李俊娜，韓曉亮，謝東文，趙根成

(安陽(yáng)市第五人民醫(yī)院綜合科，河南安陽(yáng) 455000)

原發(fā)性肝癌是源于肝細(xì)胞或肝內(nèi)膽管細(xì)胞的惡性腫瘤，在中國(guó)發(fā)病率較高。盡管現(xiàn)代診療手段越來(lái)越全面，仍無(wú)法改變患者確診時(shí)間晚、治療后復(fù)發(fā)率高、遠(yuǎn)期療效差的現(xiàn)狀[1]。闡明肝癌的發(fā)生機(jī)制對(duì)于臨床診斷、治療和隨訪監(jiān)測(cè)均具有重要意義。人類(lèi)基因是目前臨床研究的重點(diǎn)，miRNA在各種類(lèi)型的腫瘤中的表達(dá)呈異常[2]。研究發(fā)現(xiàn)，miR-493-5p在肺癌、前列腺癌等惡性腫瘤中的表達(dá)量呈明顯下調(diào)狀態(tài)，但其在肝癌患者中的表達(dá)及與肝癌患者病情進(jìn)展的關(guān)系仍未明確，臨床尚缺乏相關(guān)研究[3]。膽堿脂酶（cholinesterase，CHE）是臨床用于反映肝細(xì)胞蛋白質(zhì)合成及儲(chǔ)備功能的常用指標(biāo)[4]。高爾基體糖蛋白73（golgi glycoprotein73，GP73）在臨床診斷原發(fā)性肝癌中已做出極大貢獻(xiàn)，是篩查的肝癌的常用生化標(biāo)志物之一，其在健康人群中不表達(dá)或少量表達(dá)[5]。目前miR-493-5p、CHE聯(lián)合GP73檢測(cè)在肝癌篩查中的研究較少，本研究旨在探討3項(xiàng)指標(biāo)在肝癌患者癌組織中的表達(dá)情況，并分析3者在肝癌患者病情評(píng)估中的作用?，F(xiàn)研究報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

整理2015年7月～2019年7月安陽(yáng)市第五人民醫(yī)院收治的肝癌患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均經(jīng)病理檢查確診為原發(fā)性肝癌[6]；（2）經(jīng)影像學(xué)檢查（CT/MRI）檢查未發(fā)現(xiàn)腫瘤出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；（3）納入研究前未接受過(guò)抗腫瘤治療；（4）預(yù)計(jì)生存期在6個(gè)月以上。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）納入合并其他重要器官?lài)?yán)重疾病者；（2）因免疫系統(tǒng)疾病誘發(fā)的肝癌者；（3）納入研究前1個(gè)月內(nèi)服用過(guò)激素藥物治療者。本研究最終納入98例患者作為觀察組（臨床分期：早期31例、中期35例、晚期32例），選取同期本院的健康體檢者104例作為對(duì)照組。對(duì)照組男61例、女43例；年齡51～78歲，平均年齡（65.09±7.34）歲；觀察組男57例、女41例；年齡53～79歲，平均年齡（65.33±7.11）歲；平均ECOG評(píng)分（1.51±0.31）分；平均腫瘤大?。?.95±1.41）cm，兩組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 miR-493-5p檢測(cè)方法 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性法對(duì)miR-493-5p進(jìn)行檢測(cè)。miR-493-5p引物序列TTGTACATGGTAGGCTTTCATTPCR（由上海生工生物工程有限公司合成）。循環(huán)參數(shù)：94℃預(yù)變性3min；94℃變性45s，退火（溫度依次為56℃、58℃、58℃）45s，72℃延伸40s，循環(huán)40次，總延伸72℃，10min。

1.2.2 CHE、GP73檢測(cè)方法 觀察組于入院后次日清晨，對(duì)照組于體檢當(dāng)日清晨，空腹抽取肘靜脈血5ml。采用丁?；虼憠A法測(cè)定CHE水平，檢測(cè)儀器為德國(guó)西門(mén)子公司ADVIA2400型全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑。GP73選擇電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢驗(yàn)，檢測(cè)儀器采用美國(guó)雅培2000發(fā)光儀，相關(guān)試劑盒來(lái)自廣州陽(yáng)普醫(yī)療提供的公司，嚴(yán)格依據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3 觀察指標(biāo)

比較不同組別之間miR-493-5p、CHE、GP73表達(dá)情況，通過(guò)繪制受試者工作特征曲線(xiàn)（receiver operating characteristic curve, ROC）分析3者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肝癌患者病情進(jìn)展的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 肝癌患者及健康人群miR-493-5p相對(duì)表達(dá)量及CHE、GP73水平比較

觀察組miR-493-5p、CHE水平低于對(duì)照組，GP73水平高于對(duì)照組，比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 肝癌患者及健康人群miR-493-5p相對(duì)表達(dá)量及CHE、GP73水平比較

表1 肝癌患者及健康人群miR-493-5p相對(duì)表達(dá)量及CHE、GP73水平比較

與對(duì)照組比較，*P＜0.05。

組別 miR-493-5p CHE（U/L） GP73（ng/L）對(duì)照組（n=104） 3445.23±479.53 7714.23±541.84 19.65±1.58觀察組（n=98） 1677.43±355.77* 2345.65±247.46* 229.65±14.85*

2.2 不同臨床分期的肝癌患者miR-493-5p相對(duì)表達(dá)量及CHE、GP73水平比較

miR-493-5p相對(duì)表達(dá)量及CHE水平比較：早期＞中期＞中晚期，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；GP73水平比較：早期＜中期＜晚期，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 不同臨床分析的肝癌患者miR-493-5p相對(duì)表達(dá)量及CHE、GP73水平比較

表2 不同臨床分析的肝癌患者miR-493-5p相對(duì)表達(dá)量及CHE、GP73水平比較

與早期比較，*P＜0.05；與中期比較，#P＜0.05。

組別 miR-493-5p CHE（U/L） GP73（ng/L）早期（n=31） 1914.35±374.58 2641.25±288.74 199.38±11.10中期（n=35） 1671.54±384.93* 2386.67±250.21* 232.72±14.88*晚期（n=32） 1454.36±305.65*# 2014.42±204.46*# 255.62±18.45*#

2.3 聯(lián)合miR-493-5p、CHE、GP73檢測(cè)對(duì)肝癌患者病情嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)價(jià)值

聯(lián)合miR-493-5p、CHE、GP73檢測(cè)靈敏度、特異度、AUC分別為92.10%、94.50%、0.960，均高于單一指標(biāo)檢測(cè)，比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3，附圖。

表3 聯(lián)合miR-493-5p、CHE、GP73檢測(cè)對(duì)肝癌患者病情嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)價(jià)值

附圖 聯(lián)合miR-493-5p、CHE、GP73檢測(cè)對(duì)肝癌患者病情嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討論

目前，原發(fā)性肝癌的病因及發(fā)病機(jī)制尚未明確，但考慮與病毒性肝炎、肝硬化、遺傳因素等有關(guān)[7,8]。因原發(fā)性肝癌具有侵襲性強(qiáng)、易復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性，發(fā)病率及死亡率極高，嚴(yán)重威脅人類(lèi)的生命安全。通過(guò)血清腫瘤標(biāo)志物對(duì)肝癌進(jìn)行篩查，并及時(shí)評(píng)估肝癌患者病情，對(duì)改善患者預(yù)后極為重要。

miR可通過(guò)調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)編碼而與信使RNA的特定序列結(jié)合抑制翻譯、剪切RNA轉(zhuǎn)錄物，實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)調(diào)控[9]。目前國(guó)內(nèi)關(guān)于miR-493-5p與惡性腫瘤的研究較少，但已有學(xué)者報(bào)道m(xù)iR-493-5p在肝癌患者中血清表達(dá)異常，推測(cè)正常表達(dá)量的miR-493-5p可抑制腫瘤生長(zhǎng)、進(jìn)展[10]。CHE是非特異性酯酶類(lèi)，以多種同工酶形式存在于體內(nèi)，CHE僅能在肝臟內(nèi)被合成。若肝細(xì)胞出現(xiàn)損傷，會(huì)導(dǎo)致肝臟酶合成能力下降，對(duì)CHE的合成能力減弱，使血清CHE水平降低[11,12]。GP73高爾基體蛋白屬于跨膜蛋白，已有研究指出，在肝癌患者中，GP73水平呈顯著上升，為肝癌患者肝細(xì)胞壞死導(dǎo)致GP73從順面膜囊游離出來(lái)，進(jìn)入細(xì)胞表面，大量GP73進(jìn)入血液所致[13-15]。本研究中，觀察組miR-493-5p、CHE水平低于對(duì)照組，GP73水平高于對(duì)照組，與既往研究報(bào)道結(jié)果相符[16]。可見(jiàn)在肝癌患者中，miR-493-5p、CHE表達(dá)均處于低水平狀態(tài)，GP73處于高水平狀態(tài)，推測(cè)miR-493-5p、CHE低表達(dá)及GP73高表達(dá)可能與肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)、進(jìn)展有關(guān)。

研究表明，miR-493-5p過(guò)表達(dá)可以逆轉(zhuǎn)惡性腫瘤間質(zhì)至上皮過(guò)渡的進(jìn)程，從而抑制癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[17]。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道顯示，血清CHE與肝臟儲(chǔ)備及合成功能存在明顯相關(guān)性，肝癌患者均存在不同程度的CHE活性降低[18,19]。孫艷華等[20]發(fā)現(xiàn)，GP73與肝癌細(xì)胞的增殖及侵襲有關(guān)，GP73基因沉默能抑制肝癌細(xì)胞的遷移及侵襲。為了進(jìn)一步分析miR-493-5p、CHE、GP73在評(píng)估肝癌患者病情進(jìn)展中的作用，對(duì)不同肝功能分級(jí)的肝癌患3項(xiàng)指標(biāo)表達(dá)情況進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，miR-493-5p相對(duì)表達(dá)量及CHE水平比較：早期＞中期＞晚期；GP73水平比較：早期＜中期＜晚期?？梢?jiàn)miR-493-5p、CHE及GP73與肝癌患者病情進(jìn)展密切相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)上述觀點(diǎn)。ROC曲線(xiàn)示，聯(lián)合miR-493-5p、CHE、GP73檢測(cè)靈敏度、特異度、AUC分別為92.10%、94.50%、0.960，均高于單一指標(biāo)檢測(cè)。由此可見(jiàn)，聯(lián)合3項(xiàng)指標(biāo)靈敏度、特異度相對(duì)較高，能顯著提高肝癌診斷準(zhǔn)確率，在尚未找到更佳特異性標(biāo)志物之前，3者有望成為診斷肝癌最合適的腫瘤標(biāo)志物。

綜上所述，肝癌患者血清miR-493-5p、CHE處于較低水平，GP73處于較高水平。臨床可加強(qiáng)聯(lián)合miR-493-5p、CHE、GP73檢測(cè)，用于診斷早期肝癌，評(píng)估患者病情進(jìn)展情況。