大腦穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要[25]。有研究表明腸上皮屏障功能障礙可引起宿主免疫系統(tǒng)的變化，導(dǎo)致腸道微生物重塑，從而促進(jìn)腸道菌群失調(diào)[26]。腸上皮功能障礙和菌群失調(diào)可以獨(dú)立或協(xié)同作用，影響對(duì)胃腸和胃腸外病變的免疫反應(yīng)[27]。當(dāng)腸道屏障受損、通透性增加時(shí)，會(huì)使腸道微生物、微生物衍生代謝物和微生物相關(guān)分子模式易位到腸系膜淋巴組織，從而引起神經(jīng)炎癥反應(yīng)，進(jìn)而造成神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生和發(fā)展[28]。此外，Honarpisheh等[29]通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)基因小鼠及同齡野生型小鼠在不同時(shí)間段進(jìn)行腦部Aβ及腸上皮緊密連接蛋白表達(dá)水平檢測(cè)，證實(shí)了轉(zhuǎn)基因小鼠腸部屏障功能障礙發(fā)生在腦部出現(xiàn)Aβ沉積之前。因此，受損的腸道黏膜屏障可能通過(guò)腸-腦軸導(dǎo)致大腦神經(jīng)炎癥進(jìn)而影響AD的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，牙周局部炎癥刺激可能通過(guò)增加循環(huán)毒力因子和炎癥介質(zhì)水平影響腸屏障，進(jìn)而通過(guò)腦腸軸影響AD發(fā)生發(fā)展。然而，牙周炎影響AD的具體機(jī)制還未明了，需進(jìn)一步深入研究。