郭勇
菏澤市立醫(yī)院乳腺甲狀腺外科,山東菏澤 274000
作為一種甲狀腺惡性結(jié)節(jié)之中最為常見(jiàn)的病理類(lèi)型, 甲狀腺乳頭狀癌患者在早期并沒(méi)有顯著的不適癥狀,進(jìn)行初診時(shí),無(wú)法發(fā)現(xiàn)其存在的異常情況[1]。目前在臨床中對(duì)甲狀腺疾病首選的診斷方式是常規(guī)超聲檢查,其具備敏感度較高、無(wú)創(chuàng)傷、無(wú)輻射以及簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn),但也存在特異度較低等缺點(diǎn)[2]。 而作為常規(guī)超聲檢查的重要補(bǔ)充, 液基細(xì)胞學(xué) (liquidbased cytology,LBC)檢查在對(duì)惡良性結(jié)節(jié)鑒別時(shí),病理生理的基礎(chǔ)便在解剖結(jié)構(gòu)和空間分布之中微血管的差異[3-4]。而在B-Raf 原癌基因(B-Rafprotooncogene,BRAF)中,最為常見(jiàn)的突變便是第600 位密碼子突變(V600E)。 同時(shí)BRAF V600E 基因突變同時(shí)也是甲狀腺癌的一種常見(jiàn)基因突變類(lèi)型, 在甲狀腺乳頭狀癌中占據(jù)高達(dá)80%, 與甲狀腺癌的侵襲程度具有直接關(guān)系[5-7]?,F(xiàn)階段,臨床中對(duì)于甲狀腺乳頭狀癌患者采取LBC 聯(lián)合BRAF V600E 基因檢測(cè)的研究較少。基于此,該文選取2017 年11 月—2019年11 月該院收治的98 例疑似甲狀腺乳頭狀癌患者為研究對(duì)象,對(duì)LBC 聯(lián)合BRAF V600E 基因檢測(cè)在甲狀腺乳頭狀癌診斷中的應(yīng)用效果進(jìn)行分析探究?,F(xiàn)報(bào)道如下。
隨機(jī)抽取該院98 例疑似甲狀腺乳頭狀癌患者,為研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。 患者年齡20~53 歲,平均(34.1±2.12)歲;男46 例,女52 例;病灶直徑0.4~0.9 cm,平均(0.63±0.15)cm;體質(zhì)量51~83 kg,平均(77.12±4.23)kg;病程1~5 個(gè)月,平均(2.28±0.15)個(gè)月。 該研究由該院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)開(kāi)展。
納入標(biāo)準(zhǔn): ①患者存在甲狀腺乳頭狀癌相關(guān)癥狀; ②實(shí)施的手術(shù)方式為甲狀腺全切術(shù)以及甲狀腺次全切術(shù)。
排除標(biāo)準(zhǔn):①診斷回聲顯示,并不是低回聲的結(jié)節(jié);②結(jié)節(jié)的最大直徑>1 cm;③結(jié)節(jié)中存在粗大鈣化, 并且結(jié)節(jié)的成分不能顯示; ④合并有多發(fā)性結(jié)節(jié);⑤合并有嚴(yán)重的心肺功能損傷,無(wú)法使用超聲造影檢查;⑥術(shù)后病理診斷,發(fā)現(xiàn)其為單純性或者結(jié)節(jié)性甲狀腺腫大等非腫塊病癥。
常規(guī)超聲檢查:使用彩色多普勒超聲診斷儀,使用的探頭頻率設(shè)置為15 MHz,機(jī)械指數(shù)設(shè)定在0.08~0.14 之間。 其總增益應(yīng)在88%左右,深度3 mm。 臨床醫(yī)師應(yīng)引導(dǎo)患者完全暴露其頸部, 利用常規(guī)灰階超聲,對(duì)患者甲狀腺區(qū)域進(jìn)行掃描,具體應(yīng)包含結(jié)界內(nèi)部回聲、結(jié)節(jié)內(nèi)部、結(jié)節(jié)邊界、患者血液循環(huán)、結(jié)節(jié)的形態(tài)和大小、結(jié)節(jié)周?chē)M織的病變狀況等內(nèi)容。
在超聲的引導(dǎo)之下,將細(xì)針傳入到目標(biāo)結(jié)節(jié),隨后將針芯拔出, 在結(jié)節(jié)內(nèi)部沿不同方向使用穿刺針進(jìn)行快速穿插, 數(shù)次后利用虹吸原理將甲狀腺結(jié)節(jié)細(xì)胞進(jìn)行吸取,在囊實(shí)性結(jié)節(jié)中穿取實(shí)性部位細(xì)胞,隨后對(duì)穿刺標(biāo)本立刻進(jìn)行BRAF V600E 基因聯(lián)合LBC 檢測(cè)。 其中穿刺標(biāo)本應(yīng)使用95%無(wú)水乙醇濕法進(jìn)行固定,采取蘇木精-伊紅染色法進(jìn)行染色,隨后在顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞學(xué)診斷。
LBC 檢查: 將30 mL 細(xì)胞保存液直接注入穿刺標(biāo)本中,進(jìn)行離心后去上清液,將膠質(zhì)、黏液以及血細(xì)胞成分去除,使用自動(dòng)液基細(xì)胞制片儀進(jìn)行制片、封片以及HE 染色,在顯微鏡下實(shí)施細(xì)胞學(xué)診斷。
BRAF V600E 基因檢測(cè):將含有800 μl RNA later 保存液注入穿刺標(biāo)本中, 并在PRC 管之中實(shí)施BRAF V600E 基因檢測(cè)。在進(jìn)行DNA 分離之后,將樣本基因組DNA 進(jìn)行提取,隨后利用aRT-PCR,實(shí)現(xiàn)基因擴(kuò)增,使用擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)法,以及BRAF V600E基因突變?cè)噭┖?,?shí)施BRAF V600E 基因檢測(cè)。
手術(shù)病理診斷:對(duì)于活檢組織進(jìn)行HE 染色,在低倍鏡下對(duì)患者的內(nèi)部回聲以及病灶形態(tài)進(jìn)行觀察,使用高倍鏡觀察患者的細(xì)胞和組織具體情況?;颊呷绻诘捅剁R下出現(xiàn)砂礫體, 應(yīng)使用高倍鏡進(jìn)行檢查,將砂礫體的數(shù)量進(jìn)行記錄,并且觀察患者結(jié)節(jié)組織的結(jié)構(gòu)、數(shù)量、邊界以及形態(tài)。
將患者的手術(shù)病理診斷結(jié)果作為診斷的金標(biāo)準(zhǔn),對(duì)患者采取常規(guī)超聲和LBC 聯(lián)合BRAF V600E基因檢測(cè)的特異度、敏感度、準(zhǔn)確度進(jìn)行對(duì)比分析。其中準(zhǔn)確度為診斷結(jié)果中真陰性和真陽(yáng)性之和所占的比值; 敏感度為真陽(yáng)性在真陽(yáng)性與假陰性之和中所占的比值; 特異度則是真陰性在真陰性與假陽(yáng)性例數(shù)中所占的比值。
采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù), 符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用(±s)表示,采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用[n(%)]表示,采用χ2檢驗(yàn),P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
98 例患者在進(jìn)行手術(shù)病理診斷后,其中甲狀腺乳頭狀癌為90 例,剩余8 例患者為其他疾病。 而常規(guī)超聲診斷檢查結(jié)果為甲狀腺乳頭狀癌患者86 例,剩余12 例患者為其他疾??;LBC 聯(lián)合BRAF V600E基因檢測(cè)結(jié)果為甲狀腺乳頭狀癌患者88 例, 剩余10 例為其他疾病。
經(jīng)常規(guī)超聲檢查后, 特異度為25.00%(2/8)、敏感度為88.89%(80/90)、 準(zhǔn)確度為83.67%(82/98);經(jīng)LBC 聯(lián)合BRAF V600E 基因檢測(cè)后, 特異度為87.50%(7/8)、 敏感度為96.67%(87/90)、 準(zhǔn)確度為95.92%(94/98)。 相較常規(guī)超聲檢查,LBC 聯(lián)合BRAF V600E 基因檢測(cè)結(jié)果更為準(zhǔn)確, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.063、4.063、8.018,P=0.044、0.044、0.005)。見(jiàn)表1、表2。
表1 常規(guī)超聲檢查的特異度與敏感性
表2 LBC 聯(lián)合BRAF V600E 基因檢測(cè)的特異度與敏感性
近些年, 對(duì)甲狀腺結(jié)節(jié)患者進(jìn)行超聲引導(dǎo)下行細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢查樣本實(shí)施BRAF V600E 檢測(cè)進(jìn)行了大量研究,但研究結(jié)果卻具有較為顯著的差異。臨床研究文獻(xiàn)可知, 采取BRAF V600E 基因突變檢測(cè)能夠有效提升對(duì)甲狀腺結(jié)節(jié)診斷的準(zhǔn)確度, 且能夠在術(shù)前對(duì)病危病例進(jìn)行相應(yīng)篩查[8]。在對(duì)甲狀腺乳頭狀癌患者檢測(cè)時(shí),研究文獻(xiàn)結(jié)果顯示,癌灶形態(tài)以及數(shù)量存在差異時(shí), 中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和BRAF V600E 基因并無(wú)明顯的相關(guān)性, 表示采取BRAF V600E 基因突變狀態(tài)對(duì)甲狀腺乳頭狀癌患者臨床病例特征影響并不明確[9]。
作為一種操作簡(jiǎn)便的診斷方式, 常規(guī)超聲對(duì)于甲狀腺乳頭狀癌的診斷敏感性較低, 并且較易受到患者病灶邊界、操作者水平、血流信號(hào)以及鈣化直徑等因素的影響[10]。采取LBC 檢測(cè),則是將穿刺標(biāo)本沖洗到細(xì)胞保存液之中,在進(jìn)行多次的振蕩離心后,將標(biāo)本中的膠質(zhì)、 血細(xì)胞以及細(xì)胞碎片等相關(guān)干擾成分取出, 利用液基自動(dòng)制片設(shè)備進(jìn)行制片, 在玻片13 mm 直徑范圍內(nèi)黏附濃縮細(xì)胞和診斷成分, 進(jìn)一步保障診斷的準(zhǔn)確性[11-13]。 但需要注意的是,LBC 在制片時(shí),存在離心和振蕩過(guò)程,可能會(huì)導(dǎo)致患者細(xì)胞簇分散,產(chǎn)生大量的單個(gè)細(xì)胞。并且該過(guò)程對(duì)細(xì)胞質(zhì)也會(huì)產(chǎn)生影響,增大核質(zhì)比例,產(chǎn)生大量裸核,對(duì)準(zhǔn)確度造成影響[14-16]。 因此單獨(dú)使用LBC 存在一定的問(wèn)題。 而在甲狀腺乳頭狀癌中BRAF V600E 基因檢測(cè)突變較為常見(jiàn),BRAF V600E 基因可以將細(xì)胞外刺激信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞中,從而引起一系列的細(xì)胞反應(yīng),例如對(duì)細(xì)胞分化、死亡、增殖、轉(zhuǎn)移等功能的調(diào)控[17]。 所以臨床中,常會(huì)選擇聯(lián)合兩種方式實(shí)施檢測(cè),提高檢測(cè)準(zhǔn)確度。
該研究結(jié)果可知,LBC 聯(lián)合BRAF V600E 基因檢測(cè)后,特異度為87.50%(7/8)、敏感度為96.67%(87/90)、準(zhǔn)確度為95.92%(94/98),優(yōu)于單一檢測(cè)結(jié)果。黃建新等[14]學(xué)者在相關(guān)研究中得出,聯(lián)合檢測(cè)的敏感度為97.37%、特異度為100.00%明顯優(yōu)于單一檢測(cè),與該文所得結(jié)果相近。 因此,聯(lián)合檢測(cè)可以顯著提高甲狀腺乳頭狀癌患者的診斷準(zhǔn)確性, 避免錯(cuò)過(guò)最佳時(shí)間,彌補(bǔ)單純常規(guī)超聲的診斷不足[18]。
綜上所述, 對(duì)于甲狀腺乳頭狀癌患者采取LBC聯(lián)合BRAF V600E 基因檢測(cè)鑒別價(jià)值高, 能夠提高甲狀腺乳頭狀癌診斷的準(zhǔn)確率,值得推廣。